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BLCAP蛋白表达与骨肉瘤恶性程度的关系 被引量:6
1
作者 苏海川 赵玉红 +4 位作者 范德刚 范清宇 张鹏 文艳华 刘云燕 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期465-466,共2页
目的 :了解BLCAP蛋白表达与骨肉瘤恶性程度的关系。方法 :采用SABC法 ,对临床收集骨肉瘤病理标本进行检测 ,观察BLCAP蛋白表达情况 ,结合临床随访结果 ,判断BLCAP蛋白表达与骨肉瘤恶性程度之间的关系。结果 :BLCAP蛋白在原发骨肉瘤组织... 目的 :了解BLCAP蛋白表达与骨肉瘤恶性程度的关系。方法 :采用SABC法 ,对临床收集骨肉瘤病理标本进行检测 ,观察BLCAP蛋白表达情况 ,结合临床随访结果 ,判断BLCAP蛋白表达与骨肉瘤恶性程度之间的关系。结果 :BLCAP蛋白在原发骨肉瘤组织中表达阳性率约为 6 5 .6 % ,而在复发性骨肉瘤组织中表达阳性率只有 2 5 .0 %。结论 :BLCAP蛋白表达水平与骨肉瘤恶性程度之间有一定的相关性 。 展开更多
关键词 blcap基因 骨肉瘤 复发 恶性程度 蛋白表达
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人BLCAP基因单核苷酸多态性与宫颈癌的相关性 被引量:6
2
作者 刘娟 熊金虎 伍欣星 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2004年第6期646-650,共5页
人膀胱癌相关蛋白 (BLCAP)基因是本研究室从细胞原癌、抑癌基因分类芯片中筛选并克隆的宫颈癌候选抑癌基因。为检测该基因调控区的单核苷酸多态性 (SNP)及其不同基因型与宫颈癌的相关性 ,采用病例 对照研究方法及动态等位基因杂交 (DASH... 人膀胱癌相关蛋白 (BLCAP)基因是本研究室从细胞原癌、抑癌基因分类芯片中筛选并克隆的宫颈癌候选抑癌基因。为检测该基因调控区的单核苷酸多态性 (SNP)及其不同基因型与宫颈癌的相关性 ,采用病例 对照研究方法及动态等位基因杂交 (DASH)技术 ,对 30例原发性宫颈癌患者和 6 0例正常人BLCAP基因调控区的 2个SNP位点进行了检测。结果显示 :位于BLCAP基因下游调控区的SNPrs3795 14 7位点存在AA、AC和CC 3种基因型 ,且与宫颈癌发病存在显著相关性 (P <0 0 1)。SNPrs3795 14 7处在BLCAP基因下游调控区域 ,其多态类型可能在某种程度上影响BLCAP基因的表达调控 ,从而进一步支持了 :BLCAP基因与宫颈癌的发生、发展可能存在密切关系。 展开更多
关键词 blcap基因 宫颈癌 相关性 单核苷酸多态性(SNP) 单核苷酸多态性 病例-对照研究 相关蛋白 调控区 表达调控 克隆
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宫颈癌相关blcap基因的生物信息学分析 被引量:7
3
作者 刘娟 熊金虎 伍欣星 《中国病毒学》 CSCD 2004年第2期168-170,共3页
BLCAP is a potential gene for suppression of cervical carcinoma, which was found by analysing the cervical carcinoma specimen with the oncogene and anti-oncogene cDNA microarray. Basing on the bioinformatical analyses... BLCAP is a potential gene for suppression of cervical carcinoma, which was found by analysing the cervical carcinoma specimen with the oncogene and anti-oncogene cDNA microarray. Basing on the bioinformatical analyses, we try to predict the function of blcap gene. The results show that there are several genes that highly resemble with blcap. The comparability