新西兰白兔BMP 15基因的真核表达载体构建、表达模式及其在卵巢组织的表达

旨在获得新西兰白兔BMP 15基因序列及其组织表达规律,构建其真核表达载体,预测BMP15的生物学功能。本研究选择180日龄性成熟的健康新西兰白兔作为研究对象,采用RT-PCR技术扩增BMP 15基因CDS区序列,利用T4连接方法将目的片段连接至线性化的Pmcherry-N1和pCMV-Myc空载体,构建真核表达载体,利用生物信息学分析其编码蛋白的性质及结构。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术与Western blotting技术检测pCMV-Myc-BMP 15过表达情况。接下来,使用qRT-PCR检测BMP 15基因在不同组织中的表达水平。激光共聚焦方法检测BMP 15基因的亚细胞定位。利用免疫荧光技术检测内源BMP15在新西兰白兔卵巢组织定位情况。结果表明:克隆得到新西兰白兔BMP 15基因CDS区序列长1182 bp,PCR及测序结果表明pCMV-Myc-BMP 15和Pmcherry-N1-BMP 15真核表达载体构建成功。生物信息学分析显示,BMP 15基因编码393个氨基酸;BMP15蛋白不稳定系数为55.32,等电点大小为9.69,是一种稳定的碱性蛋白质。BMP15蛋白共有26个磷酸化位点,15个糖基化位点,存在信号肽,不存在跨膜结构域。系统进化树表明,新西兰白兔与猪亲缘关系最近,与鸡的亲缘关系最远。二级结构和三级结构分析结果表明,BMP15蛋白主要由α-螺旋(38.68%)、无规则卷曲(37.4%)、延伸链(15.52%)、β-转角(8.40%)组成,为混合型蛋白。蛋白互作关系预测发现,BMP15蛋白与FSHR、FIGLA、BMPR1B、AMHR2、NOBOX等卵巢生长发育的相关蛋白之间存在相互作用。不同组织表达分析显示,BMP 15基因在卵巢组织中特异性表达;激光共聚焦结果显示,BMP15主要存在于在细胞质中。将pCMV-Myc-BMP 15转染至HEK293T细胞内,BMP15的mRNA水平和蛋白水平均显著上调。卵巢组织免疫荧光检测结果显示,BMP15主要定位在卵巢颗粒细胞的细胞质中。本研究成功构建了BMP15的真核表达载体,对BMP 15基因及其编码的蛋白的理化性质和生物学特性进行了预测分析,在HEK293T细胞内成功过表达,并得到了该基因的亚细胞定位情况、组织表达情况及在卵巢组织的分布情况。为后续开展BMP 15基因在卵巢生长发育中的功能及机制研究提供了理论依据。

杜寒绵羊多胎性能候选基因BMPR-1B和BMP15的研究

为了从分子水平探讨杜寒绵羊的多胎机制,本试验在山西省某养殖场采集了87只经产杜寒母绵羊的耳组织,选取骨形态发生蛋白15(bone morphogenetic protein 15,BMP15)和骨形态发生蛋白受体1B(bone morphogenetic protein receptor 1B,BMPR-1B)为候选基因,采用PCR-SSCP、PCR-RFLP法,结合母羊产羔数与所产羊羔初生重,分析其与杜寒绵羊多胎性能的相关性。结果显示,杜寒绵羊的BMPR-1B基因在第746位碱基处发生了A→G突变,检测到3种基因型:AA、AG和GG,A等位基因频率(0.5230)略高于G等位基因(0.4770),A为优势等位基因;AG基因型频率(0.5172)高于GG(0.2184)和AA(0.2644)基因型,AG为优势基因型。χ2适合性检验显示该位点处于Hardy-Weinberg平衡状态;BMPR-1B基因第864位碱基未发生突变。杜寒绵羊的BMP15基因不存在V31D和S300G位点突变。在该群体中,BMPR-1B基因A746G位点GG、AG基因型个体的产羔数极显著高于AA基因型个体(P<0.01),羔羊初生重在3种基因型间差异不显著(P>0.05)。综上所述,BMPR-1B基因是影响杜寒绵羊繁殖性能的一个主效基因,可以作为分子标记对杜寒绵羊进行辅助育种,初步排除BMP15基因突变对杜寒绵羊多胎性能影响的可能性。

