当归-白芍联合BM-MSCs移植对NASH相关肝硬化小鼠肝脏炎症及肝细胞再生的影响

目的观察当归-白芍药对联合骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)移植对非酒精性脂肪性肝炎(NASH)相关肝硬化小鼠肝脏炎症及肝细胞再生的影响,探讨其可能机制。方法采用西式饮食联合四氯化碳复合诱导法制备NASH相关肝硬化小鼠模型,将小鼠随机分为对照组、模型组、当归-白芍组、BM-MSCs组和当归-白芍+BM-MSCs组,每组12只。造模成功后,按分组予相应干预,连续4周。HE染色观察肝组织形态;检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBil)、三酰甘油(TG)、白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(AFP)含量及肝组织白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、肝细胞生长因子(HGF)含量;RT-qPCR检测肝细胞Toll样受体9(TLR9)、髓样分化因子88(MyD88)、TNF受体相关因子6(TRAF6)、核因子-κB(NF-κB)p65 mRNA表达;分离肝脏原代细胞,行体外CpG ODN 2216诱导刺激,提取细胞上清液,检测IL-1β和TNF-α含量。结果与对照组比较,模型组小鼠肝组织炎性细胞浸润,伴肝细胞坏死和胶原沉积,形成假小叶;血清ALT、AST、TBil、TG含量升高,ALB含量下降,肝组织HGF含量下降,IL-1β、TNF-α含量升高,差异均有统计学意义(P<0.05);肝细胞TLR9、MyD88、TRAF6、NF-κBp65 mRNA表达升高(P<0.05),CpG ODN 2216诱导后肝细胞上清液IL-1β、TNF-α含量升高(P<0.05)。与模型组比较,当归-白芍+BM-MSCs组小鼠肝组织炎性细胞浸润及肝细胞坏死减少,肝纤维化程度减轻,当归-白芍组和BM-MSCs组小鼠肝组织损伤轻度好转;除BM-MSCs组血清TG含量外,各干预组检测指标均明显改善(P<0.05)。与当归-白芍组及BM-MSCs组比较,当归-白芍+BM-MSCs组相关检测指标差异均有统计学意义(P<0.05)。结论当归-白芍联合BM-MSCs移植可有效改善NASH相关肝硬化小鼠肝功能,促进肝细胞再生,其机制与下调TLR9/NF-κB信号通路表达及功能,抑制炎症因子分泌,改善肝脏炎症微环境有关。

BM-MSCs延缓CD8^(+)初始T细胞衰老

目的验证骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)缓解免疫衰老的作用,探究其衰老改善的主要免疫细胞群体。方法分离获得小鼠脾淋巴细胞,刺激增殖7d构建复制性衰老细胞模型。利用流式细胞测量术检测年轻对照组、复制性衰老对照组和BM-MSCs共培养组T细胞亚群衰老标志物p16ink4a(p16)和p21cip1(p21)的表达水平。结果T淋巴细胞复制性衰老模型中观察到持续增殖后CD8^(+)T细胞较CD4^(+)T细胞衰老显著,在CD8^(+)T细胞的初始细胞、效应细胞亚群中,效应细胞衰老最显著;BM-MSCs共培养对衰老的效应细胞没有明显影响,主要通过延缓初始T细胞的衰老,达到缓解CD8^(+)T细胞衰老的作用(P<0.01,P<0.001)。结论与BM-MSCs共培养可以缓解T细胞的复制性衰老表型,对CD8^(+)T细胞的抗衰作用更显著,主要通过抑制初始T细胞的衰老实现。

甲醛对鼠BM-MSCs细胞系的遗传毒性影响

目的研究甲醛对BM—MSCs的遗传毒性，从而为甲醛导致白血病的发作提供生物学依据。方法采用噻唑篮比色（Mrrr）法检测BM—MSCs的增殖活性；用彗星、KCI—SDS沉淀、姐妹染色单体互换（SCE）和微核（MN）柃测甲醛对BM—MSCs的遗传毒忡效应。结果75～200μmol／L。甲醛可呈剂量依赖抑制BM—MSCs的增殖（P〈0．01），诱导BM—MSCsDNA断裂效应呈现先增高后降低趋势，在125μmol/L时，达到峰值，其中75～150μmol／L甲醛作用较对照组显著升高（P〈0．01）；甲醛在≥125μmol／L，时可以明显引起BM—MSCsDNA-蛋白交联（DPCs）、SCE和MN的形成，较对照组显著升高（P〈0．01）。结论甲醛可抑制BM—MSCs的增殖活性，并且对BM—MSCs具有一定的遗传毒性效应。