between the sequences of blcap and Homo sapiens mRNA (DKFZp564M053) or BC10 is 99% and 87%, respectively. The protein encoded by BLCAP is composed of Leu(19.5%)、pro(9.19%)、ser(8.04%)、cys(8.04%) and other amino acids. The secondary structure of the N-terminal of BLCAP encoded protein is an alpha helix. In the C-terminal, it is beta sheet and in the middle, it is coil. The of the terminals is more hydrophobile than the middle region. Between 45-55aa, there is a transmembrane region. Therefore, we forecast the BLCAP is a member of transmembrane protein I. By analyzing the signal peptide and the procedure of blcap gene with the program of SignalP (V1.1), we found a cleavage site in 59-66aa. By using the program of Netpho, we predicted there might be three phospholate sites at 68aa, 73aa and 78aa. At 78-81aa, we found a typical [ST]-X(2)-[DE] structure—the phospholate site of tyrosine protein kinase, which might be related to its function. Bioinformatic studies of blcap provided the foundation for the function researches of BLCAP in laboratory. 展开更多
关键词 宫颈癌 blcap基因 生物信息学 人乳头瘤病毒 HPV 分子标记 人膀胱癌相关蛋白
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克隆BLCAP基因并重组原核细胞表达质粒研究 被引量:1
4
作者 范德刚 范清宇 +3 位作者 张惠中 张鹏 龙华 刘云燕 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2004年第18期55-57,60,共4页
目的克隆BLCAP基因并构建原核表达质粒。方法利用RT-PCR方法,从骨肉瘤细胞SOSP-9607总RNA中克隆BLCAP基因ORF,通过酶切、连接、转化等手段,获得重组原核细胞表达质粒。结果成功克隆BLCAP基因ORF并构建重组质粒pGEX-4T-BLCAP。结论克隆BL... 目的克隆BLCAP基因并构建原核表达质粒。方法利用RT-PCR方法,从骨肉瘤细胞SOSP-9607总RNA中克隆BLCAP基因ORF,通过酶切、连接、转化等手段,获得重组原核细胞表达质粒。结果成功克隆BLCAP基因ORF并构建重组质粒pGEX-4T-BLCAP。结论克隆BLCAP基因并重组原核细胞表达质粒,为分析蛋白特性、研究基因功能创造了条件。 展开更多
关键词 blcap基因 骨肉瘤 基因 表达
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BLCAP蛋白原核表达及其多克隆抗体制备 被引量:1
5
作者 解庭波 俞娟 伍欣星 《长江大学学报(自科版)(下旬)》 CAS 2008年第4期12-15,4,共5页