sRAGE、BMP-15在多囊卵巢综合征患者血清和卵泡液中表达及与炎症反应和胰岛素抵抗关系

目的:探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清、卵泡液中可溶性糖基化终产物受体(sRAGE)、骨形态发生蛋白-15(BMP-15)的表达特点,分析二者与PCOS患者胰岛素抵抗和炎性反应关系。方法:选择2018年2月—2019年6月本院收治的PCOS患者92例(PCOS组)和参加体检的正常育龄妇女100例(对照组),检测血清、卵泡液中sRAGE、BMP-15水平,Pearson相关性分析该两项指标与PCOS患者炎性细胞因子、胰岛素抵抗相关性。结果:PCOS组血清、卵泡液中sRAGE水平高于对照组,BMP-15低于对照组(均P<0.05);血清白介素-6(IL-6)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、降钙素原(PCT)、白介素-10(IL-10)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)水平均高于对照组(P<0.05)。PCOS组血清、卵泡液中sRAGE与IL-6、hs-CRP、PCT、IL-10、PFG、FINS、HOMA-IR呈正相关(P<0.05),BMP-15与上述指标呈负相关(P<0.05)。结论:PCOS患者血清、卵泡液中sRAGE水平升高,BMP-15水平降低,二者与PCOS患者胰岛素抵抗和炎性反应存在一定关系。

GDF-9和BMP-15在不同品系小鼠中的多态性和生殖能力关联分析

目的研究GDF-9和BMP-15在繁殖能力不同的品系小鼠ICR和BALB/c中的多态性,为筛选相关的模型动物种群提供参考资料。方法采用直接测序法筛查多态性位点,并对多态性位点构建双荧光素酶报告基因载体,检测5’UTR对下游基因的影响。结果 ICR小鼠的产仔数是BALB/c的2.8倍左右;在ICR和BALB/c之间发现了GDF-9存在三个多态性位点,一个位于5’端的非编码区,另外两个位于蛋白编码区;双荧光素酶检测结果显示GDF-9的5’UTR区可以促进下游基因的表达。BMP15在两种品系中不存在差异性位点。结论 GDF-9在ICR和BALB/c这两个品系小鼠中存在多态性位点,这些位点的变化对下游基因的表达起一定的促进作用。BMP15在ICR和BALB/c小鼠中不存在多态性位点。

补肾调经膏方对肾虚型卵巢早衰患者性激素、GDF-9及BMP-15水平的影响

目的观察补肾调经膏方对肾虚型卵巢早衰患者性激素、生长分化因子-9(GDF-9)及骨形态发生蛋白-15(BMP-15)水平的影响。方法将110例肾虚型卵巢早衰患者随机分为2组,对照组55例给予激素替代疗法治疗,观察组55例在此基础上加用补肾调经膏方治疗,观察2组治疗前后主要证候积分、Kupperman评分及血清雌二醇(E2)、促卵泡生长激素(FSH)、黄体生成素(LH)、GDF-9及BMP-15水平变化情况,统计2组近期疗效,随访2组6个月复发情况。结果治疗后2组主要证候积分、Kupperman评分及血清FSH、LH水平均显著降低(P均<0.05),E2、GDF-9及BMP-15水平均显著提高(P均<0.05),且观察组治疗后以上指标改善情况均显著优于对照组(P均<0.05);观察组治疗总有效率显著高于对照组(P<0.05),随访6个月复发率显著低于对照组(P<0.05)。结论补肾调经膏方治疗肾虚型卵巢早衰可有效减轻相关症状体征,改善生殖轴状态,上调GDF-9和BMP-15水平,且有助于降低远期复发风险。