维生素K2促进BM-MSCs成骨分化及其机制研究

目的探讨维生素K2对骨髓来源间充质干细胞(BM-MSCs)成骨分化能力的影响和机制。方法通过CCK-8活细胞计数法检测维生素K2不同浓度(1 nmol/L,10 nmol/L,100 nmol/L,1μmol/L,10μmol/L)在不同时间(24、48、72 h)对BM-MSCs生长增殖的影响,运用Q-PCR检测不同浓度维生素K2对BM-MSCs成骨分化相关基因BMP-2表达水平的影响,进一步探讨维生素K2是否通过成骨信号通路Smad1/5/8、Runx2及Osterix调控BM-MSCs成骨分化。结果与对照组比较,低浓度(1 nmol/L)的维生素K2不影响BM-MSCs的生长活性,中浓度(10 nmol/L,100 nmol/L,1μmol/L)明显促进BM-MSCs的生长,高浓度(10μmol/L)明显抑制细胞的生长(P<0.05)。中浓度范围的维生素K2呈剂量依赖性地促进BM-MSCs成骨过程中BMP-2 mRNA表达及钙结节的形成,且1μmol/L的维生素K2明显促进BM-MSCs的Smad1/5/8、Runx2及Osterix蛋白水平。结论维生素K2能够促进BM-MSCs的成骨分化,并且可能通过成骨信号轴BMP-2/Smad/Runx2/Osterix来调控BM-MSCs的成骨分化过程。

过表达miR-217调控EZH2促进骨质疏松模型小鼠BM-MSCs成骨分化

目的探究微小RNA-217(miR-217)对骨质疏松症(OP)模型小鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)成骨分化的影响及其可能调控机制。方法将小鼠分为OP组、假手术(sham)组,各12只,均进行了双侧卵巢切除术。将OP小鼠BM-MSCs分为对照组、miR-NC组、miR-217 mimics组、miR-217 mimics+pcDNA 3.1组、miR-217 mimics+pcDNA 3.1-EZH2(果蝇zeste基因增强子同源物2)组,分别不做转染、转染miR-NC、转染miR-217 mimics、转染miR-217 mimics及pcDNA 3.1、转染miR-217 mimics及pcDNA 3.1-EZH2,之后进行成骨诱导分化。RT-qPCR/Western blot检测miR-217及EZH2、OCN、Runx2、collagenⅠmRNA和蛋白表达情况;酶标仪检测各组BM-MSCs碱性磷酸酶(ALP)活性;利用茜素红S(ARS)染色测定法对各组BM-MSCs进行染色,观察染色情况;双荧光素酶报告基因验证miR-217与EZH2的靶向关系。结果OP组小鼠骨组织及BM-MSCs中miR-217表达水平低于sham组(P<0.05),EZH2 mRNA表达水平高于sham组(P<0.05)。miR-217 mimics组BM-MSCs中miR-217表达水平,OCN、Runx2、collagenⅠmRNA和蛋白表达水平,ALP活性高于对照组和miR-NC组(P<0.05),EZH2 mRNA及蛋白表达水平低于对照组和miR-NC组(P<0.05),ARS染色程度重于对照组和miR-NC组。miR-217 mimics+pcDNA 3.1-EZH2组BM-MSCs中EZH2 mRNA及蛋白表达水平高于miR-217 mimics组、miR-217 mimics+pcDNA 3.1组(P<0.05),OCN、Runx2、collagenⅠmRNA和蛋白表达水平,ALP活性低于miR-217 mimics组、miR-217 mimics+pcDNA 3.1组(P<0.05),ARS染色程度轻于miR-217 mimics组、miR-217 mimics+pcDNA 3.1组。miR-217与EZH2 mRNA 3′UTR区有结合位点,WT-EZH2+miR-217 mimics组荧光素酶相对活性低于WT-EZH2+miR-NC组(P<0.05)。结论过表达miR-217可通过靶向抑制EZH2表达,促进OP小鼠BM-MSCs成骨分化,为临床防治OP提供新策略。