目的:利用原核表达系统表达BLCAP融合蛋白并制备其多克隆抗体。方法:构建原核表达重组质粒pET32a(+)-BLCAP并转化到宿主菌BL21中,通过IPTG诱导表达并采用亲和层析的方法纯化和SDS-PAGE鉴定后免疫日本大耳白兔,制备BLCAP蛋白多克隆抗体... 目的:利用原核表达系统表达BLCAP融合蛋白并制备其多克隆抗体。方法:构建原核表达重组质粒pET32a(+)-BLCAP并转化到宿主菌BL21中,通过IPTG诱导表达并采用亲和层析的方法纯化和SDS-PAGE鉴定后免疫日本大耳白兔,制备BLCAP蛋白多克隆抗体并检测其特异性。结果:经过IPTG诱导,获得分子量大小约为28ku的融合蛋白,用纯化得到的融合蛋白免疫日本大耳白兔后得到抗BLCAP蛋白的多克隆抗体,通过Western blot检测证明该抗体能够与BLCAP融合蛋白发生特异性结合。结论:重组质粒表达的BLCAP融合蛋白具有良好的抗原性,制备的抗BLCAP的多克隆抗体特异性较好,为今后进一步研究BLCAP蛋白性质与功能奠定了基础。 展开更多
关键词 blcap 宫颈癌 原核表达 多克隆抗体
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保肢手术的前瞻性基因疗法研究:BLCAP基因在人骨肉瘤细胞发展过程中的调节作用(英文) 被引量:1
6
作者 范德刚 范清宇 +2 位作者 张惠中 张盈华 刘云燕 《中国临床康复》 CSCD 2004年第5期982-983,共2页
目的:探索BLCAP基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞SOSP-9607的影响,为保肢手术方法作前瞻研究基础。方法:通过细胞培养,测量细胞生长曲线、计算细胞集落形成率、检测细胞周期,观察BLCAP基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607的影响... 目的:探索BLCAP基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞SOSP-9607的影响,为保肢手术方法作前瞻研究基础。方法:通过细胞培养,测量细胞生长曲线、计算细胞集落形成率、检测细胞周期,观察BLCAP基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞系SOSP-9607的影响。结果:BLCAP基因反义寡核苷酸浓度为10μmol/L时,对此细胞的生长速度和集落形成能力有明显促进效应;流式细胞仪检测发现其引起细胞周期变化,对细胞增殖活性有增强作用。结论:首次发现BLCAP基因反义寡核苷酸对人骨肉瘤细胞SOSP-9607有明显的影响,提示BLCAP基因可能作为一种抑癌基因在人骨肉瘤发展过程中起作用。 展开更多
关键词 保肢手术 基因疗法 blcap基因 人骨肉瘤 肿瘤细胞 调节作用 细胞生长 细胞周期 反义寡核苷酸
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BLCAP基因克隆及其真核表达质粒的构建
7
作者 范德刚 范清宇 +3 位作者 张惠中 张鹏 龙华 刘云燕 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2004年第8期F003-F003,共1页
关键词 blcap基因 骨肉瘤 转移 基因重组
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pEGFP-BLCAP真核表达载体的构建和鉴定
8
作者 苏海川 范德刚 +3 位作者 赵玉红 陈军 邹爱民 李陕区 《现代肿瘤医学》 CAS 2007年第6期763-765,共3页
目的:构建真核表达载体pEGFP-BLCAP并转染骨肉瘤细胞SOSP-M。方法:从培养的人骨肉瘤细胞系SOSP-M细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得BLCAP基因的cDNA,测序正确后插入真核表达载体pEGFP-C2中,构建的重组质粒经脂质体介导转染SOSP-M细胞,经观... 目的:构建真核表达载体pEGFP-BLCAP并转染骨肉瘤细胞SOSP-M。方法:从培养的人骨肉瘤细胞系SOSP-M细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得BLCAP基因的cDNA,测序正确后插入真核表达载体pEGFP-C2中,构建的重组质粒经脂质体介导转染SOSP-M细胞,经观察荧光蛋白表达和Western blot鉴定目的蛋白在转染后的SOSP-M细胞中的表达情况。结果:RT-PCR成功地扩增出一条约280bp的片段,经限制性内切酶分析和DNA序列测定证实目的基因cDNA已插入重组质粒;荧光显微镜下观察到转染后的SOSP-M细胞发出较强绿色荧光,Western blot证明BLCAP能以融合蛋白的形式在SOSP-M细胞中获得表达。结论:构建了真核表达载体pEGFP-BLCAP并成功表达目的蛋白。 展开更多