左归丸对免疫性卵巢早衰小鼠卵巢GDF-9、BMP-15表达的影响

目的明确促卵泡发育的卵巢卵母细胞自分泌因子生长分化因子-9(GDF-9)、骨形态发生蛋白-15(BMP-15)的表达不足在免疫性卵巢早衰发病中的重要作用,进一步阐明补肾活血中药复方左归丸通过调节卵母细胞自分泌因子的表达,对卵巢起到保护作用。方法建立小鼠免疫性卵巢早衰模型:以小鼠透明带3所合成透明带多肽为免疫原。以出现动情周期紊乱、卵巢细胞受损,表示造模成功。然后将造模成功的小鼠随机分为模型组、左归丸高、低剂量组,强的松组、己烯雌酚组和对照组,共灌胃给药4周。免疫组化法检测GDF-9、BMP-15蛋白的表达。结果模型组与空白对照组相比,GDF-9蛋白表达水平下降,差异显著(P<0.05),左归丸低、高剂量组及己烯雌酚组与模型组相比,GDF-9蛋白表达水平增加,差异显著(P<0.05),与空白对照组相比,无显著差异。左归丸高剂量组GDF-9蛋白表达水平也较强的松组增加,差异显著(P<0.05)。模型组BMP-15蛋白表达水平较其余各组减少,但各组相比均无显著性差异(P>0.05)。结论左归丸对卵巢具有保护作用,能促进卵巢GDF-9蛋白的表达,从而促进卵泡的发育。

脱氢表雄酮对卵巢储备功能减退患者IVF结 局及卵泡液GDF-9 、BMP-15的影响

目的探讨脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)对卵巢储备功能减退(diminished ovarian reserve,DOR)患者的卵巢功能、卵泡液中生长分化因子-9(growth differentiation factor-9,GDF-9)、骨形态发生蛋白-15(bone morphogenetic protein-15,BMP-15)浓度及体外受精/卵胞质内单精子显微注射-胚胎移植(in vitro fertilization/intracytoplasmic sperm injection-embryo transfer,IVF/ICSI-ET)结局的影响。方法采用历史性队列研究,共纳入163例行IVF/ICSI-ET助孕的DOR患者,根据预处理方案分为DHEA组和对照组。比较两组患者基础内分泌水平、抗苗勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)、窦卵泡数(antral follicle counts,AFC)、促性腺激素(gonadotropin,Gn)总量、Gn使用天数、人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,hCG)日激素浓度和子宫内膜厚度、获卵数、成熟卵数、受精率、优胚率、胚胎种植率及临床妊娠率。比较两组患者卵泡液GDF-9、BMP-15浓度,并将其与卵巢储备功能指标进行相关性分析。结果DHEA预处理前两组基础内分泌、AMH、AFC差异均无统计学意义(P>0.05),预处理后,DHEA组基础卵泡刺激素(basal follicle stimulating hormone,bFSH)降低、AFC增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。Gn总量、Gn天数、hCG日激素浓度、hCG日子宫内膜厚度、获卵数、成熟卵数、受精率、优胚率、胚胎种植率、临床妊娠率差异均无统计学意义(P>0.05)。DHEA组卵泡液中BMP-15浓度高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),GDF-9差异无统计学意义(P>0.05)。双侧Pearson相关系数分析显示卵泡液BMP-15表达与基础雌二醇(estradiol,E 2)呈正相关。结论DHEA可通过增加AFC和下调FSH改善DOR患者的卵巢储备功能并提高卵泡液BMP-15的浓度。

阿勒泰羊BMP15基因的多态性

为寻找和筛选与羊繁殖力相关的遗传标记,采用PCR-RFLP和PCR-SSCP技术检测BMP15基因在阿勒泰羊中的单核苷酸多态性。结果表明:在检测的92个阿勒泰羊个体中,BMP15基因在外显子1位点呈多态性,具有AA、AB和BB 3种基因型。阿勒泰羊AA基因型频率为0.695,AB基因型频率为0.120,BB基因型频率为0.185。该段DNA序列存在3个碱基缺失,这个突变导致野生型(AA)氨基酸序列上相应的10号氨基酸残基亮氨酸缺失,变为突变基因型BB,形成B1突变体;在阿勒泰羊的BMP15基因中未检测到B2和B4突变。