TGF-β1基因转染BM-MSC对肝癌转移潜能影响的实验研究

目的观察经TGF-β1基因修饰的人骨髓间充质干细胞(hMSC)对高转移潜能肝癌细胞(MHCC97-H)增殖能力及侵袭能力的影响。方法 1利用Gateway Technology法构建TGF-β1慢病毒载体,eGFP为报告基因,转染hMSC,病毒滴度测定转染率;2 Transwell法检测hMSC与肝癌细胞共培养实验,下室加入500μl含20﹪FBS的培养基和1×104个基因修饰前后hMSC,上室加入100μl浓度为1×106个/ml的人高转移肝癌细胞(MHCC97-H)悬液,小室置于37℃,5﹪CO2培养箱内培养48 h,结晶紫染色,细胞计数,检测MHCC97-H细胞侵袭能力的变化;3 CCK-8法检测与hMSC共培养前后MHCC97-H增殖能力的变化;4 PCR法检测转基因hMSC与MHCC97-H细胞共培养前后转移相关因子基因α-V,肿瘤生长因子TGF-β1和肿瘤凋亡因子PDCD4等基因表达。结果 (1)hMSC TGF-β1过表达组细胞的转导率达90﹪以上。(2)MHCC97-H细胞增殖能力检测结果 :1 MHCC97-H与hMSC细胞共培养后,MHCC97-H增殖能力增强;2 hMSC TGF-β1基因过表达组对MHCC97-H细胞增殖具有抑制作用。(3)MHCC97-H细胞侵袭能力检测结果 :1 MHCC97-H与hMSC细胞共培养后,侵袭能力增强;2 hMSC TGF-β1基因过表达组对MHCC97-H细胞侵袭能力具有明显的抑制作用。(4)Q-PCR检测结果:1hMSC基因转染组TGF-β1表达明显增高;2 hMSC基因转染共培养组MHCC97-H细胞TGF-β1基因表达明显低于对照组;3 hMSC基因转染共培养组MHCC97-H细胞α5基因表达降低;4 hMSC基因转染共培养组MHCC97-H细胞PDCD4基因表达降低。结论 TGF-β1基因hMSC过表达组细胞MHCC97-H细胞的转导率达90﹪以上;转基因hMSC具有抑制MHCC97-H细胞增殖和细胞侵袭的作用。

过表达BMP-12的兔BM-MSCs在3D打印PLGA支架上的增殖与分化特性研究

目的探讨过表达骨形态发生蛋白-12(Bone Morphogenic Protein 12,BMP-12)的兔骨髓间充质干细胞(Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells,BM-MSCs)在3D打印聚乳酸-羟基乙酸(Polylactic-co-glycolic Acid,PLGA)支架上的增殖与分化特性。方法采用3D打印技术制备PLGA支架,并检测其降解性能,分离、培养兔BM-MSCs,使用BMP-12重组腺病毒表达载体转染兔BMMSCs,并将其种植在PLGA支架上,检测支架的细胞毒性及种植的细胞在支架上的增殖活性,通过实时荧光定量PCR和Westernblot技术检测种子细胞Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、BMP-12、SCX、Tnmd、Tnc的基因和蛋白表达水平。结果PLGA支架具有良好的生物相容性和生物可降解性。在种植了过表达BMP-12的BM-MSCs的3 D打印PLGA支架上,BM-MSCs的Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白、BMP-12、SCX、Tnmd、Tnc的mRNA和蛋白表达水平显著升高。结论本研究结果提示,在携带过表达BMP-12的BM-MSCs的3 D打印PLGA支架上,BMP-12的过表达促进了BM-MSCs的腱向分化。携带过表达BMP-12的BM-MSCs的PLGA支架可以为肌腱损伤修复提供一种新的治疗方法。