关键词 blcap 克隆 转染RT—PCR SOSP—M细胞系
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BLCAP蛋白多克隆抗体制备及其免疫学特性鉴定
9
作者 俞娟 解庭波 +3 位作者 刘金花 姚军 赵旻 伍欣星 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 2007年第2期138-142,共5页
目的:利用大肠杆菌BL21(DE3)表达BLCAP融合蛋白并制备和鉴定其多克隆抗体。方法:构建原核表达重组质粒pET32a(+)-BLCAP并转化到宿主菌BL21中,诱导表达带有His标签的目的融合蛋白,经Ni2+亲和层析纯化回收后免疫日本大耳白兔制备多克隆抗... 目的:利用大肠杆菌BL21(DE3)表达BLCAP融合蛋白并制备和鉴定其多克隆抗体。方法:构建原核表达重组质粒pET32a(+)-BLCAP并转化到宿主菌BL21中,诱导表达带有His标签的目的融合蛋白,经Ni2+亲和层析纯化回收后免疫日本大耳白兔制备多克隆抗体,用ELISA测定抗体的效价,Western blot检测抗体的特异性和亲和性。结果:成功获得分子质量约为28 kU纯化的融合蛋白,免疫日本大耳白兔后得到抗BLCAP的多克隆抗体。ELISA测定显示抗体效价可达到1∶10 000。通过Western blot检测证明该抗体有较好的针对BLCAP蛋白的专一性。结论:重组质粒表达的BLCAP融合蛋白具有良好的抗原性。制备的特异性和效价良好的抗BLCAP的多克隆抗体,能够满足针对BLCAP免疫印迹和细胞免疫组化检测等实验要求,为今后深入研究BLCAP蛋白性质与功能提供了有用的实验工具。 展开更多
关键词 blcap原核表达 多克隆抗体 鉴定
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BLCAP基因干扰表达载体的构建及对膀胱癌细胞系T24增殖的影响
10
作者 李显文 钟朝晖 +4 位作者 付春花 陆新升 张斌 罗锦斌 曾灿 《现代泌尿生殖肿瘤杂志》 2016年第4期233-234,共2页
有研究发现抑癌基因BLCAP基因特异性表达于肌层非浸润性膀胱癌病灶中,而在浸润性膀胱癌中该基因表达下降。本研究在成功构建膀胱癌相关性抑癌基因BLCAP基因干扰表达载体的基础上,进一步研究BLCAP基因干预对膀胱癌细胞系T24增殖的影响。... 有研究发现抑癌基因BLCAP基因特异性表达于肌层非浸润性膀胱癌病灶中,而在浸润性膀胱癌中该基因表达下降。本研究在成功构建膀胱癌相关性抑癌基因BLCAP基因干扰表达载体的基础上,进一步研究BLCAP基因干预对膀胱癌细胞系T24增殖的影响。报告如下。 展开更多
关键词 膀胱癌细胞系 blcap基因 T24 基因干扰 非浸润性膀胱癌 表达载体 基因干预 基因表达 空白对照组 重组载体
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BLCAP基因在急性髓系白血病中的表达及意义
11
作者 董小林 张少君 杨洁 《海南医学》 CAS 2016年第9期1409-1411,共3页
目的探讨膀胱癌相关蛋白(BLCAP)基因在急性髓系白血病(AML)中的表达及其与治疗疗效和预后的关系。方法收集我院血液科2008年1月至2012年12月收治的138例原发性急性髓系白血病患者的病理资料,利用实时定量PCR(RQ-PCR)法检测AML患者骨髓液... 目的探讨膀胱癌相关蛋白(BLCAP)基因在急性髓系白血病(AML)中的表达及其与治疗疗效和预后的关系。方法收集我院血液科2008年1月至2012年12月收治的138例原发性急性髓系白血病患者的病理资料,利用实时定量PCR(RQ-PCR)法检测AML患者骨髓液BLCAP基因的表达,并分析其表达与AML临床病理指标及治疗疗效、预后的关系。结果 AML患者均表达BLCAP,BLCAP的表达在AML患者不同年龄、白细胞(WBC)、血红蛋白(Hb)等指标间比较差异均有统计学意义(P<0.05);AML治疗后缓解及治疗后无事件生存的患者,其BLCAP表达高于治疗后未缓解及治疗后复发、病情进展及死亡的患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 BLCAP基因在AML患者中的表达与其治疗疗效及预后相关,有望成为AML病情评估及疗效预测的指标。但这一结论尚需进一步的研究予以证实。 展开更多
关键词 膀胱癌相关蛋白 急性髓系白血病 预后 病理指标
