鸡传染性法氏囊病病毒BJQBJQ902株在悬浮培养DF-DF-1细胞上的增殖特性研究

为探讨鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)BJ902株感染复数(Multiplicity of infection,MOI)、接种时间和维持液三种因素对在悬浮培养DF-1细胞上的病毒滴度影响,分别以不同MOI的IBDV BJQ902株感染悬浮培养24 h的DF-1细胞,以0.005 MOI的IBDV BJQ902株感染悬浮培养不同时间的DF-1细胞,然后以含2%胎牛血清(FBS)的高糖DMEM(HG-DMEM)作为维持液进行培养,观察感染后不同时间的细胞病变、收获感染不同时间的病毒液。以0.005 MOI感染悬浮培养24 h的DF-1细胞,然后使用含2%FBS的不同维持液(MEM、HG-DMEM、LG-DMEM)进行病毒增殖,收获不同时间的病毒液,测定病毒液的TCID_(50)。结果显示,以0.005 MOI的IBDV BJQ902种毒接种悬浮培养24 h的DF-1细胞,维持液为2%FBS的HG-DMEM进行病毒增殖,病毒接种后24~36 h收获的病毒毒价可达10^(8.3) TCID_(50)/0.1 m L以上。表明IBDV BJQ902株可以在微载体悬浮培养的DF-1细胞上高密度增殖。

鸡传染性法氏囊病病毒BJQ902株在DF-1细胞系上增殖工艺研究

试验旨在通过DF-1细胞增殖获得高效价的鸡传染性法氏囊病病毒（infectious bursal disease virus,IBDV）抗原。通过病毒接种量、收毒时间、接毒时间、温度和维持液血清浓度5个培养条件的筛选和优化,对IBDV BJQ902株在DF-1细胞上的增殖工艺进行了研究。结果表明,IBDV BJQ902株在DF-1细胞上最佳增殖条件为：在37℃条件下培养,接毒量在0.01%～0.1%之间,接种时间为细胞传代后生长48～72h,维持液血清浓度为1%～2%,收毒时间为病毒接种后60～72h。在此培养条件下增殖病毒毒价在108.3～108.7 TCID50/0.1mL之间。

鸡传染性法氏囊病病毒BJQ902株对三种传代细胞敏感性的比较研究

为比较Vero、DF-1和MDCK三种传代细胞对鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)BJQ902株的敏感性。研究采用盲传的方法,将BJQ902株分别接种Vero、DF-1和MDCK细胞,连续传代至第8代(F8),收获每代次的病毒液测定TCID50,同时应用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR法检测病毒拷贝数,分析不同细胞对BJQ902株的敏感性。结果表明经过8代盲传后,收获的IBDV BJQ902株在DF-1细胞、Vero细胞和MDCK细胞培养的病毒液,使用CEF细胞测定病毒滴度分别为107.9TCID50/0.1 m L、106.5TCID50/0.1 m L和103.7TCID50/0.1 m L;SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR法检测表明IBDV在DF-1适应传代6代后,培养液的病毒拷贝数在106.5μL以上,而IBDV抗原拷贝数在Vero细胞和MDCK细胞培养液的拷贝数各代次均低于DF-1细胞。由此可见DF-1细胞对IBDV BJQ902株的敏感性高于Vero细胞和MDCK细胞。

鸡新城疫和传染性法氏囊病二联灭活疫苗的制备及检验

采用NDV La Sota株毒种接种鸡胚制备NDV抗原液,IBDV BJQ902细胞适应毒接种鸡胚成纤维细胞制备IBDV抗原液,用甲醛溶液灭活后,按一定比例混合,加入油佐剂乳化制成ND-IBD二联灭活疫苗。共制备了3批疫苗,对其进行各项检验。结果表明,疫苗无菌;外观为乳白色均匀乳剂,剂型为W/O/W型,黏度为1.0 s^1.2 s,粒度均匀,99%以上为1μm,个别为2μm^3μm,3 500 r/min离心15 min,管底出水在0.5 mm以下;疫苗安全性检验,接种24日龄~28日龄SPF鸡后,观察14 d,均无任何局部及全身不良反应;疫苗ND部分效检,免疫接种3周后ND HI抗体平均滴度为3.0~3.6 log2,攻毒后保护率分别为9/10、9/10和10/10,IBD部分效检免疫接种后4周,中和抗体滴度分别20 171、24 578及26 616,攻毒保护率均为100%(10/10)。结果证实3批疫苗均符合要求。