补肾益髓生血法AA大鼠含药血清对BMSCs与BMNCs共培养BMNCs增殖分化及SDF-1/CXCR4/PI3K/AKT信号通路的影响

目的:探讨补肾益髓生血法再生障碍性贫血(AA)大鼠含药血清通过SDF-1/CXCR4介导的PI3K/AKT信号通路对骨髓间充质干细胞(BMSCs)与骨髓单个核细胞(BMNCs)共培养BMNCs增殖能力的影响。方法:60Co-γ联合CTX建立再障大鼠模型,各组按文献方法分离血清冻存备用。在分别建立粒系和红系BMSCs与BMNCs共培养体系基础上,用补肾益髓生血法再障大鼠含药血清进行干预。实验分为空白对照组、正常对照组、模型组、康力龙组、滋肾生血组、益髓生血组和温肾生血组。于第4、8、10天分别计数红系集落形成单位(CFU-E)、粒-单核细胞系集落形成单位(CFU-GM)、红系爆式集落形成单位(BFU-E)。共培养10d后,提取细胞总RNA,RT-PCR检测SDF-1、CXCR4、PI3K、AKT与m TOR m RNA的表达。结果:补肾益髓生血法含药血清促进了共培养BMNCs的增殖分化,其集落形成数目显示各治疗组CFU-E、BFU-E、CFU-GM集落形成数量较模型组增加(P<0.05,P<0.01);RT-PCR结果显示康力龙组、滋肾生血组、益髓生血组、温肾生血组SDF-1、CXCR4、PI3K、AKT、m TOR表达较模型组显著升高(P<0.05,P<0.01),集落形成与基因表达均显示,滋肾生血组优于温肾生血组和益髓生血组(P<0.05,P<0.01)。结论:补肾益髓生血法AA大鼠含药血清可以促进BMSCs与BMNCs共培养体系中BMNCs的增殖分化,这可能与SDF-1/CXCR4介导的PI3K/AKT信号通路有关,其中滋肾生血法优于益髓生血法和温肾生血法。

三黄三仙汤对辐射诱发实验小鼠白细胞减少症的作用研究

目的:探讨三黄三仙汤对Se-137辐射诱导小鼠白细胞减少症的疗效和机制。方法:85只清洁级ICR雄性小鼠随机取10只为正常组,余75只以Se-137为放射源复制白细胞减少症动物模型,建成后随机分为5组,分别为模型组、阳性对照组、中药小剂量组、中药中剂量组、中药大剂量组。观察各组的生存差异及存活小鼠的生活质量;各组存活小鼠第1、4、7、10天外周血WBC计数、第10天骨髓有核细胞计数(BMNC)及血清细胞因子GM-CSF水平。结果:中药组小鼠生活质量好于模型组及阳性对照组;中药各剂量组小鼠外周血WBC计数及骨髓有核细胞数与模型组比较有明显回升(P<0.05);中药小剂量组小鼠血清GM-CSF含量较模型组及阳性组明显升高(P<0.05)。结论:三黄三仙汤治疗白细胞减少症有确切疗效,并且对减轻放疗毒副反应有一定作用。

乌贼墨制品促进小鼠造血功能的实验研究

目的:观察乌贼墨制品对小鼠造血功能的影响。方法:用不同剂量的乌贼墨制品分别灌胃正常小鼠和环磷酰胺所致骨髓造血损伤模型小鼠,采用造血祖细胞体外培养方法和实验血液学技术,检测小鼠骨髓有核细胞数、骨髓造血干细胞数、粒单系祖细胞数和外周血WBC、RBC,PLT,Hb和网织红细胞。结果:乌贼墨制品能够显著提高正常小鼠骨髓有核细胞、造血干细胞、粒单系祖细胞和外周血WBC数量;对环磷酰胺所致骨髓造血损伤有显著的拮抗作用和促进其恢复;对正常小鼠和模型小鼠外周血RBC,PLT,Hb和网织红细胞均无显著性影响。结论:乌贼墨制品能够促进骨髓造血。其作用途径可能通过调节机体的免疫机能,诱导产生多种细胞因子,促进造血干细胞、粒单系祖细胞的增殖,并向粒系分化,促进小鼠的粒系造血。