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BLCAP基因cDNA的克隆及siRNA表达载体的构建
12
《现代肿瘤医学》 CAS 2007年第4期505-507,共3页
目的:克隆BLCAP基因cDNA并构建和鉴定针对于BLCAP基因的siRNA真核表达载体.方法:从培养的人骨肉瘤细胞系SOSP-9607细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得BLCAP基因.将该基因克隆到pGEM-T-Easy载体中,酶切及测序鉴定.将合成的siRNA核酸片段退... 目的:克隆BLCAP基因cDNA并构建和鉴定针对于BLCAP基因的siRNA真核表达载体.方法:从培养的人骨肉瘤细胞系SOSP-9607细胞中提取总RNA,经RT-PCR获得BLCAP基因.将该基因克隆到pGEM-T-Easy载体中,酶切及测序鉴定.将合成的siRNA核酸片段退火形成双链后连接到经BamHI和HindⅢ双酶切后的pSilencer4.1真核表达载体,命名为pSilencer4.1-B1以及pSilencer4.1-B2,并进行酶切及测序鉴定.脂质体法转染SOSP-9607细胞系,G418筛选以及RT-PCR验证构建的真核表达载体对目的基因的干涉情况.结果:经酶切及测序鉴定,所获得的目的片段序列BLCAP基因完全相符.重组质粒中含有与理论值相符的插入片段,其测序结果与设计序列一致.经脂质体法转染后pSilencer4.1-B2可明显抑制SOAP-9607细胞的BLCAP表达.结论:成功克隆了BLCAP基因并cDNA构建和验证了其siRNA真核表达载体. 展开更多
关键词 blcap 克隆 SIRNA RT-PCR SOSP-9607 细胞系
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宫颈癌相关BLCAP基因的原核表达及条件优化 被引量:1
13
作者 解庭波 俞娟 +2 位作者 左泽华 赵旻 伍欣星 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2007年第1期15-19,共5页
目的利用大肠埃希菌表达系统表达宫颈癌相关BLCAP基因,并优化表达条件。方法利用PCR技术从逆转录病毒重组载体pL(BLCAP)SN中扩增宫颈癌相关BLCAP基因,将其插入到原核表达载体pET-32(a)中,从而构建原核表达重组质粒pET-32(a)-BLCAP,随后... 目的利用大肠埃希菌表达系统表达宫颈癌相关BLCAP基因,并优化表达条件。方法利用PCR技术从逆转录病毒重组载体pL(BLCAP)SN中扩增宫颈癌相关BLCAP基因,将其插入到原核表达载体pET-32(a)中,从而构建原核表达重组质粒pET-32(a)-BLCAP,随后将阳性重组质粒转化到表达宿主菌中,通过IPTG诱导表达并优化表达条件,所表达的带有His标签目的融合蛋白经Ni2+亲和层析纯化回收,并采用SDS-PAGE和Western印迹对目的蛋白进行分析和鉴定。结果构建的重组表达质粒经PCR、酶切和DNA测序鉴定与预期的结果一致,含有重组质粒的表达宿主菌经过IPTG诱导表达了分子量约为28ku的融合蛋白,并经优化确定了最佳的诱导表达条件。结论成功构建了pET-32(a)-BLCAP原核表达质粒,表达并经纯化得到了BLCAP目的蛋白,为研究该蛋白的性质及其制备针对该蛋白的抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 宫颈癌 blcap基因 原核表达 条件优化
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BLCAP基因RNA过编辑对肝癌细胞增殖的影响 被引量:1
14
作者 刘琢冰 吴伟刚 +4 位作者 刘妙娜 刘威龙 杨桂林 陈心春 周伯平 《中国热带医学》 CAS 2016年第1期1-5,共5页
