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Protein Expression of BLM Gene and Its Apoptosis Sensitivity in Hematopoietic Tumor Cell Strains 被引量:6
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作者 王晓蓓 胡丽华 《Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences)》 SCIE CAS 2008年第1期46-48,共3页
Patients with Bloom syndrome (BS) show an immunodeficiency, an enhanced sister chromatid exchanges (SCEs), a strong genetic instability and an increased predisposition to all. In order to investigate the different... Patients with Bloom syndrome (BS) show an immunodeficiency, an enhanced sister chromatid exchanges (SCEs), a strong genetic instability and an increased predisposition to all. In order to investigate the differential expression of BLM protein in hematopoietic tumor cell strains and study the effects of BLM gene on ultraviolet (UV)- or hydroxyurea (HU)-induced apoptosis, Western blot was used to detect the expression of BLM protein in normal human bone marrow mononuclear cells and 4 kinds of hematopoietic tumor cell strains. The 4 kinds of hematopoietic tumor cells were exposed to UV light with a germicidal UV lamp or treated with 2 mmol/L hydroxyurea and the apoptotic rate was detected by using AnnexinV-FITC. The results showed that these tumor cells expressed BLM protein higher than the normal human bone marrow mononuclear cells (P〈0.01). In the 4 hematopoietic tumor cells, BLM protein was all specially cleaved in response to UV- or HU-induced apoptosis. The increase of BLM protein expression may play an important role in the development of these tumors, and BLM proteolysis is likely to be a general feature of the apoptotic response. 展开更多
关键词 blm gene PROTEIN APOPTOSIS hematopoietic tumor cell strains
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BLM基因与胃癌免疫浸润水平及临床预后的相关性分析
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作者 张伟康 胡志耀 +4 位作者 钟剑锋 姜德培 文学 王新友 陈泓磊 《消化肿瘤杂志(电子版)》 2024年第2期194-200,共7页
目的探讨BLM基因与胃癌组织中免疫细胞浸润水平及患者预后的关系。方法通过TIMER数据库分析BLM基因在不同恶性肿瘤中的表达水平差异,并应用GEPIA数据库验证BLM基因在胃癌组织中的表达水平。对胃癌组织芯片(STC1602)进行免疫组织化学分析... 目的探讨BLM基因与胃癌组织中免疫细胞浸润水平及患者预后的关系。方法通过TIMER数据库分析BLM基因在不同恶性肿瘤中的表达水平差异,并应用GEPIA数据库验证BLM基因在胃癌组织中的表达水平。对胃癌组织芯片(STC1602)进行免疫组织化学分析,并对比胃癌组织和正常胃黏膜组织BLM免疫组织化学结果,进一步验证BLM在胃癌组织中的表达差异。通过Kaplan-MeierPlotter数据库对BLM基因与胃癌患者的生存预后关系进行评估。利用TIMER数据库分析了BLM基因在胃癌组织中的表达与免疫细胞浸润水平的相关性。从基因表达综合数据库中获取了GSE84433和GSE62254胃癌数据集,进行了单样本基因集富集分析,以验证BLM基因的高表达是否会影响胃癌组织中免疫细胞的浸润水平。结果BLM基因在胃癌、结直肠癌、食管癌等恶性肿瘤组织中均高表达。BLM基因高表达水平的胃癌患者的总生存和首次进展后生存均较差。胃癌组织中BLM基因的mRNA表达水平与CD8^(+)T细胞、CD4^(+)T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞及树突状细胞的浸润水平呈负相关。结论BLM基因在胃癌组织中高表达,BLM基因的表达与胃癌组织中的免疫细胞浸润水平呈负相关,BLM基因可作为评估胃癌患者预后的标志物。 展开更多