枸杞多糖对受X射线照射小鼠外周血象及骨髓单个核细胞的影响

利用直线加速器全身均匀一次性照射昆明小鼠,建立放射损伤模型,经腹腔分别注射生理盐水(NS)、枸杞多糖(LBP)50、100和200 mg/kg,连续注射观察14天,计数小鼠外周血WBC、RBC、PLT及骨髓单个核细胞(BMNCs),检测BMNCs的细胞周期、凋亡率及BMNCs表面黏附分子CD49d和CD44的表达水平。结果表明,照射后小鼠表现为饮水、进食减少,行动缓慢、嗜睡,毛发凌乱,光泽性差,说明放射损伤模型建立成功;在相同时间点下,NS组与正常对照组相比,外周血WBC、RBC、PLT及BMNCs细胞计数明显减少(p<0.05)、BMNCs的细胞增殖能力明显减弱(p<0.05)、S期细胞比例显著减少(p<0.05)、G_0/G_1期细胞比例显著增加、BMNCs的细胞凋亡率明显增多(p<0.05)、黏附分子CD49d和CD44表达明显减少(p<0.05);而各LBP组与NS组相比,外周血各项指标、BMNCs细胞计数明显增多(p<0.05)、BMNCs细胞的增殖能力明显增强(p<0.05)、S期细胞比例显著增多(p<0.05)、G_0/G_1期细胞比例显著减少、细胞凋亡率明显减少(p<0.05)、黏附分子CD49d、CD44表达明显增加(p<0.05)。以上结果说明,LBP可能通过加速BMNCs细胞周期由G_0/G_1期向S期转换、降低BMNCs细胞凋亡率,提高放射损伤小鼠BMNCs细胞的增殖能力,进而上调细胞表面黏附分子CD49d和CD44的表达,来促进辐射损伤小鼠造血功能的恢复。

补肾解毒活血法对骨髓抑制小鼠造血功能的影响

目的探讨补肾解毒活血法对骨髓抑制小鼠造血功能的影响。方法取昆明小鼠60只,随机分成空白对照组、模型组和中药治疗组,每组各20只,模型组和中药治疗组腹腔注射环磷酰胺100mg/(kg·d),连续3天;造模完成后次日起,中药治疗组给予补肾解毒活血中药浓煎液灌胃,0.36g/(kg·d),空白对照组与模型组灌服等量生理盐水,连续10天。各组随机抽取10只,于造模前1天及造模后第1、3、5、7、10、14天检测小鼠外周血象;其余10只于造模后第11天,颈椎脱臼处死,检测骨髓造血祖细胞集落形成和骨髓有核细胞(Bone Marrow Nucleated Cell,BMNC)的情况。结果外周血白细胞,模型组和中药治疗组均在造模后第1天降到最低点,与空白对照组相比差异均有显著性意义(P<0.01);模型组和中药治疗组均在第3天开始回升,中药治疗组在第5天恢复正常且保持稳定,而模型组在第7天出现异常性增高后又逐渐下降至正常。外周血血小板,模型组在模后第5天降到最低然后回升至第10天恢复正常,而中药治疗组自第3天即开始回升,第7天时即与空白对照组持平,其最低值明显高于模型组(P<0.01)。造模后第11天检测粒细胞-巨噬细胞集落生成单位(CFU-GM)、定向体外红系集落形成单位(CFU-E)、红细胞爆裂型集落生成单位(BFU-E)和小鼠骨髓有核细胞数(BMNC),模型组和中药治疗组均低于空白对照组(P<0.05),而中药治疗组高于模型组(P<0.01)。结论补肾解毒活血法治疗骨髓抑制可通过增加骨髓造血祖细胞数量,从而促进环磷酰胺致骨髓抑制小鼠外周血白细胞、血小板的稳定恢复。