目的研究BLCAP基因RNA过编辑对肝癌SMMC7721、Focus细胞的生长增殖能力的影响,并探讨其在肝癌发生发展的作用。方法采用半定量PCR的方法分析BLCAP基因在11株肝癌细胞以及2株正常肝脏细胞中的表达情况,选出2株BLCAP基因相对低表达的肝癌... 目的研究BLCAP基因RNA过编辑对肝癌SMMC7721、Focus细胞的生长增殖能力的影响,并探讨其在肝癌发生发展的作用。方法采用半定量PCR的方法分析BLCAP基因在11株肝癌细胞以及2株正常肝脏细胞中的表达情况,选出2株BLCAP基因相对低表达的肝癌细胞株。以基因转染技术,将空质粒(pc DNA3.1,对照组)、BLCAP_WT(野生型)和BLCAP_RDD(过编辑型)质粒(实验组)分别转染肝癌细胞株,通过Western blot法检验转染效率。利用CCK-8生长曲线试验和平板克隆形成实验检测肝癌细胞株的增殖能力。结果半定量PCR结果显示BLCAP基因在肝癌SMMC7721、Focus细胞中的表达量相对较低。Western blot的结果显示,实验组细胞BLCAP基因的蛋白表达水平较对照组细胞明显增高(P<0.05),表明转染较成功。CCK-8生长曲线试验和平板克隆形成实验的结果显示,肝癌SMMC7721和Focus细胞在转染BLCAP_RDD质粒后,其增殖能力较空质粒对照组及BLCAP_WT组细胞明显增强(P<0.05)。结论 BLCAP基因过编辑可促进肝癌SMMC7721和Focus细胞的增殖,提示其在肝癌细胞中的过编辑与肝癌的发生发展密切相关。 展开更多
关键词 blcap基因 过编辑 肝癌细胞 增殖
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联合运用基因芯片和反义寡核苷酸技术筛选骨肉瘤转移相关基因 被引量:6
15
作者 范德刚 范清宇 +4 位作者 张惠中 张鹏 龙华 刘云燕 文艳华 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2004年第1期64-68,共5页
目的 探讨联合运用基因芯片和反义寡核苷酸技术筛选转移相关基因。方法 分别提取两种具有不同转移能力的骨肉瘤细胞总RNA ,反转录cDNA ,用基因芯片筛选差异表达基因 ;从基因芯片筛选结果中选择适当基因 ,设计相应的反义寡核甘酸进行... 目的 探讨联合运用基因芯片和反义寡核苷酸技术筛选转移相关基因。方法 分别提取两种具有不同转移能力的骨肉瘤细胞总RNA ,反转录cDNA ,用基因芯片筛选差异表达基因 ;从基因芯片筛选结果中选择适当基因 ,设计相应的反义寡核甘酸进行体外实验 ,观测其对细胞生长特性的影响。结果 基因芯片筛选出 11个差异表达基因 ,多与肿瘤发生发展有关。BRCA1和BLCAP基因反义寡核苷酸均可引起骨肉瘤细胞生长速度变快、克隆形成率增高、增殖活性增强。结论 联合运用基因芯片和反义寡核苷酸技术可以有效地筛选转移相关基因 ,为进一步研究提供有益的参考。 展开更多
关键词 骨肉瘤 转移 基因芯片 反义寡核苷酸 BRcAl基因 blcap基因
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膀胱癌相关蛋白对宫颈癌细胞的影响及其在细胞周期信号传导网络中的作用 被引量:3
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作者 谢秋娴 郑曼佳 +2 位作者 谢昭雄 陈婵玉 丁淼 《广东医学》 CAS 北大核心 2016年第1期62-66,共5页
目的探讨膀胱癌相关蛋白(BLCAP)发挥抑癌功能的分子机制及其在细胞周期信号传导网络中的作用和地位。方法应用分子克隆技术,构建BLCAP真核表达重组质粒pE F-BLCAP-3×Flag,原核表达重组质粒pG EX-KG-BLCAP和pE T-32a-BLCAP。应用瞬... 目的探讨膀胱癌相关蛋白(BLCAP)发挥抑癌功能的分子机制及其在细胞周期信号传导网络中的作用和地位。方法应用分子克隆技术,构建BLCAP真核表达重组质粒pE F-BLCAP-3×Flag,原核表达重组质粒pG EX-KG-BLCAP和pE T-32a-BLCAP。应用瞬时转染、RT-PCR和Western blot检测BLCAP的过表达引起的相关信号分子在mRNA和蛋白水平的表达差异。应用免疫共沉淀和免疫印迹技术检测和确定能与BLCAP相互作用的蛋白分子。采用大肠杆菌体外表达系统,诱导表达并纯化回收BLCAP融合蛋白,并做SDS-PAGE和Western blot分离、鉴定,大量制备留存备用。结果构建带有Flag标签的真核表达重组质粒pE F-BLCAP-3×Flag,带有GST标签的原核表达重组质粒pG EX-KG-BLCAP及带有His标签的原核表达重组质粒pE T-32aBLCAP,并经PCR、双酶切和测序鉴定,确定其插入序列和开放读码框均正确无误。RT-PCR结果显示在转染BLCAP基因的细胞中,BLCAP的mRNA水平高表达的同时,抑癌基因Rb1的mRNA水平也显著提高。Western blot结果证实,BLCAP过表达时,RB1蛋白的水平也明显增高,但磷酸化RB蛋白的表达水平无明显差异。免疫共沉淀和免疫印迹结果证实,在生理水平,BLCAP能够与RB1结合,同时也能与磷酸化的RB结合。利用大肠杆菌表达系统大量表达和纯化回收BLCAP融合蛋白,经SDS-PAGE和Western blot检测确为我们所需的目的蛋白。结论 BLCAP很可能通过与细胞周期调控蛋白RB1的作用而使得细胞无法通过G1/S checkpoint,从而发挥其抑制细胞生长和诱导凋亡的功能。 展开更多