关键词 胃癌 blm基因 临床预后 免疫浸润
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六种肿瘤细胞株BLM基因转录水平的研究 被引量:5
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作者 易雪 邹萍 +6 位作者 刘凌波 田蕾 刘芳 冯献启 肖娟 仲照东 熊平 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2005年第5期823-826,共4页
BLM基因的不同突变是导致Bloom综合征(Bloom'ssyndrome)的病因。BLM基因突变使姐妹染色单体互换率(sisterchromaticexchange,SCE)增高,细胞DNA修复功能降低,这样受损的DNA很容易随细胞分裂而传入子细胞,细胞稳定性下降。临床表现为... BLM基因的不同突变是导致Bloom综合征(Bloom'ssyndrome)的病因。BLM基因突变使姐妹染色单体互换率(sisterchromaticexchange,SCE)增高,细胞DNA修复功能降低,这样受损的DNA很容易随细胞分裂而传入子细胞,细胞稳定性下降。临床表现为免疫缺陷,恶性肿瘤易患体质等等。本研究对BLM基因在肿瘤细胞株和正常人中表达的差异进行研究,以期发现肿瘤新的发生机制,为寻找新的特异分子治疗靶点提供线索。应用PTPCR方法检测正常人造血细胞和六种肿瘤细胞株中BLM基因的mRNA水平,并作序列检测。结果表明,六种肿瘤细胞株均高表达BLMmRNA,但未见BLM基因结构异常,而正常人表达量很低(P<0.01)。结论:在本研究中的6种肿瘤细胞株高表达BLMmRNA,肿瘤细胞株和正常人BLMmRNA表达水平有显著差异性。BLM异常可能参与肿瘤的发生或是导致耐药的原因之一。 展开更多
关键词 blm基因 肿瘤细胞株 JURKAT Raji DAUDI HL-60
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丝裂霉素诱发Jurkat细胞DNA损伤修复机制中blm基因的作用研究 被引量:1
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作者 易雪 程辉 +5 位作者 邹萍 刘凌波 张婷 余丹 朱晓明 邹亮 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2010年第5期1155-1158,共4页
本研究通过丝裂霉素(mitomycin C,MMC)诱发Jurkat细胞凋亡,了解Jurkat细胞DNA损伤后blm mRNA水平变化与细胞周期和凋亡之间关系及意义。用流式细胞术检测凋亡率和细胞周期变化;用半定量RT-PCR检测blm mRNA的表达水平。结果表明:0.4 g/L ... 本研究通过丝裂霉素(mitomycin C,MMC)诱发Jurkat细胞凋亡,了解Jurkat细胞DNA损伤后blm mRNA水平变化与细胞周期和凋亡之间关系及意义。用流式细胞术检测凋亡率和细胞周期变化;用半定量RT-PCR检测blm mRNA的表达水平。结果表明:0.4 g/L MMC分别诱导Jurkat细胞和正常成纤维细胞后,Jurkat细胞于24小时凋亡率为(11.42±0.013)%,此时(66.08±1.60)%的Jurkat细胞受阻于G2/M期;48小时时Jurkat细胞凋亡率反而下降(8.08±0.27)%,停滞于G2/M期Jurkat细胞下降为(33.96±1.05)%;正常成纤维细胞诱导后24小时与48小时凋亡率变化不明显,G2/M期细胞、G0-G1、S期细胞在24小时和48小时时变化不显著。2组细胞凋亡率和各期细胞所占比例的变化幅度比较显示,其差异显著有统计学意义(p<0.01)。Jurkat细胞blm mRNA表达水平不仅明显高于正常成纤维细胞(p<0.01),诱导48小时后blm mRNA表达水平明显较诱导24小时后增高,2组细胞间blm mRNA表达水平变化幅度比较差异显著(p<0.01)。结论:blm基因在MMC诱发Jurkat细胞DNA损伤修复过程中发挥重要作用,其mRNA表达异常可能是导致白血病耐药的原因之一。 展开更多
关键词 丝裂霉素 DNA损伤修复 blm基因 JURKAT细胞 肿瘤耐药
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BLM解旋酶基因的克隆、表达载体构建及表达研究
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作者 赵佳福 许厚强 +2 位作者 宋书弦 段志强 陈祥 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期152-159,共8页
