Quantities and function of NK cells in patients with positive BMMNC-Coombs test and cytopenia

Objective To test NK cell quantities and function in patients with positive BMMNC-Coombs test(CBCPC)and cytopenia and to explore how NK cell participate in the progress of this disease.Methods The percentage of CD3-CD56+NK cell in peripheral blood lymphocytes,the expression of activating receptor(NKG2D,NKp46,NKp44),inhibitory receptor(CD158a,CD158b),per-

The mechanisms underlying bone marrow damage by iron overload in pancytopenic patients with positive BMMNC-Coombs test

Objective To investigate the mechanisms underlying bone marrow damage by iron overload in pancytopenic patients with positive BMMNC-Coombs test (IRP) .Methods Twenty-one iron overloading,26 non-iron overloading IRP patients and 10 normal controls

骨髓增生异常综合征患者骨髓细胞凋亡的初步探讨

采用 TUNEL 法对 2 6例骨髓增生异常综合征 (MDS)、11例巨幼细胞贫血 (Meg A)、8例阵发性血红蛋白尿 (PNH)、6例 Evans综合征患者和 10例正常健康志愿者的骨髓单个核细胞 (BMMNC)凋亡进行探讨。结果发现 ,5 0 % MDS呈现凋亡过度 ,Meg A、PNH和 Evans综合征患者与对照组无显著差异。 MDS患者凋亡累及粒、红、巨三系各阶段造血细胞 ,随病情演变 ,凋亡程度渐下降。提示凋亡过度为 MDS无效造血机制之一 ,病情演变可能与异常克隆逃逸凋亡有关 ,抗凋亡疗法可试用于早期 MDS。

露蜂房纯化蛋白对急性髓系白血病患者骨髓细胞的影响

目的研究中药露蜂房纯化蛋白(nidus vespae protein-Ⅱ,NVP-Ⅱ)对急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)的作用并探讨其机制。方法采用NVP-Ⅱ在体外作用于AML患者BMMNC,经光镜、电镜、Hochest33258染色法、TdT缺口末端标记(TUNEL)技术等方法检测NVP-Ⅱ对AML患者BMMNC的影响。结果不同浓度NVP-Ⅱ对AML患者BMMNC有不同程度的生长抑制和诱导凋亡作用。①光镜下观察到,与生理盐水对照组比较,NVP-Ⅱ处理组AML患者BMMNC数量明显减少,胞质内颗粒增多,并有较多的细胞碎片。②透射电镜下发现,NVP-Ⅱ处理组AML患者BMMNC细胞核染色质浓缩、碎裂,靠核膜边集呈块状,并形成凋亡小体;线粒体基质深染,呈现空泡样变及髓样变。③Hochest33258染色法显示,NVP-Ⅱ处理组AML患者BMMNC核染色质高度凝聚,致密浓染,或裂解呈碎块状,边缘光滑清晰。④TUNEL检测见阳性细胞核深染,NVP-Ⅱ处理组与生理盐水处理组比较,凋亡细胞明显增多(P<0.05)。结论NVP-Ⅱ可抑制AML患者BMMNC生长并诱导其凋亡。

露蜂房蛋白对急性髓细胞白血病患者骨髓单个核细胞超微结构的影响

目的:观察中药露蜂房蛋白(NVP)成份对急性髓细胞白血病(AML)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)超微结构的影响。方法:采用体外细胞培养,加入不同浓度露蜂房蛋白成分作用于AML患者BMMNC,培养72h收集细胞,常规制备超薄切片,透射电子显微镜下观察AML患者BMMNC的超微结构。结果:露蜂房蛋白各处理组细胞核染色质浓缩、边集,呈新月形或环状或细胞核碎裂呈块状。线粒体出现空泡样变及髓样变。结论:中药露蜂房蛋白成份有明显诱导AML患者体外培养BMMNC凋亡的作用,并呈现典型的细胞凋亡超微结构改变。