中药联合干细胞蛛网膜下腔移植对缺血再灌注大鼠脑脊液NGF的影响

目的:研究中药对蛛网膜下腔移植骨髓单个核细胞(BMNC)或骨髓间充质干细胞(BMSC)治疗缺血性脑卒中大鼠干细胞因子的影响。方法:分离培养BMNCs和BMSCs,140只Wistar大鼠随机分为7组:1正常组,2假手术组,3模型组,4BMNC组,5BMNC联合中药组,6BMSC组,7BMSC联合中药组。3、4、5、6、7组应用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌2h模型(MCAO),24h后通过蛛网膜下腔注射法移植100微升0.01MPBS溶液(3组)、BMNCS悬液(4组、5组,2.0×107个)或BMSCs悬液(6组、7组,2.0×107个),5组、7组当日进行中药灌胃。应用定量ELISA法于移植后4天、28天检测脑脊液(CSF)内Neural growth factor(NGF)含量。结果:模型组CSF中NGF水平在移植后28天有所升高,4、5、6、7组在移植后4dNGF水平均较模型组明显升高(P<0.05),5、6、7组在移植后28天NGF水平均较模型组明显升高。BMNC组和BMSC组间比较没有明显差异。中药联合BMNC组在治疗28天时较单纯BMNC组明显升高,中药联合BMSC组在治疗4天、28天时均较单纯BMSC组增高。两组中药联合组间比较,治疗4天时中药联合BMSC组NGF含量更高。两中药联合治疗组在治疗28天时均较4天水平升高。结论:脑动脉阻塞本身就可以使大鼠脑脊液中NGF水平升高,BMNC和BMSC移植可进一步提高MCAO大鼠CSF中NGF水平,中药联合BMNC或BMSC移植治疗对NGF水平的升高具有协同增效作用。

兰州百合多糖片段对X射线诱导的小鼠骨髓有核细胞损伤的保护作用

研究兰州百合多糖片段(Lanzhou lily polysaccharide fragment,LLP)对X射线诱导的小鼠骨髓有核细胞(Bone marrow nucleated cells,BMNCs)损伤的辐射防护作用。采用超声辅助热水法提取并制备百合粗多糖,经超滤法、Sephadex G-150色谱等方法分离纯化后得到LLP,其平均分子量为8629.8 Da。建立小鼠急性放射性损伤模型,设立对照组、单纯照射组及低、中、高不同浓度LLP给药组,检测各组BMNCs数量、微核率、DNA损伤情况以及细胞凋亡和周期变化。结果表明:与对照组相比,照射组辐射损伤明显;与单纯照射组相比,LLP中、高剂量组BMNCs数量分别升高45.5%(p<0.01)、49.0%(p<0.01);低、中、高剂量组微核率分别降低7.2%(p<0.05)、33.5%(p<0.01)和59.9%(p<0.01);中、高剂量组彗星电泳尾矩和Olive尾矩分别降低51.2%(p<0.01)、58.2%(p<0.01)和54.0%(p<0.01)、60.5%(p<0.01);低、中、高剂量组γH2AX荧光强度分别降低19.7%(p<0.01)、46.8%(p<0.01)和61.0%(p<0.01);低、中、高剂量组凋亡率分别降低43.7%(p<0.01)、45.5%(p<0.01)和54.6%(p<0.01);中、高剂量组G0/G1期细胞比例明显降低(p<0.01),中、高剂量组S期细胞比例显著升高(p<0.01),高剂量组G2/M期细胞比例显著升高(p<0.01)。结果提示,LLP能减少BMNCs损伤,降低微核率以及降低X射线引起的DNA双链断裂,还对X射线引起的细胞凋亡有保护作用。可能对X射线诱导的小鼠BMNCs损伤具有保护作用。