生长分化因子-9和骨形态发生蛋白-15与卵巢反应性的相关性研究

目的探讨生长分化因子-9(growth differentiation factor-9,GDF-9)和骨形态发生蛋白-15(bone morphogenetic protein15,BMP-15)在卵母细胞和卵冠丘颗粒细胞(cumulus granulosa cell,CGC)的表达与人卵巢反应性的关系。方法应用免疫荧光结合激光共聚焦显微术检测31例卵巢中反应患者的34枚、23例高反应患者的29枚未成熟生发泡(germinal vesicle,GV)期卵母细胞GDF-9蛋白的表达,33例中反应患者的37枚、29例高反应患者的34枚第一次减数分裂中期(metaphase I,MI)的卵母细胞BMP-15蛋白的表达;应用免疫细胞化学方法检测两种蛋白在34例低反应、41例中反应和36例高反应患者第2次减数分裂中期(MII)CGC的表达。结果卵巢中、高反应组间卵母细胞GDF-9的表达差异无显著性,卵巢高反应组"卵母细胞"BMP-15表达强度为(39.19±8.84)显著高于中反应组(29.23±7.83,P<0.01),并与获卵数中度正相关,(r=0.492,P=0.002);卵巢不同反应组间CGC中GDF-9和BMP-15蛋白表达强度无统计学意义,但两种因子的表达呈中度正相关关系,(r=0.415,P=0.000)。结论卵巢高反应与卵母细胞BMP-15的表达升高有关;GDF-9和BMP-15共表达于CGC中,且具有同步性,并可能存在协同作用。

补肾促卵颗粒对体外受精周期颗粒细胞骨形成蛋白-15蛋白表达的影响

目的:观察补肾促卵颗粒对IVF周期颗粒细胞骨形成蛋白-15(bone morphogenetic protein-15,BMP-15)的影响,探讨提高妊娠率的可能机制。方法:将因输卵管因素行体外授精-胚胎移植(IVF-ET)82例患者随机分为治疗组(IVF治疗周期加用补肾促卵颗粒)42例,对照组(IVF治疗周期加用安慰剂颗粒)40例。观察临床肾虚证候积分变化情况,促性腺激素(Gn)用量及用药天数,取卵数、优质卵率、受精率、优质胚胎率、临床妊娠率及颗粒细胞BMP-15蛋白表达情况。结果:治疗组患者肾虚症状得到明显改善,治疗组Gn用量及用药天数低于对照组,优质卵率、优质胚胎率及临床妊娠率均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);颗粒细胞BMP-15蛋白表达都优于对照组。结论:补肾促卵颗粒改善了卵母细胞成熟度,提高胚胎质量及临床妊娠率,可能与通过提高颗粒细胞BMP-15蛋白的表达有关。

思州鸡BMP15基因第1外显子多态性及其与蛋品质的关联分析

研究旨在探讨思州鸡骨形态发生蛋白15(BMP15)第1外显子多态性及其与蛋品质的相关性。采用PCR产物直接测序法检测思州鸡BMP 15基因第1外显子测序,将测序结果用DNAStar软件校正;利用Excel 2007统计基因型频率数据,并进行卡方适合性检验;通过SPSS 18.0软件对BMP 15基因不同基因型与思州鸡蛋品质间的关联性进行分析。结果显示,思州鸡BMP 15基因第1外显子存在4个SNPs位点:397C/T、473A/G、603C/T和612C/T,均处于Hardy-Weinberg非平衡状态(P<0.05);397C/T和603C/T位点的多态信息含量(PIC)分别为0.3488和0.3299,属于中度多态(0.25<PIC<0.5),473A/G与612C/T位点的PIC分别为0.1527和0.2075,属于低度多态(PIC<0.25)。关联性分析结果表明,397C/T位点对思州鸡蛋白高度、哈氏单位、蛋黄重均有显著影响(P<0.05);473A/G、603C/T位点对思州鸡蛋品质指标均无显著影响(P>0.05);612C/T位点对思州鸡蛋长径有显著影响(P<0.05),提示BMP 15基因第1外显子对鸡蛋品质中蛋白高度、蛋长径具有较大的遗传效应。结果表明,BMP 15基因可能是影响思州鸡蛋品质的基因之一,可作为思州鸡蛋白高度、蛋长径等蛋品质性状的分子标记。

