转基因“华番一号”番茄的筛选和特异性的定性、定量PCR检测方法

为给转基因植物监测提供技术支持 ,建立了转基因“华番一号”番茄筛选和特异性的定性、定量PCR检测方法。转基因“华番一号”的筛选PCR检测主要以转基因通用元件CaMV35S启动子和NOS终止子为目的基因片段 ,特异性PCR检测以转基因外源重组子的CaMV35S启动子和反义EFE基因的相邻序列为目的片段 ;实验同时设立番茄的LAT5 2基因为转基因番茄定性、定量PCR检测的内对照基因。在所建立的PCR检测体系中 ,定性PCR筛选和特异性检测的检测极限为 6 8个拷贝 ,实时定量PCR方法的检测极限为 3个拷贝 ;筛选定量PCR检测的定量极限为 3个拷贝 ,特异性定量PCR检测的定量极限为 2 5个拷贝。最后通过对 2个已知含量的转基因番茄“华番一号”混合试样的检测 ,证明了该体系可以有效地用于转基因番茄“华番一号”的筛选和特异性的定性、定量PCR检测。