硫化砷对骨髓增生异常综合征骨髓单个核细胞体外凋亡的作用

为了研究硫化砷(As2S2)在体外对骨髓增生异常综合征患者骨髓单个核细胞增殖的影响,并探讨其可能的作用机制,采用MTT法、流式细胞术、RT-PCR等多参数检测不同浓度As2S2诱导MDS细胞的凋亡。结果表明:①低浓度(0-0.6mg/L)的硫化砷对MDS细胞无明显抑制作用;②相对高浓度的硫化砷(1.5-50mg/L)对低危组MDS以及高危组MDS的单个核细胞均有诱导凋亡作用,且呈时间浓度依赖关系;bcl-2mRNA在As2S2作用后表达明显下调,bcl-2/bax比例明显下降(P<0.05);③MDS病人存在骨髓造血细胞的过度凋亡。结论:MDS病人存在骨髓造血细胞的过度凋亡;低浓度的硫化砷对MDS细胞没有明显的增殖抑制作用,高浓度的硫化砷主要通过诱导凋亡使MDS细胞死亡。

基质细胞对体外扩增造血细胞造血重建活性的促进作用

本研究探讨骨髓单个核细胞 (BMMNC)在不同的培养条件下扩增后是否具有造血重建的活性。在小鼠BMMNC液体培养体系中 ,分别在含有几种细胞因子组合和 (或 )基质细胞层存在的条件下进行体外扩增 ,然后将不同条件下扩增的细胞经尾静脉回输至经致死量照射的小鼠体内 ,动态观察小鼠的骨髓有核细胞数及各种祖细胞集落数 ,以观察其造血重建的效果。结果表明 :单纯细胞因子介导BMMNC体外扩增后并不能增进这些细胞的造血重建功能 ,但含有骨髓基质细胞底层的体外扩增 ,无论是否加入细胞因子 ,均有明显的促进移植受体造血功能重建的作用。结论 :骨髓基质细胞支持下体外扩增的造血细胞具有促进移植受者造血重建的功能 ,证实了在维持体外扩增造血细胞的移植活性中 ,基质细胞具有非常重要的作用。

骨髓单个核细胞对脑梗死大鼠炎症反应的影响

目的探讨骨髓单个核细胞(BMMNCs)是否通过抑制脑梗死大鼠脑内的炎症反应来发挥神经保护作用。方法选择健康雄性SD大鼠,体质量为250~300 g,线栓法制备永久性大脑中动脉闭塞模型(p MCAO),造模成功后,随机分为4组:假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、溶剂组(Vehicle组)、骨髓单个核细胞组(BMMNCs组)。其中BMMNCs组于造模24 h后经尾静脉注射含1×107BMMNCs的PBS细胞悬液200μl;溶剂组注射等量的PBS溶液,分别于24 h、72 h、7 d采用Zea-Longa法进行神经功能评分;干湿重法检测脑组织含水量;TTC法测定脑梗死体积;免疫组化、Western blot技术检测炎性介质环氧化酶-2(COX-2)、白介素-1β(IL-1β)的表达情况。结果 (1)各时间点模型组Zea-Longa评分、脑组织含水量和脑梗死体积均明显高于假手术组(P<0.05),BMMNCs组低于模型组,高于假手术组(P<0.05),模型组与溶剂组相比无差异(P>0.05);(2)各时间点模型组COX-2和IL-1β水平明显均高于假手术组(P<0.05),BMMNCs组低于模型组,高于假手术组(P<0.05),模型组与溶剂组相比无差异(P>0.05)。结论骨髓单个核细胞移植可通过抑制梗死后脑内免疫炎症反应,显著改善脑梗死大鼠的神经功能,这一治疗作用可能与下调COX-2、IL-1β的表达有关。

应用DNA微阵列对骨髓增生异常综合征患者骨髓单个核细胞基因表达谱的初步研究(英文)