骨髓单个核细胞体外培养诱导分化为脂肪细胞

目的体外培养骨髓单个核细胞（BMNCs），并观察其成脂肪细胞分化能力。方法无菌取SD大鼠骨髓制作细胞悬液，差速贴壁法培养第三次贴壁细胞，传代扩增，取3-5代细胞用于实验。流式细胞分析检测CD34、CD44、CD45、CD90、CD144（VE—cadherin）和血管内皮细胞生长因子受体．2（KDR）表达；STEMPRO Adipogenesis Differentiation Kit检测细胞成脂肪分化能力。结果通过差速贴壁法可获得相对单一的BMNCs，流式细胞分析表明培养的BMNCs细胞表达CD34、CD44、CD45及CD90等表面标志，但不表达CDl44和KDR；在未经诱导的情况下，培养的BMNCs能自发分化为脂肪细胞；培养BMNCs成脂肪细胞诱导后在第3、5、7d，成脂率分别为（22．4±3．8）％、（55．6±11．4）％以及（82．4±17．7）％，显著高于诱导培养第1d[（1．3±1．1）％，P〈0．011。结论骨髓单个核细胞体外培养后可以诱导分化为脂肪细胞。

蛛网膜下腔移植骨髓源干细胞与中药联合治疗对缺血再灌大鼠脑内BDNF的影响

目的:研究骨髓间充质干细胞BMSC和骨髓单个核细胞BMNC经蛛网膜下腔移植与口服中药联合应用对缺血再灌注脑组织中脑源性神经营养因子(BDNF)含量的影响。方法:分离培养BMNCs和BMSCs,140只Wistar大鼠随机分为7组:①正常组、②假手术组、③模型组、④BMNC组、⑤BMNC联合中药组、⑥BMSC组、⑦BMSC联合中药组。③④⑤⑥⑦组应用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌2 h模型(MCAO),24 h后通过蛛网膜下腔注射法移植100微升0.01MPBS溶液(③组)、BMNCS悬液(④组、⑤组,2.0×107个)或BMSCs悬液(⑥组、⑦组,2.0×107个),⑤组、⑦组当日进行中药灌胃。应用定量ELISA法于移植后4 d、28 d检测脑组织)内BDNF的含量。结果:BMNC组和BMSC组在移植后4 d即可成倍提高脑匀浆内BDNF含量,至28 d时仍较模型组含量高,两组间比较无差异;中药联合BMNC组和中药联合BMSC组在4 d、28 d时均较单纯BMNC或BMSC移植组脑内BDNF含量成倍增高,且中药联合BMNC组在28 d时较中药联合BMSC组水平略高。结论:BMSC和BMNC经蛛网膜下腔移植可明显上调MCAO大鼠脑组织中BDNF水平,中药联合BMNC或BMSC治疗可使BDNF水平成倍提高,比单纯BMNC或BMSC移植更显优势。

黄鼬干粉胶囊对再生障碍性贫血模型小鼠造血功能的影响

目的:观察黄鼬干粉胶囊对再生障碍性贫血(AA)模型小鼠造血功能的影响及作用机制。方法:采用X射线+环磷酰胺+氯霉素复合方法复制小鼠AA模型,观察黄鼬干粉胶囊对小鼠外周血象、骨髓有核细胞数(BMNC)、骨髓粒细胞-巨噬细胞集落生成单位(CFU-GM)、血清中可溶性细胞间黏附因子1(s ICAM-1)和骨髓组织病理学的影响。结果:黄鼬干粉胶囊能明显增加模型小鼠外周血中HGB、RBC、WBC和PLT数量,能增加骨髓BMNC数量,还能升高骨髓CFU-GM和降低血清s ICAM-1。与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。骨髓组织病理学结果表明,黄鼬干粉能明显改善模型小鼠骨髓增生低下和造血灶减少,促进骨髓造血。结论:黄鼬干粉胶囊能改善AA模型小鼠造血功能,其作用机制可能与调节骨髓CFU-GM和血清s ICAM-1的平衡有关。