基于IL-23/IL-17轴探讨消脂化纤汤联合BM-MSCs移植对实验性NASH肝硬化小鼠的作用效应

目的:基于IL-23/IL-17轴探讨消脂化纤汤联合骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)移植对实验性非酒精性脂肪性肝炎(NASH)肝硬化小鼠的作用。方法:56只健康SPF级C57BL/6小鼠随机选出8只用于骨髓间充质干细胞的分离与培养,8只小鼠作为空白对照组,其余40只小鼠采用蛋氨酸胆碱缺乏饮食(MCD)联合10%四氯化碳(CCl4∶橄榄油=1∶9)腹腔注射共8周制备实验性NASH肝硬化小鼠模型。造模成功后将其分为模型组、自然恢复组、中药干预组、BM-MSCs移植组和中药干预联合BM-MSCs移植组。BM-MSCs移植组经尾静脉注射BM-MSCs,中药干预组给予消脂化纤汤方灌胃,中药干预联合BM-MSCs移植组予以消脂化纤汤方灌胃联合尾静脉注射BM-MSCs。BM-MSCs移植在第9周进行,灌胃均为每日2次,连续4周,12周末处死小鼠并采集血液及标本。采用全自动生化分析仪检测血清生化指标(ALT、AST、ALB),ELISA法测定血清及肝组织炎性因子IL-23、IL-17水平,ELISA法测定血清及肝组织中肝细胞再生增强因子(ALR)表达,RT-qPCR法检测肝脏淋巴细胞中IL-17、IL-23mRNA的表达。结果:小鼠一般状态观察,与空白对照组比较,模型组小鼠精神萎靡,活动减少,毛色暗,进食减少,体质量逐渐降低;各干预组较模型组均有不同程度改善;与空白对照组比较,模型组和自然恢复组小鼠血清ALT及AST活性、血清及肝组织炎性因子(IL-23、IL-17)水平、肝脏淋巴细胞中IL-17和IL-23 mRNA相对表达水平明显升高(P<0.05),血清及肝组织ALR水平、ALB含量降低(P<0.05);与模型组比较,中药干预组、BM-MSCs移植组、中药干预联合BM-MSCs移植组小鼠血清ALT及AST活性、血清及肝组织炎性因子(IL-23、IL-17)水平、肝脏淋巴细胞中IL-17和IL-23 mRNA相对表达水平明显降低(P<0.01),血清及肝组织ALR水平、ALB含量升高(P<0.01);与BM-MSCs移植组和中药干预组比较,中药干预联合BM-MSCs移植组改善最为明显(P<0.05)。结论:消脂化纤汤联合BM-MSCs移植对改善实验性NASH肝硬化小鼠肝脏功能、促进BM-MSCs移植转/分化及肝脏细胞再生具有良好效应,其机制可能与抑制机体IL-23/IL-17炎症轴过度激活,改善肝脏免疫微环境相关。

Induced Monocytes-Derived HSCs (CD34+) with LPS Accelerated Homing Rat Bone Marrow-Mesenchymal Stem Cell (BM-MSCs, CD105) in Injured Pancreas

Investigating the function of combining induced rat monocytes-derived bone marrow-haemopoietic stem cell (rat BM-HSCs) with LPS and rat bone marrow-mesenchymal stem cell (rat BM-MSCs) was to analyze the acceleration of homing process mechanism in injured pancreas. Mononucleated stem cells were isolated from aspirated whole rat BM using ficoll and cultured in α-MEM complete growth medium in 10 cm petridish. After two days, adherent cells after washing twice in petridish were added α-MEM growth medium and then mesenchymal cells were characterized using CD105 marker in third passage and labeled PKH26. Then haemopoietic stem cells (HSCs) were isolated with magnetic beads CD34+ and differentiated in vitro, and then induced monocytes with LPS. Animal experiment used 28 male Wistar rats, and divided them into 4 groups. After transplantation combined, both cells between monocyte derived HSc (mHSCs) and rat BM-MSC were analyzed expression of pair box gen 4 (Pax4), pancreatic and duodenal homeobox (Pdx1), C-peptide using immunohistochemistry, then secretion of insulin and C-peptide analyzed using indirect ELISA. Results showed that the expressions of Pax4, Pdx1, C-peptide found in the surface membrane cell of pancreatic cell, and secreted C-peptide and insulin were shown significant (P < 0.05) in transplanted group 2, 3 and 4, but in group 3 were transplanted with combined cells more dominant than non-combined cells. Conclusions suggested that combining of induced monocytes-derived HSCs and rat BM-MSCs has accelerated homing MSCs into injured pancreatic tissue.