为了探讨应用DNA微阵列研究骨髓增生异常综合征 (MDS)的基因表达谱的可行性 ,将 2例患者骨髓单个核细胞RNA各取等量混合后进行逆转录Cy5标记 ,与Cy3标记的正常对照cDNA混合 ,与H14 1微阵列杂交、扫描、软件分析。结果H14 1s芯片中共点样 13484个基因克隆 ,其中 10 6 4个靶克隆是由针对同一基因内不同序列的cDNA片段重复点样至少 2次。重复点样检测结果表明 :在 2张芯片内各自完全一致的分别为 6 2 5个 (5 8.7% )和6 30个 (5 9.2 % ) ,而存在完全相反结果的cDNA片段分别有 2 1个 (2 .0 % )和 11个 (1.0 % )。 10 6 4个靶克隆中重复点样数据完整且分别在 2张芯片内结果一致的共有 4 11个 ,其中在 2张芯片间结果也完全一致的共有 4 0 0个(97 3% )。 2张芯片中MDS与正常对照比较存在差异表达的靶基因分别为 15 4 9和 1311个 ,而 2张芯片间表达差异一致的靶基因为 4 0 9个 ,其中 10 1个基因参与造血调控 ,主要涉及转录因子、细胞周期调节蛋白、代谢相关基因、表面黏附分子等。结论 :DNA微阵列可用于对MDS患者混合标本的表达谱分析 ,为深入研究MDS的发病分子机理提供线索 ,但需要进行重复实验以降低微阵列操作过程引起的表达偏差。

多发性骨髓瘤骨髓单个核细胞CCR1和CCR5的表达及临床意义

目的:探讨趋化因子受体CCR1和CCR5在多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)中的表达及临床意义。方法:半定量RT-PCR检测28例MM患者BMMNC中的CCR1和CCR5 mRNA水平。结果:46.4%患者同时表达CCR1、CCR5,17.86%患者仅表达CCR1,7.1%患者仅表达CCR5;骨质破坏>2级患者的CCR1、CCR5相对灰度值明显高于骨质破坏≤2级的患者(P<0.05);高度危险组中的CCR1、CCR5相对灰度值明显高于中、低度危险组(P<0.05),而中、低度危险组中的CCR1、CCR5相对灰度值无显著性差异(P>0.05)。结论:大部分MM患者均表达CCR1和CCR5受体,监测CCR1、CCR5两种受体在MM中BMMNC的表达可以作为评价患者骨质破坏及预后的指标。

自体骨髓单个核细胞移植对急性肝损伤小鼠组织成瘤性的实验研究

目的观察急性肝损伤小鼠接受自体骨髓单个核细胞(BMMNC)移植后能否导致肿瘤的发生,从而对自体骨髓干细胞(BMSC)移植的安全性进行初步探讨。方法采用CCl4/2-AAF制备小鼠急性肝损伤模型,随机分为6组,A组:BMMNC移植对照组;B组:腹部皮下注射BMMNC0.3ml;C组:经尾静脉注射BMMNC0.3ml;D组:经尾静脉注射BMMNC0.9ml;E组:模型检测组;F组:供体组。BMMNC采用PKH26标记。病理观察小鼠接受BMMNC移植后皮下及肝脏内有无肿瘤形成。结果 C组及D组肝脏内未见肿瘤形成;B组皮下形成一肿物,病理证实为脂肪及淋巴细胞的炎性坏死所形成的包裹。结论理论上自体BMSC移植虽有形成肿瘤的可能性,但在本实验中未见肿瘤形成,自体BMSC移植能否诱发肿瘤还有待进一步探讨。