克隆获得BLM基因全长CDS区,研究其在细胞中的表达情况。从人前列腺癌PC3细胞中提取总RNA,反转录成cDNA,采用分段克隆的方法获得BLM全长CDS区,将其定向插入到原核表达载体pET-32a和真核表达载体pEGFP-N3,构建p ET-32a-BLM和p EGFP-N3-BL... 克隆获得BLM基因全长CDS区,研究其在细胞中的表达情况。从人前列腺癌PC3细胞中提取总RNA,反转录成cDNA,采用分段克隆的方法获得BLM全长CDS区,将其定向插入到原核表达载体pET-32a和真核表达载体pEGFP-N3,构建p ET-32a-BLM和p EGFP-N3-BLM。将获得的重组质粒转化BL21(DE3)感受态细胞或转染PC3细胞,通过SDS-PAGE、Western blotting、荧光定位观察等方法研究人BLM解旋酶在细胞中的表达或定位。BLM解旋酶的原核表达结果显示,不同IPTG浓度对BLM解旋酶的表达量影响不大,低温有助于其表达量的提高。Western blotting检测发现,构建的人BLM解旋酶重组原核和真核表达载体分别能在大肠杆菌细胞和PC3细胞中表达出分子量约为179 kD的蛋白质,与预期分子量大小一致。荧光共定位结果显示,人BLM解旋酶主要定位在细胞核。成功克隆了人BLM解旋酶全长CDS区,且构建的重组表达载体pET-32a-BLM和pEGFP-N3-BLM能在相应的宿主细胞中正确表达。 展开更多
关键词 blm解旋酶 基因克隆 表达载体 亚细胞定位 蛋白印迹
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猪BLM基因N端、C端的克隆及其在不同组织与疾病中的表达分析 被引量:1
6
作者 王赛楠 许厚强 赵佳福 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第8期2076-2085,共10页
为探究猪BLM解旋酶N端、C端的结构功能及其在不同组织和疾病中的相对表达量,本研究采用RT-PCR技术扩增从江香猪BLM基因N端和C端,利用生物信息学软件对克隆所获序列进行分析,同时采用实时荧光定量PCR技术分析BLM基因在猪不同组织及病样... 为探究猪BLM解旋酶N端、C端的结构功能及其在不同组织和疾病中的相对表达量,本研究采用RT-PCR技术扩增从江香猪BLM基因N端和C端,利用生物信息学软件对克隆所获序列进行分析,同时采用实时荧光定量PCR技术分析BLM基因在猪不同组织及病样中的表达差异。结果显示,试验成功克隆了从江香猪BLM基因N端1 025bp和C端1 300bp序列,与GenBank中猪BLM基因序列(登录号:NM_001123084.1)同源性为100%;生物信息学软件预测显示,猪BLM基因序列长度为4 316bp,包含4 280bp的开放阅读框,编码一个由1 426个氨基酸组成的多肽链;氨基酸序列比对发现,猪BLM基因氨基酸序列与牛的同源性最高(85%);结构域预测表明,猪BLM基因有DEXDc、HELICc、RQC和HRDC 4个结构域;系统进化树分析表明,猪BLM基因与牛亲缘关系最近;实时荧光定量PCR结果显示,以心脏为对照,BLM基因在从江香猪各组织中均有表达,其中在睾丸中的相对表达量最高,其次为肺脏、肝脏、脾脏、心脏、肾脏、小肠和大肠,在睾丸和肺脏中的表达量均极显著高于其他组织(P<0.01);BLM基因在患繁殖与呼吸道综合征猪肺脏、患白血病鸡肝脏和患鸭瘟鸭肝脏中的表达水平均极显著或显著高于正常组织(P<0.01;P<0.05),提示BLM基因的变化可能也会导致动物疾病的发生。本试验结果可为后续畜禽BLM解旋酶原核表达载体的构建及其在重大疾病的发生和预防等研究提供理论依据。 展开更多
关键词 blm基因 序列分析 组织表达
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敲除BLM基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞株的构建
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作者 黄晏军 郑艺 +2 位作者 汤长宁 刘金河 刘杰麟 《贵州医科大学学报》 CAS 2018年第5期503-507,共5页
目的:应用规律成簇间隔短回文重复序列(CRISPR/Cas9)技术构建敲除BLM基因的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株。方法:根据CRISPR/Cas9技术靶点设计原则,在BLM基因的3号外显子设计2条靶向小向导RNA(sgRNA),利用PX459 V2质粒载体,构建PX459 V2-sg... 目的:应用规律成簇间隔短回文重复序列(CRISPR/Cas9)技术构建敲除BLM基因的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株。方法:根据CRISPR/Cas9技术靶点设计原则,在BLM基因的3号外显子设计2条靶向小向导RNA(sgRNA),利用PX459 V2质粒载体,构建PX459 V2-sgRNA重组质粒;将建构成功的重组质粒转染至MDA-MB-231细胞中,通过嘌呤霉素筛选获得阳性克隆,使用Cruiser^(TM)核酸内切酶检测打靶效率,将打靶效率较高的阳性克隆进行单克隆培养,再利用免疫印迹法检测筛选出敲除BLM基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞株。结果:测序结果表明重组质粒构建成功,免疫印迹法显示敲除BLM基因后的MDA-MB-231细胞中BLM蛋白明显降低,与空白对照组相比,BLM-KO组BLM表达水平明显低于对照组。结论:应用CRISPR/Cas9技术成功构建了BLM基因敲除的MDA-MB-231细胞株。 展开更多