心肌微环境中Wnt11与BMP2协同作用促大鼠BM—MSCs分化为心肌样细胞的实验研究

目的探讨在心肌微环境的旁分泌作用中，Wnt11与BMP2对促进大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow—mesenchymal stem cells，BM—MSCs）分化为心肌样细胞的协同作用。方法建立Transwell共培养模型，将心肌细胞及转染Wnt11质粒的3T3细胞置于上层、BM—MSCs置于下层培养，前3天应用含50μg/L Noggin（BMP抑制剂）培养液、第4天换用含0．5μg/L BMP2的培养基诱导培养至第14天。根据不同诱导条件，培养细胞分为7组：阳性对照组（Heart组）、CM组、CM＋BMP2组、CM＋Wnt11组、Wnt11＋BMP2组、CM＋Wnt11＋BMP2组、阴性对照组（BM—MSCs组）。诱导培养结束后，采用RT—PCR方法，检测心肌特异性转录因子（Nkx2．5、GATA4、Mef2c）和成熟心肌细胞特异性基因（cTnI、ANP、d—MHC、B—MHC）mRNA表达水平。结果RT—PCR结果显示，在心肌细胞旁分泌微环境下，Wnt11与BMP2协同作用组（CM＋Wnt11＋BMP2组）心肌特异性转录因子和成熟心肌细胞特异性基因的表达明显高于阴性对照组和其他共培养对照组，低于阳性对照组（P〈0．05）。结论在心肌细胞旁分泌微环境中，Wnt11协同BMP2表达可提高BM—MSCs向心肌样细胞分化的效率。

尼克酰胺联合Exendin-4促进大鼠骨髓间充质干细胞体外转分化为胰岛素分泌细胞团的研究

尼克酰胺联合Exendin4能明显促进大鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs)转分化为胰岛素分泌细胞团,表达胰岛素、C肽和相应基因。

成纤维生长因子-2与肝细胞生长因子诱导骨髓间充质干细胞分化为肝细胞样细胞的作用比较

比较成纤维生长因子-2(FGF-2)与肝细胞生长因子(HGF)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)向肝细胞分化的能力,并进一步的研究BM-MSCs诱导成肝细胞所需的最佳诱导因子以及其用量。体外获取、培养大鼠BM-MSCs,将第3代BM-MSCs采用不同剂量的FGF-2和HGF诱导。诱导后,在显微镜下观察细胞形态学的改变;Shiff染色法检测糖原的分泌;ELISA法检测AFP的分泌;免疫细胞化学法检测白蛋白和CK19的分泌。诱导后BM-MSCs由梭形向多角形、卵圆形方向变化,AFP第3天就有分泌,第12天达到高峰,以后逐渐减少;白蛋白、CK19和糖原第12天即有阳性表达,以后随着诱导时间的延长阳性率逐渐升高。第2组和第4组比其他组分泌的白蛋白、CK19和糖原均多。FGF-2比HGF具有更强的诱导BM-MSCs向肝细胞分化的能力。

明胶-Ficoll法分离骨髓单个核细胞的方法学探讨

目的比较直接利用Ficoll一步法和明胶-Ficoll两步法分离骨髓单个核细胞(MNCs)的效果。方法无菌条件下取人骨髓液40mL,平均分为两份。一份采用Ficoll一步法直接分离MNCs;另一份先采用明胶沉淀红细胞后,再利用Ficoll分离MNCs。比较两者的分离效率、细胞活力、CD34+和CD44+/CD71+的表达规律。结果一步法和两步法分离效率、细胞活力差异无统计学意义;两步法分离所得的MNCs表达CD34+的细胞数和CD44+/CD71+的细胞数高于一步法,差异有统计学意义。结论采用明胶-Ficoll两步法分离骨髓单个核细胞不但不会增加MNCs的损失,还可更好地保留骨髓造血干细胞和骨髓间充质干细胞。