自体骨髓单个核细胞移植对脑梗死大鼠室管膜下区神经干细胞增殖的影响

目的研究骨髓单个核细胞对脑梗死后脑源性神经营养因子（BDNF）及室管膜下区神经干细胞增殖的影响,探讨骨髓单个核细胞对脑梗死治疗作用的可能机制。方法成年雄性SD大鼠72只,体质量250-300g。梯度离心法分离骨髓单个核细胞,流式细胞术检测细胞纯度,将由模型动物股骨骨髓腔内分离出的单个核细胞经尾静脉途径移植到大鼠体内;线栓法制作脑梗死动物模型,分别于脑梗死后24h、72h通过Western blot技术检测脑部BDNF的表达;室管膜下区神经干细胞的增殖情况于脑梗死7d时通过BrdU/Nestin免疫荧光双染技术进行检测。结果经骨髓单个核细胞移植24h、72h时,BDNF表达的水平在脑梗死大鼠脑部明显增高,与模型组及溶剂组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。自体骨髓单个核细胞移植还促进了脑梗死7d时室管膜下区神经干细胞的增殖,骨髓单个核细胞移植组与模型组以及溶剂治疗组比较,差异亦具有统计学意义（P〈0.01）。结论自体骨髓单个核细胞移植可以显著增加脑梗死大鼠脑部BDNF的表达、并促进室管膜下区神经干细胞的动员。骨髓单个核细胞促进神经干细胞增殖的作用可能与骨髓单个核细胞的神经保护作用有关。

急性髓系白血病骨髓单个核细胞糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D mRNA的表达与意义

本研究探讨糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(glycosylphosphatidilinoditol-specific phospholipase D,GPI-PLD)在急性髓系白血病病人骨髓单个核细胞中的表达及其意义。采用半定量RT-PCR和酶转化底物的百分率的方法检测急性髓系白血病初发组、难治复发组、缓解组与正常对照组骨髓单个核细胞GPI-PLD酶活性和mRNA表达,并比较它们之间的差异。结果显示:急性髓系白血病初治组骨髓单个核细胞GPI-PLD mRNA表达和GPI-PLD活性分别为1.86±0.32、(46.96±7.15)%;缓解组分别为1.26±0.29和(33.36±5.13)%;难治复发组分别为1.79±0.19和(44.31±7.22)%;而正常对照组分别为1.27±0.23和(35.38±5.15)%。初治组和难治复发组的GPI-PLD活性与mRNA表达均明显高于正常对照组,差异具有统计学意义(p<0.01);而缓解组与正常对照组之间比较,差异无统计学意义(p>0.05)。结论:GPI-PLD活性和mRNA表达水平变化一致;初治组和难治复发组急性髓系白血病病人骨髓单个核细胞GPI-PLD活性与mRNA表达水平明显高于正常组。GPI-PLD是否在白血病的发生、发展过程中发挥一定作用,有待进一步研究。

自体骨髓单个核细胞移植对急性肝损伤小鼠凝血机制影响的实验研究

目的观察小鼠自体骨髓单个核细胞(BMMNC)移植后有无输注不良反应,是否形成肝内及肝外血栓及宿主凝血机制有无其他异常表现。方法应用CCl4/2-AAF制备小鼠急性肝损伤模型,然后行BMMNC移植。实验按注射BMMNC的数量随机分成3组:A组为移植对照组;B组为经尾静脉注射BMMNC0.3ml;C组为经尾静脉注射BMMNC0.9ml;分别于移植后1周、2周处死小鼠,取其血清检测D-二聚体值,取肝、肺、心、脑、肾组织观察小鼠BMMNC移植后这些器官有无血栓形成。结果可在肝脏损伤处发现红色荧光;同一时间点各实验组间比较、A组与其他组比较、同一实验组移植后1周与2周比较均有统计学差异(P<0.05)。各器官血栓形成情况:HE染色观察发现,1周及2周肝脏、心脏、肺脏及肾脏均有血栓形成,第2周血栓较第1周明显,脑部未发现血栓。D-二聚体检测:乳胶凝集法检测血清D-二聚体值,各时间点各组间均未发现差异。结论 BALB/C小鼠尾静脉注射BMMNC0.3ml及0.9ml均可致多器官血栓形成。BALB/C小鼠尾静脉注入BMMNC剂量大者形成血栓的机会越大。乳胶凝集法测定D-二聚体值对检测BALB/C小鼠尾静脉移植BMMNC后是否有血栓形成没有帮助。