中药补肾调经方对体外受精-胚胎移植超排卵周期妊娠结局及骨形成蛋白(BMP)-15的影响

目的:探讨中药补肾调经方对提高IVF-ET超排卵周期所获卵和胚胎质量的作用及其机制。方法:将70例因输卵管因素行IVF-ET的患者随机分为中药+控制性超排卵(实验组,n=35)和单纯控制性超排卵组(对照组,n=35),应用Western blotting法测定取卵日成熟卵泡卵泡液中骨形成蛋白-15(bone morphogenetic protein-15,BMP-15)的含量;用RT-PCR法检测颗粒细胞中BMP-15 mRNA的表达;并比较组间的获卵数、受精率、优质胚胎率及妊娠率等。结果:实验组卵泡液中BMP-15mRNA水平及颗粒细胞中BMP-15 mRNA的表达均显著高于对照组(P<0.05);实验组的临床妊娠率(71.42%)显著高于对照组(48.57%)(P<0.05)。结论:补肾调经方可以提高IVF-ET妊娠率,其作用机制可能与调控卵泡液和颗粒细胞BMP-15水平有关。

GDF-9和BMP-15在子宫肌瘤中的表达

目的:了解GDF-9和BMP-15在子宫肌瘤及邻近正常平滑肌中的表达,为进一步探讨子宫肌瘤发病机制提供实验依据。方法:免疫组织化学方法检测手术切除的子宫肌瘤和邻近平滑肌组织中蛋白的表达;消化法和组织块贴壁法进行子宫肌瘤细胞和邻近平滑肌细胞原代培养,Real-time PCR(RT-PCR)检测所培养子宫肌瘤和邻近平滑肌细胞中GDF-9和BMP-15的表达。结果:GDF-9和BMP-15蛋白在子宫肌瘤和邻近平滑肌组织中的表达无统计学差异;消化法和组织块贴壁法2种细胞培养法均建立了有限细胞系,Real-time PCR检测结果显示GDF-9和BMP-15mRNA在子宫肌瘤细胞中的表达均高于邻近平滑肌细胞。结论:GDF-9和BMP-15在mRNA水平对基因信号调控方面有影响,可能促进子宫肌瘤的增殖、肥大,与子宫肌瘤的发生发展有一定的相关性。

幼龄新西兰兔不同成熟阶段卵母细胞体外BMP-15、FSHR基因表达

从不同成熟阶段的卵母细胞中提取总RNA,反转录后进行PCR扩增,获得BMP-15和FSHR基因条带,进行基因克隆筛选并测序,测序结果表明,目的基因片段序列完全为公布的基因序列且无突变。采用实时荧光定量PCR技术,检测了幼龄兔卵母细胞成熟过程中BMP-15基因、FSHR基因的相对表达丰度。结果显示:BMP-15mRNA在培养初期未成熟卵母细胞中表达水平较低,随着培养时间的推移,其表达量逐渐升高,在培养12h时出现表达量的峰值,并且此后一直维持较高的表达量,直至24h,随后下降;FSHR mRNA在未成熟卵母细胞中有较高表达,其中0、6h表达量较高,随着培养时间的延长,卵母细胞的FSHR mRNA相对表达量呈递减趋势。

不同促排卵方案在IVF卵巢低反应患者中的应用及对血清和卵泡液中GDF-9、BMP-15水平的影响

目的探讨GnRH-a短方案、GnRH-ant方案及来曲唑微刺激三种不同促排卵方案在IVF卵巢低反应患者促排卵中的应用效果及其对血清和卵泡液中GDF-9、BMP-15水平的影响。方法选择在我院生殖医学中心接受IVF/ICSI且卵巢低反应的不孕症患者共89例,随机地分为三组:A组(GnRH-a短方案组)33例,B组(GnRH-ant方案组)31例,C组(来曲唑微刺激方案组)25例。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测所有患者HCG日血清及取卵日卵泡液内GDF-9、BMP-15水平,用化学发光法测定所有患者基础内分泌值和HCG日内分泌值,分析不同促排卵方案患者的Gn用量,Gn用药天数,获卵数,受精率,卵裂率,优质胚胎率,着床率,周期取消率,移植周期临床妊娠率,流产率等相关指标。结果 (1)Gn用药天数、获卵数、受精率、卵裂率、优质胚胎率、周期取消率、移植周期临床妊娠率、流产率、着床率在A、B、C三组之间无统计学差异(P>0.05);Gn总量在A、B两组明显高于C组(P<0.05);(2)A、B、C三组血清和卵泡液中的GDF-9水平无统计学差异(P>0.05);C组血清和卵泡液中的BMP-15水平均显著高于A、B两组(P<0.05);A、B、C三组血清的GDF-9和BMP-15水平均显著低于卵泡液中的水平(P<0.05)。结论 IVF卵巢低反应患者应用GnRH-ant方案可以获得与GnRH-a短方案相似的临床效果;来曲唑联合小剂量Gn微刺激方案Gn用量较少,获得了与GnRH-a短方案及GnRH-ant方案相似的临床妊娠率,可能与来曲唑增加血清和卵泡液中BMP-15水平,提高了卵巢的反应性有关。