关键词 规律成簇间隔短回文重复序列系统 基因敲除 blm基因 MDA-MB-231细胞 乳腺癌
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Bloom解旋酶突变体的克隆与表达
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作者 张金彪 许厚强 +3 位作者 骆衡 许庆贺 陈祥 李坤 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期123-128,共6页
blm基因的突变可导致Bloom综合症(BS),Bloom综合症是一种罕见隐性常染色体遗传疾病,患者遗传不稳定并易患多种类型癌症。临床发现BS患者细胞中的BLM的RecQ-Ct区域的1 036位半胱氨酸残基发生突变。运用生物信息学及分子生物学技术,通过... blm基因的突变可导致Bloom综合症(BS),Bloom综合症是一种罕见隐性常染色体遗传疾病,患者遗传不稳定并易患多种类型癌症。临床发现BS患者细胞中的BLM的RecQ-Ct区域的1 036位半胱氨酸残基发生突变。运用生物信息学及分子生物学技术,通过两轮重组PCR,构建985位和1 036位氨基酸突变的BLM解旋酶多点突变基因,克隆到载体pET-28a中,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。分离纯化获得了高纯度(>95%)的双突变型BLM解旋酶,并对其进行了Western blotting鉴定。这些结果可为进一步研究BS的致病机制奠定基础。 展开更多
关键词 blm解旋酶 重组PCR 多位点突变 基因克隆表达
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一例早期诊断的Bloom综合征患儿的BLM基因变异研究 被引量:3
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作者 单延春 杨召川 +5 位作者 杨晓燕 雷珂 傅芃 衣明纪 马良 冉霓 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2020年第7期764-766,共3页
目的探讨1例Bloom综合征患儿的临床和基因变异特点。方法分析总结1例13月龄患儿的临床资料,应用高通量测序技术对患儿进行基因变异分析,并应用Sanger测序法对变异基因的家系分布进行验证。结果患儿系足月小样儿,自生后食欲不振、重度生... 目的探讨1例Bloom综合征患儿的临床和基因变异特点。方法分析总结1例13月龄患儿的临床资料,应用高通量测序技术对患儿进行基因变异分析,并应用Sanger测序法对变异基因的家系分布进行验证。结果患儿系足月小样儿,自生后食欲不振、重度生长迟缓,小头畸形,小下颌,智力发育正常。基因检测发现患儿的BLM基因c.1068+3A>C和c.1069-1G>C复合杂合变异,分别来自患儿父母。结论Bloom综合征在婴儿期主要表现为重度生长迟缓和小头畸形。BLM基因c.1068+3A>C和c.1069-1G>C复合杂合变异可能是患儿的致病原因,上述新变异丰富了BLM基因的变异谱。 展开更多
关键词 BLOOM综合征 生长迟缓 小头畸形 blm基因
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影响BLM基因表达的miRNAs筛选及抑制效率研究 被引量:4
10
作者 谌颖莲 许厚强 +1 位作者 赵佳福 王赛楠 《生物技术》 CAS 2018年第1期54-59,6,共7页
[目的]筛选调控BLM基因表达的miRNAs并研究其抑制效率。[方法]利用Target Scan Human 6.2、microRNA.org、PicTar以及miRsystem在线软件预测调控BLM基因表达的miRNAs;miRNA通过脂质体转染和特异茎环引物反转录、荧光定量PCR及Pfaffl算... [目的]筛选调控BLM基因表达的miRNAs并研究其抑制效率。[方法]利用Target Scan Human 6.2、microRNA.org、PicTar以及miRsystem在线软件预测调控BLM基因表达的miRNAs;miRNA通过脂质体转染和特异茎环引物反转录、荧光定量PCR及Pfaffl算法检测miRNA对BLM基因表达的影响。[结果]初步筛选出hsa-miR-338-3p为调控BLM基因表达的miRNA;hsa-miR-338-3p抑制效率试验结果表明:当前列腺癌细胞(PC3)转染20μmol/L的hsamiR-338-3p minic时,实验组BLM表达量为对照组的0.44倍,抑制了BLM的表达(P<0.01);转染40μmol/L的hsa-miR-338-3p minic时,实验组BLM的表达量为对照组的2.55倍,促进了BLM的表达(P<0.01);转染60μmol/L的hsa-miR-338-3p minic时,实验组BLM的表达量为对照组的1.14倍,实验组与对照组差异不显著(P>0.05)。[结论]转染20μmol/L、40μmol/L和60μmol/L的hsa-miR-338-3p minic时BLM基因的表达量分别是对照组的0.44倍、2.55倍和1.44倍,转染不同剂量的miRNA对BLM基因的表达情况具有不同的影响。 展开更多
关键词 MIRNAS blm基因 Hsa-miR-338-3p Pfaffl算法 表达调控
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