骨髓单个核细胞分泌细胞因子对脑梗死后小鼠细胞分化的影响

目的研究骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cells;BMMNCs)分泌的细胞因子对脑梗死小鼠细胞分化的影响。方法将雄性昆明小鼠随机分为PBS治疗组和BMMCs治疗组。线栓法制作小鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型;梯度离心法提取BMMNCs;酶联免疫吸附法(ELISA)评价常氧及低氧培养条件下BMMNCs分泌bFGF、VEGF和IGF-1的能力。脑梗死后24 h经尾静脉注射BMMNCs或PBS,脑梗死后1、4、7、14 d行神经功能损害评分(modified Neurological Severity Scores,mNSS)并评价脑组织含水量;脑梗死后7 d TTC染色评价脑梗死体积;脑梗死后14 d免疫荧光检测BMMNCs在脑内的存活、迁移、分布和分化情况。结果 (1)BMMNCs在常氧或低氧条件下培养24 h后,低氧环境下BMMNCs分泌细胞因子(bFGF、VEGF和IGF-1)的能力明显强于常氧环境,差异有统计学意义(P<0.05);(2)与PBS溶剂组相比,BMMNCs治疗组小鼠在脑梗死后4、7、14 d的mNSS评分显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);(3)BMMNCs治疗组小鼠在4、7 d脑组织含水量明显低于PBS治疗组,差异有统计学意义(P<0.05);(4)BMMNCs能够迁移分布至小鼠脑损伤区,并分化为星形胶质细胞和小胶质细胞。结论骨髓单个核细胞可通过分泌细胞因子bFGF、VEGF和IGF-1促进细胞分化,促进神经功能恢复,减少脑梗死体积,减轻脑水肿。

S100A2、Blimp1在多发性骨髓瘤患者骨髓单个核细胞中的表达水平及意义

目的研究S100钙结合蛋白(S100A2)、B淋巴细胞诱导成熟蛋白-1(Blimp1)在多发性骨髓瘤(MM)患者骨髓单个核细胞(BMMNCS)中的表达水平及意义。方法选取2018年3月至2020年5月于河南省中医院治疗的MM患者82例作为观察组(采用VAD治疗方案),同时选取同期贫血患者(常规贫血治疗)35例作为对照组。分别采用酶联免疫吸附法与反转录聚合酶链式反应法检测MM患者BMMNC中SS100A2、Blimp1的水平。观察比较两组一般资料及S100A2、Blimp1表达水平;采用Pearson相关性检验分析MM患者Blimp1、S100A2表达水平的相关性;建立受试者工作特征(ROC)曲线分析MM发生的预测价值。结果观察组S100A2表达水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);Blimp1表达水平显著高于对照,组差异有统计学意义(P<0.05)。S100A2、Blimp1表达水平均为MM发生的独立危险因素(P<0.05)。S100A2与Blimp1呈显著负相关(P<0.05)。S100A2、Blimp1及联合指标预测MM发生的曲线下面积(AUC)分别为0.881、0.836、0.945,联合指标预测价值更高,敏感度和特异度分别为97.1%与78.0%。结论S100A2、Blimp1表达水平均可作为MM发生的独立危险因素,且S100A2、Blimp1表达水平均可作为MM发生的预测因子,其中联合指标预测价值更高。