骨形态蛋白(BMP)-15对子宫内膜异位症患者IVF结局影响的临床研究

目的:探索卵丘颗粒细胞早期凋亡和骨形态蛋白-15(bone morphogenetic protein-15,BMP-15)对子宫内膜异位症(EMs)患者IVF结局的影响。方法:行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)的不孕患者,根据不孕指征分为EMs组及对照组。分别记录患者一般情况、获卵数、正常受精卵数、卵裂数、优质胚胎数、胚胎种植数和临床妊娠率。流式细胞仪测定所有对象卵丘颗粒细胞的早期凋亡率,Western blotting检测卵泡液中BMP-15蛋白的表达量。结果:获卵率、受精率、卵裂率、优质胚胎率差异无统计学意义(P>0.05);EMs组与对照组相比,获卵数分别为8.2±5.7个和12.0±5.8个,着床率分别为29.73%和47.31%,临床妊娠率分别43.37%和69.32%,差异均有统计学意义(P<0.05)。EMs组卵丘颗粒细胞的早期凋亡率为37.82±15.81%,对照组为8.85±5.58%,差异具有统计学意义(P<0.01)。卵泡液中BMP-15蛋白相对表达量EMs组为0.67±0.18,对照组0.94±0.33,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:EMs患者IVF着床率及临床妊娠率降低,可能与卵母细胞分泌较少的BMP-15、颗粒细胞早期凋亡率增加,影响卵母细胞质量和胚胎的正常发育有关。

绵羊BMP-15基因在不同产羔性状母羊中的表达量差异及分析

选择分别影响Hanna、Cambridge与Belclare三个不同品种绵羊高繁殖力的骨形态发生蛋白15（bone morphogenetic protein 15,BMP-15）为候选基因,为了解不同产羔性能母羊BMP-15基因在不同组织中的表达差异,及其与产羔数性状关联性分析,采用real time RT-PCR的方法检测BMP-15基因在蒙古羊、无角陶赛特羊、小尾寒羊3种绵羊母羊的下丘脑、垂体、卵巢、肾脏、心脏5个组织中m RNA的分布。结果表明,在具有高繁殖力的蒙古羊双羔母羊、无角陶赛特羊双羔母羊中,BMP-15基因集中表达在肾脏和卵巢,其中肾脏的表达量高于卵巢（p〈0.05）,而其余组织表达并不明显;在小尾寒羊多羔母羊中,BMP-15基因集中表达在肾脏、心脏和卵巢,其余组织表达并不明显。在蒙古羊及无角陶赛特羊卵巢中,双羔母羊的BMP-15基因的表达量均显著高于单羔母羊（p〈0.05）,而小尾寒羊多羔母羊的卵巢中BMP-15基因的表达量也显著高于蒙古羊的单、双羔母羊。推测BMP-15基因可能是影响以上3个品种绵羊高产的候选基因之一。

BMP-15基因外显子Ⅰ在三种绵羊中的多态性及与繁殖力相关性分析

为研究绵羊繁殖力与绵羊BMP-15 (bone morphogenetic protein 15)基因的多态位点关系,并寻找调控绵羊繁殖力的分子标记,以甘肃高山细毛羊、蒙古羊、小尾寒羊三种绵羊为研究对象,采用PCR-SSCP技术与DNA碱基测序相结合的方法,检测该基因第一外显子67、92两个位点在上述三个不同品种绵羊中是否存在FecX^H (Q23→Ter)和FecX^I (V31→D)突变,同时根据检测结果与其繁殖力做相关性分析。结果表明,在三种绵羊中既未检测出与Inverdale绵羊相同的FecX^I突变,也未检测出与Romney绵羊相同的FecX^H突变,因此推测BMP-15基因中影响Romney与Inverdale绵羊高繁殖力的突变位点对以上三种绵羊均无显著影响。