蛛网膜下腔移植骨髓源干细胞与中药联合干预对缺血再灌注大鼠脑组织中胶质源性神经营养因子的影响

目的观察骨髓间充质千细胞（bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSC）或骨髓单个核细胞（bonemarrowmononuclearcells，BMNC）蛛网膜下腔移植、以及联合中药蝮龙抗栓丸干预对缺血再灌注（middlecerebralarterialocclusion，MCAO）大鼠脑组织中胶质源性神经营养因子（gilialcell．1inederivedneurotrophicfactor，GDNF）含量的影响。方法分离培养骨髓源干细胞BMNCs、BMSCs，将Wistar大鼠140只随机分为7组：正常组、假手术组、缺血再灌注模型组、BMNC组、中药联合BMNC组、BMSC组、中药联合BMSC组。除正常组、假手术组外，其余5组建立MCAO大鼠模型，并在模型建立24h后，应用蛛网膜下腔注射法进行干预：缺血再灌注模型组组注射100ul0．01M的PBS溶液；BMNC组、中药联合BMNC组移植100μl的BMNCs悬液2．0×107个；BMSC组、中药联合BMSC组移植100glBMSCs悬液2．0×107个；中药联合BMNC组、中药联合BMSC组移植当日开始配合中药蝮龙抗栓丸灌胃治疗。移植后4d、28d应用定量酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测脑组织内GDNF的含量。结果28d时，与正常组（53．46±3．91）pg／ml比较，缺血再灌注模型组GDNF含量升高[（62．60±4．05）pg／ml，P〈0．05）]；与缺血再灌注模型组比较，在移植后4d、28dBMNC组（194．21±39．56）pg／ml、（67．70±4．73）pg／m1]、BMSC组[（169．83±28．84）pg／ml、（82．66±32．23）pg／m1]，28d时BMSC组升高明显（P〈0．05）。与单纯移植BMNC组、BMSC组比较，4d、28d中药联合BMNC组[（560．61±194．84）pg／ml、（265．83±93．58）pg／m1]、中药联合BMSC组[（370．93±46．19）pg／ml、（247．34±98．02）pg／m1]GDNF含量均升高（P均〈O．05）；且4d时中药联合BMNC组升高明显（P〈0．05）。结论蛛网膜下腔移植BMSC、BMNC可上调MCAO大鼠脑组织中GDNF水平，中药联合BMNC组、中药联合BMSC可提高GDNF水平，中药联合治疗比单纯BMNC或BMSC移植有一定优势。

线粒体ALDH2缺失对小鼠骨髓源性内皮祖细胞功能的影响

目的研究线粒体乙醛脱氢酶2(ALDH2)缺失对体外培养的小鼠骨髓内皮祖细胞(EPCs)生长状态及功能的影响。方法分别取C57BL/6小鼠(WT)和相同背景来源的A/d/h2基因缺失(Aldh2-/-,KO)小鼠的股骨和胫骨,PBS冲洗获得骨髓细胞组份,密度梯度离心收集单个核细胞白膜层,并进行细胞计数,同时观察不同基因型来源的细胞在不同的培养体系及不同时间点的生长特点,采用乙酰化低密度脂蛋白(Dil-ac-LDL)吞噬实验和荆豆凝集素(FITC-UEA-1)结合实验验证EPC的状态和功能。结果 Aldh2-/-小鼠的骨髓单个核(BMNCs)数目与野生型小鼠相比显著降低(p<0.05,n=7),但是成集落能力两组之间无差异。在M199培养基中培养不同基因型来源的BMNCs时,细胞呈链条状结构,而在EGM-2培养基中培养时,细胞呈集落式生长。培养第十天时,WT小鼠来源EPCs的Dil-ac-LDL和FITC-UEA-1双阳性率达到80.23±3.98%,而A/dh2-/-小鼠EPCs的双阳性率只有52.66±10.54%。培养至第三周时,CD31流式检测表明,Aldh2基因缺失降低EPCs CD31的表达。结论A/dh2基因缺失影响EPCs的增殖效率及功能。这一作用可能会影响其在临床缺血性疾病中的推广应用。