银屑病患者骨髓单一核细胞中端粒酶及其亚单位的表达

目的:观察银屑病患者骨髓单个核细胞(BMMNC)的端粒酶及其亚单位端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达情况。方法:采用银染-端粒重复序列扩增(TRAP)法检测银屑病患者及正常人BMMNC端粒酶的表达,RT-PCR法检测患者及正常人hTERT mRNA的表达,同时以患者外周血单个核细胞(PBMC)作为自身对照。结果:30例患者骨髓中有4例呈端粒酶阳性,5例呈hTERT mRNA阳性,30例正常骨髓中有3例呈端粒酶阳性,6例呈hTERTmRNA阳性,患者外周血中未检测到端粒酶及hTERTmR-NA的表达。结论:骨髓中端粒酶的表达来源于造血细胞,银屑病患者和正常人骨髓中的端粒酶阳性率无显著差异,银屑病患者骨髓造血细胞增殖活性异常与端粒酶表达无关。

动物细胞培养及单克隆抗体

940587 人骨髓单核细胞干细胞和远祖细胞在连续灌注培养中大规模扩展[英]/Aastrom-Biosciences/Koller, M. R. …∥Blood. -1993, 82(2). -378～384[译自DBA, 1993, 12(19), 93-10999] 研究了用于骨髓(BM)移植或基因治疗的人造血干细胞(HSCs)的体外扩展。用连续灌注培养容器系统扩增来自BM单核细胞(MNC)群体的人干细胞和远祖细胞。10个容器各接种30百万BMMNC,并分别分析不粘附的、松散粘附的和粘附的细胞。总细胞数继续增加,到14天时,扩增量超过10倍。粘附基质层扩增20百万个细胞,但不到总细胞群体的6％。CFU粒细胞巨噬细胞到14天扩增21倍,并在第14天富集4倍。

IFN-γ在小鼠造血调节中的作用

本研究旨在探讨IFN-γ在小鼠骨髓造血调节中的作用及其作用机制。通过RT-PCR方法扩增小鼠IFN-γ(mIFN-γ)片段,构建mIFN-γ慢病毒表达载体pCDH1-mIFN-γ-EF1-copGFP(pCDH-mIFN-γ-GFP)。将pCDHmIFN-γ-GFP和pCDH1-EF1-copGFP(pCDH-GFP)分别与辅助质粒pPACK-A、pPACK-B、pPACK-C组合,通过磷酸钙沉淀法转染293T细胞,制备慢病毒。通过慢病毒将mIFN-γ和GFP转导至C57BL/6J雄性小鼠的骨髓单个核细胞,接种于M3434甲基纤维素完全培养基进行集落形成试验,同时将其通过尾静脉注射给致死剂量照射的受体C57BL/6J小鼠体内,定期进行血常规检查。结果显示,成功构建pCDH-mIFN-γ-GFP慢病毒载体;转导mIFN-γ的293T细胞分泌mIFN-γ蛋白;转导mIFN-γ的小鼠骨髓单个核细胞集落生成数量较对照组显著减少,集落形成能力下降;mIFN-γ组的骨髓移植小鼠血象恢复较GFP对照组延迟,移植后8周流式细胞术检测外周血仍可见GFP阳性细胞。结论:mIFN-γ降低了造血干/祖细胞的增殖能力,延缓骨髓移植小鼠的造血恢复时间。

骨髓单个核细胞移植对脑梗死小鼠神经元高迁移率蛋白1迁移的影响

目的:观察骨髓单个核细胞(BMMNCs)移植对脑梗死小鼠大脑高迁移率蛋白1(HMGB1)迁移的影响。方法:制备BMMNCs后植入模型;测定改良神经功能评分(m NSS);测定梗死体积及相关蛋白表达量;观察HMGB1的迁移情况。结果:移植组m NSS评分和脑梗死体积均较溶剂组减小;HMGB1表达高于溶剂组;晚期糖基化终产物受体及肿瘤坏死因子α表达低于溶剂组;荧光显示小鼠HMGB1释放少于溶剂组。结论:移植BMMNCs抑制梗死小鼠神经元中HMGB1的释放。