血清miR-27、miR-93、BMP-15在多囊卵巢综合征患者中的表达意义

目的探讨血清MicroRNA-27(miR-27)和MicroRNA-93(miR-93)、骨形态发生蛋白15(bone morphogenetic protein15,BMP-15)在多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者中的表达意义。方法选择2015年8月至2019年1月烟台市烟台山医院收治的63例PCOS患者,依据身体质量指数(body mass index,BMI)将其分为肥胖组(肥胖型PCOS,BMI≥25 kg/m^(2),n=22)和非肥胖组(非肥胖型PCOS,BMI<25kg/m^(2),n=41),同期选择30例体检正常的健康妇女作为健康组。分析3组血清miR-27、miR-93表达水平及骨形态发生蛋白15(BMP-15)浓度,并比较3组内分泌代谢指标,使用受试者工作特征曲线(ROS)评估血清miR-27、miR-93、BMP-15对PCOS及肥胖型PCOS患者的预测价值。结果内分泌指标:与健康组比较,肥胖组和非肥胖组卵泡刺激素(FSH)较低,睾酮(T)、促黄体生成素/卵巢刺激素比值(LH/FSH)及胰岛素抵抗(IR)均较高(P<0.05);与非肥胖组比较,肥胖组T和IR较高(P<0.05)。血清miR-27、miR-93及BMP-15:与健康组比较,肥胖组和非肥胖组血清BMP-15[(74.93±12.75)vs(28.62±8.06)、(30.37±9.48)]浓度较低,血清miR-27[(0.98±0.21)vs(2.52±0.41)、(1.34±0.09)]、miR-93[(0.76±0.22)vs(2.69±0.54)、(1.22±0.35)]表达水平较高(P<0.05);与非肥胖组相比较,肥胖组血清miR-27、miR-93表达水平较高(P<0.05);miR-27、miR-93及BMP-15均对PCOS具有预测价值,BMP-15曲线下面积最高,为0.970(P<0.05);miR-27、miR-93对肥胖型PCOS具有预测价值,miR-93曲线下面积最高,为0.927(P<0.05)。结论肥胖型PCOS患者除存在显著内分泌指标紊乱外,血清miR-27、miR-93属于高表达状态且BMP-15水平相对较低,BMP-15可作为辅助诊断PCOS的有效参数,而miR-93可作为辅助诊断肥胖型PCOS的有效参数。

卵母细胞分泌的生长分化因子-9和骨形成蛋白-15与卵母细胞发育潜能的关系

目的:探讨卵母细胞分泌的生长分化因子-9(GDF-9)和骨形成蛋白-15(BMP-15)与卵母细胞发育潜能的关系。方法:收集因输卵管性不孕接受IVF-ET治疗患者的卵泡,每侧卵巢穿刺取卵时首先选择一个直径≥18 mm卵泡抽吸,对卵母细胞进行成熟度分型,并观察其受精、卵裂及胚胎评分情况。受精后按是否形成优质胚胎将将卵泡分为优质卵母细胞组和非优质卵母细胞组,采用Western blotting方法检测比较各组卵泡液中GDF-9和BMP-15的含量。结果:①优质卵母细胞组的GDF-9蛋白相对含量为2.498±0.133,非优质卵母细胞组为1.305±0.406,差异有统计学意义(P=0.008)。②优质卵母细胞组的BMP-15蛋白相对含量为3.379±0.482,非优质卵母细胞组为1.336±0.214,差异有统计学意义(P=0.003)。结论:在优质卵母细胞组卵泡液中GDF-9和BMP-15水平均较高,提示人卵泡液中GDF-9、BMP-15水平可以反映卵母细胞的发育潜能,GDF-9、BMP-15水平可以作为评价卵母细胞质量的指标。