低分子肝素对VEGF作用下兔骨髓MSCs促增殖能力的影响

目的探讨小剂量低分子肝素钠(12.5U/ml)能提高兔骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)在血管内皮生长因子(VEGF)诱导下时细胞增殖能力和贴壁率。方法联合应用肝素和VEGF共同作用于兔骨髓MSCs,比较肝素组和未加肝素组细胞的生长曲线和贴壁率曲线,并观察细胞的形态变化。结果肝素组诱导细胞的倍增时间为(47.3±3.7)h,未加肝素组为(53.6±6.5)h,P=0.000<0.01;肝素组贴壁率较无肝素组稍微降低,P=0.921>0.05。两组细胞形态都呈“铺路石状”,差别不大”。结论小剂量低分子肝素钠能够增强兔骨髓MSCs在VEGF作用下增殖能力。

炎性环境对骨髓间充质干细胞分泌TGF-β家族分子影响的实验研究

目的:探讨在炎性环境下骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)分泌TGF-β家族分子的特点。方法:采用Real-time PCR、细胞免疫荧光及ELISA等方法分别检测TGF-β家族分子基因和蛋白的表达水平。结果:BM-MSCs可以分泌TGF-β家族分子,并且在炎性因子刺激下其表达明显上调。结论:炎性环境可促进BM-MSCs分泌生物活性因子,对其在创伤愈合中的应用提供了进一步的理论和实验基础。

MicroRNA-146a对人骨髓间充质干细胞分化能力的影响

目的:探讨MicroRNA-146a(miR-146a)对人骨髓间充质干细胞(BM-MSC)分化能力的影响。方法:从健康志愿者骨髓中分离培养BM-MSC,用miR-146a抑制剂或类似物转染细胞,实时定量PCR检测转染后细胞miR-146a表达量。应用分化实验方法比较转染后各组细胞成脂及成骨分化能力的改变情况,了解miR-146a对BM-M SC分化能力的影响。结果:BM-M SC能够诱导分化成脂肪及成骨细胞。用miR-146a抑制剂或类似物转染细胞后,细胞miR-146a表达量出现相应的下调或上调,与对照组相比,转染miR-146a抑制剂后细胞miR-146a表达下调(P<0.01),转染miR-146a类似物后细胞miR-146a表达显著上调(P<0.01)。在成脂分化实验中,转染miR-146a抑制剂可抑制BM-M SC向脂肪细胞分化(P<0.01),转染miR-146a类似物可促进BM-M SC向脂肪细胞分化(P<0.01);在成骨分化实验中,转染miR-146a抑制剂或类似物对BM-MSC成骨分化均无明显影响(P>0.05)。结论:BM-MSC具有成脂及成骨分化潜能,miR-146a可促进BM-MSC向脂肪细胞分化。

MicroRNA-214对骨髓间充质干细胞诱导脐血CD34^+细胞迁移的影响

目的:探讨MicroRNA-214(miR-214)对骨髓间充质干细胞(BM-MSC)诱导脐血CD34^+造血干/祖细胞迁移的影响。方法:以miR-214类似物(miR-214 mimic)或抑制物(miR-214 inhibitor)瞬时转染BM-MSC,实时定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-214的表达量,应用趋化实验观察各组细胞培养上清对人脐带血CD34^+细胞的迁移能力的影响。酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测培养上清中趋化因子SDF-1的分泌水平。结果:BM-MSC培养上清明显促进CD34^+细胞迁移。与未转染对照组(Control组)和阴性对照组(Negative Control组,NC组)相比,miR-214类似物组明显促进CD34^+细胞的迁移(P<0.01),而miR-214抑制物组表现为抑制CD34^+细胞的迁移(P<0.01)。ELISA检测显示,各组的SDF-1浓度无明显差异(P>0.05)。结论:miR-214转染的骨髓间充质干细胞培养上清可促进CD34^+细胞的迁移,其原因与趋化因子SDF-1无明显相关性。