关键词 blcap RB G1/S CHECKPOINT 抑癌基因 免疫共沉淀 免疫印迹
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几个宫颈癌相关抑癌基因的研究进展 被引量:2
17
作者 关燕清 邱进威 +2 位作者 李伟芳 梁淑君 李勤 《广东教育学院学报》 2007年第3期69-75,共7页
目前,人们研究肿瘤的热点已经从癌基因转到抑癌基因,在已发现的数个抑癌基因中,p53、Fas、p16、Fhit、nm23、BLCAP与宫颈癌的关系密切,也是宫颈癌研究的热点.p53和p16基因通过调控细胞周期来抑制细胞增殖;Fas通过与其配体FasL或其单克... 目前,人们研究肿瘤的热点已经从癌基因转到抑癌基因,在已发现的数个抑癌基因中,p53、Fas、p16、Fhit、nm23、BLCAP与宫颈癌的关系密切,也是宫颈癌研究的热点.p53和p16基因通过调控细胞周期来抑制细胞增殖;Fas通过与其配体FasL或其单克隆抗体结合后,诱导Fas所在细胞凋亡;Fhit通过诱导细胞凋亡、细胞周期阻滞发挥着抑制肿瘤细胞增殖的作用;nm23则是通过改变nm23基因的编码产物二磷酸核苷酸激酶(NDPK)从而引起NTP产生不足,参与浸润、转移过程;BLCAP是一个新近发现的宫颈癌相关抑癌基因,其功能及性质尚不大清楚. 展开更多
关键词 宫颈癌 抑癌基因 p53 FAS P16 FHIT NM23 blcap
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宫颈癌相关新基因的筛选、克隆及鉴定 被引量:1
18
作者 解庭波 左泽华 +3 位作者 彭敏 许蓓妮 赵旻 伍欣星 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 2006年第3期275-278,314,i0002,共6页
目的:筛选、克隆及鉴定宫颈癌相关基因———BLCAP。方法:利用基因芯片技术对1例原发性宫颈癌患者的癌组织及其癌旁正常组织进行分析;将在宫颈癌组织中表达显著降低的BLCAP基因克隆到pET-28(a)表达载体上,以构建原核表达重组质粒pET-28(... 目的:筛选、克隆及鉴定宫颈癌相关基因———BLCAP。方法:利用基因芯片技术对1例原发性宫颈癌患者的癌组织及其癌旁正常组织进行分析;将在宫颈癌组织中表达显著降低的BLCAP基因克隆到pET-28(a)表达载体上,以构建原核表达重组质粒pET-28(a)-BLCAP,通过PCR、限制性内切酶酶切和DNA测序等技术鉴定阳性重组子。结果:通过基因芯片分析发现存在表达差异的原癌和抑癌基因共11条,其中表达降低最明显的是BLCAP基因。构建的重组表达质粒经PCR、酶切和DNA测序鉴定与预期的结果一致,即BLCAP基因共264 bp,基因序列无改变,基因插入后阅读框(ORF)正确。结论:筛选出了在宫颈癌中表达显著降低的BLCAP基因并成功构建了pET-28(a)-BLCAP原核表达质粒,为表达BLCAP目的蛋白及研究该蛋白的性质奠定了基础。 展开更多
关键词 宫颈癌 blcap基因 筛选 克隆
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膀胱癌相关蛋白基因对HeLa细胞增殖的抑制作用 被引量:8
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作者 左泽华 赵旻 +2 位作者 刘娟 魏芸 伍欣星 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第7期811-817,共7页