h1-calponin基因对五指山小型猪骨髓间充质干细胞体外成骨分化的影响

【目的】通过碱性调宁蛋白(h1-calponin)基因与五指山小型猪骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM MSCs)成骨分化关系的研究,探讨成骨分化机制。【方法】添加成骨分化液对BM MSCs进行成骨分化诱导,采用茜素红染色的方法鉴定细胞成骨分化的程度;通过定量PCR分析h1-calponin基因及成骨相关基因骨桥蛋白(osteopotin,OPN)、骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)、核心结合因子α1(core binding factor a1,Cbfα1)及核心结合因子β(core binding factor beta,Cbfβ)表达谱。【结果】①随着诱导时间的延长,茜素红染色矿化结节逐渐增多;②成骨标志基因OPN和OCN表达趋势一致:诱导0至14 d,基因表达量呈增长趋势,诱导14 d表达量最高,而后下降;成骨相关基因Cbfα1和Cbfβ表达量于第7天达到最高峰,之后逐渐下降,但仍高于诱导前;③h1-calponin基因表达量随着诱导的延续逐渐下降;诱导14—21 d时,该基因基本不表达。【结论】h1-calponin基因的表达与五指山小型猪骨髓间充质干细胞体外成骨分化存在着负相关,可能是成骨分化的负调控基因。

骨髓基质细胞通过TSP-1/CD36通路对急性髓系白血病细胞影响的初步研究

目的:探讨骨髓基质细胞(bone marrow-derived mesenchymal stromal cells,BM-MSCs)对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞影响的作用机制。方法:构建MLL-AF9过表达诱导的AML小鼠模型,通过PCR比较AML小鼠和野生型小鼠(WT)BM-MSCs内TSP-1的表达差异。通过慢病毒载体使AML小鼠来源的BM-MSCs高表达TSP-1后,与AML细胞行transwell共培养,检测AML细胞表面TSP-1受体CD36及CD47的表达及AML细胞的生长情况。在共培养体系中加入CD36抑制剂N-油酰基硫代琥珀酰亚胺,检测AML细胞增殖、凋亡的变化。结果:AML小鼠BM-MSCs中TSP-1的表达低于对照组。过表达TSP-1的BM-MSCs与AML细胞行transwell共培养后AML细胞的生长受到抑制,且AML细胞表面的CD36受体表达升高,但CD47表达无明显差异。在共培养体系中加入CD36抑制剂N-油酰基硫代琥珀酰亚胺后,AML细胞增殖加快,凋亡减少。结论:TSP-1/CD36信号通路有望成为治疗AML的潜在靶点。

白细胞介素-10抑制类风湿关节炎患者的研究进展

类风湿关节炎(RA)是以全身多处关节炎症为主的自身免疫性疾病。调节性B细胞(Breg)具有负向免疫调节作用,能调控炎症疾病发展和介导免疫耐受,目前认为具有表型CD19+CD27+CD24hiCD38hi的B细胞是分泌白细胞介素-10(IL-10)的Breg(B10细胞)的前体细胞。IL-10是重要的炎症抑制性细胞因子,可抑制IL-6、IL-12和IL-17等因子生成,并且能抑制Th细胞分化。有研究表明,RA患者疾病活动度与B10细胞表达成负相关,患者外周血中IL-10、TGF-β浓度水平也下降。骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)已经被证实具有多向分化和自我更新能力,激活BM-MSCs的Wnt/β-catenin通路能挽救成骨细胞增殖抑制,减少脂肪细胞生成。目前广泛应用于实验动物模型炎症反应的治疗。此外,BM-MSCs被外界炎症因素刺激后能产生免疫调节因子,如IDO、PGE2、IL-10等。运用BM-MSCs调控免疫细胞分泌抑炎症介质IL-10,对控制自身免疫性疾病的发展,制定合理有效的针对RA等炎症免疫相关疾病治疗方案具有重要意义。