背景与目的:通过癌基因与抑癌基因的基因分类表达芯片筛选发现,在宫颈癌组织中,膀胱癌相关蛋白基因(bladdercancerrelatedprotein,BLCAP)表达降低最为明显。提示该基因可能与宫颈癌发生相关。本研究旨在探讨该基因对宫颈癌细胞增殖的抑... 背景与目的:通过癌基因与抑癌基因的基因分类表达芯片筛选发现,在宫颈癌组织中,膀胱癌相关蛋白基因(bladdercancerrelatedprotein,BLCAP)表达降低最为明显。提示该基因可能与宫颈癌发生相关。本研究旨在探讨该基因对宫颈癌细胞增殖的抑制作用。方法:用RT-PCR法检测54例宫颈癌组织和25正常宫颈组织中BLCAP基因的表达情况。制备BLCAP全长cDNA并克隆到真核表达载体pLXSN上,稳定转染至宫颈癌细胞系HeLa中,细胞计数方法和克隆形成实验观察稳定转染BLCAP基因的HeLa细胞的细胞形态、细胞增殖及集落形成能力;利用DNAladder检测BLCAP基因引起HeLa细胞凋亡情况;裸鼠体内抑瘤实验观察BLCAP基因的抑瘤作用。结果:BLCAP在宫颈癌组织中不表达或低表达,与正常宫颈组织相比明显降低;转染BLCAP基因的HeLa细胞倍增时间为69.4h,较未转染HeLa细胞(27.5h)和转染空载体的HeLa细胞(30.2h)明显延长,差异有显著性(P﹤0.05);细胞同步对比实验显示,转染BLCAP基因的HeLa细胞的克隆形成率明显低于未转染HeLa细胞(t=5.98,P<0.01)和转染空载体的HeLa细胞(t=4.69,P﹤0.01);HeLa细胞在转染BLCAP基因后出现了DNA梯形条带。将转染BLCAP基因的HeLa细胞、转染空载体的HeLa细胞和未转染的HeLa细胞分别注射入BALB/c裸鼠体内,30天后处死动物,剥离肿瘤组织并称重,各组平均瘤重分别为1.015g、1.612g和1.530g,转染BLCAP基因的细胞抑瘤能力与两对照组相比,差异有显著性(P<0.05)。肿瘤病理切片结果显示,稳定转染BLCAP基因的HeLa细胞所成肿瘤组织,癌组织被纤维组织包裹,边缘整齐,未侵犯肌层和脂肪组织,部分癌巢边缘癌细胞可见散在类似凋亡细胞的细胞群。而未转染质粒组及转染空载体pLXSN质粒组所成肿瘤组织癌组织突破肌层呈浸润性生长,癌巢边缘癌细胞病理性核分裂像多见。结论:BLCAP基因在宫颈癌组织中表达下调,对HeLa细胞的增殖具有明显抑制作用,为宫颈癌相关候选抑癌基因。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 HELA细胞 膀胱癌相关蛋白基因 抑癌基因
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人膀胱癌相关蛋白基因及其编码蛋白质的结构及功能预测 被引量:2
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作者 刘娟 熊金虎 伍欣星 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 2004年第3期217-219,223,共4页
目的 :预测人宫颈癌候选抑癌基因———膀胱癌相关蛋白 (BLCAP)基因及其编码蛋白质的结构及功能。方法 :将克隆有全长BLCAP基因的 pLXSN BLCAP质粒测序后 ,采用生物信息学的方法对其在核酸及氨基酸水平上进行分析 ,并对其编码的蛋白质... 目的 :预测人宫颈癌候选抑癌基因———膀胱癌相关蛋白 (BLCAP)基因及其编码蛋白质的结构及功能。方法 :将克隆有全长BLCAP基因的 pLXSN BLCAP质粒测序后 ,采用生物信息学的方法对其在核酸及氨基酸水平上进行分析 ,并对其编码的蛋白质的功能做了初步预测。结果 :发现了几条与BLCAP基因同源性较高的基因 :Ho mosapiensmRNA(DKFZp5 6 4M0 5 3) ,BC 1 0基因等 ,它们与BLCAP基因的序列相似性分别为 :99%和 87% ,而且不同种属间BLCAP基因较为保守。BLCAP基因编码的 87个氨基酸中亮氨酸 (1 9.5 % )、脯氨酸 (9.1 9% )、丝氨酸 (8.0 4 % )、半胱氨酸 (8.0 4 % )含量较高 ,对其二级结构的分析发现BLCAP基因编码蛋白N端以螺旋结构为主 ,C端以折叠结构为主 ,亲水性较高 ,而中间区域则以无规则卷曲为主 ,疏水性较高。在其 4 5aa~ 6 5aa处存在一个跨膜区 ,在 5 9aa~ 6 6aa处可能存在一个裂解位点 ,在 6 8位的Tyr,73位和 78位的Ser存在着 3个可能的磷酸化位点 ,且在78aa~ 81aa处发现一个典型的 [ST] X(2 ) [DE]结构 ,即酪氨酸蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点。结论 :初步预测BLCAP基因为一个调节细胞生长的看家基因 ,其编码的蛋白质为一个Ⅰ型跨膜蛋白 。 展开更多
关键词 人膀胱癌相关蛋白基因 生物信息学 蛋白质结构 蛋白质功能 预测宫颈癌
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