外周血TLR4 mRNA及IL-22、NLR联合检测对脓毒症患者预后的评估价值

目的分析外周血Toll样受体4(TLR4)mRNA及白细胞介素-22(IL-22)、中性粒细胞/淋巴细胞比值(NLR)联合检测对脓毒症患者预后的评估价值。方法选取2020年1月至2023年1月于海南医学院第一附属医院接受治疗的108例脓毒症患者作为研究对象,依据患者入院治疗日起1月内预后情况分为预后良好组(71例)与预后不良组(37例)。收集入组时两组患者的基本资料,性别、年龄、体质量指数(BMI)、入院时感染情况、糖尿病史、高血压史、心血管疾病史、使用血制品、机械通气、是否多器官衰竭等及实验室指标TLR4 mRNA、IL-22、NLR。单因素及多因素Logistic回归分析影响脓毒症预后不良的危险因素,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析TLR4 mRNA、IL-22、NLR单项及联合检测对脓毒症患者预后的评估效能。结果预后良好组与预后不良组年龄、有无高血压史、心血管疾病史、机械通气、多器官衰竭比较差异具有统计学意义(χ^(2)=4.427、5.698、4.618、6.948、7.300,P<0.05),预后不良组TLR4mRNA、IL-22、NLR水平均高于预后良好组,差异有统计学意义(t=7.649、4.205、8.243,P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,有机械通气、多器官衰竭、TLR4 mRNA、IL-22、NLR水平升高为脓毒症患者预后不良独立危险因素(P<0.05);ROC结果显示,TLR4 mRNA、IL-22、NLR单项及联合检测预测毒症患者预后不良曲线下面积(AUC)分别为0.846、0.747、0.669、0.914联合检测优于单一检测(P<0.05)。结论TLR4 mRNA、IL-22、NLR脓毒症患者预后有关,且均对患者预后情况具有良好的预测效能。

醇提红曲对骨质疏松大鼠骨折愈合过程中BMP-4 mRNA和蛋白表达的影响

目的:观察红曲(RyR)提取物(羟甲基戊二酰辅酶A还原酶抑制剂)对骨合成代谢的作用。方法:建立骨质疏松大鼠骨折模型,按不同组别分别给予安慰剂、氟伐他汀及醇提红曲液进行治疗,5周后,取实验动物骨痂组织,通过实时定量RT-PCR及蛋白印迹法检测骨痂BMP-4 mRNA和蛋白(骨形态发生蛋白4)的表达。结果:RyR提取物能诱导骨质疏松骨折大鼠骨痂BMP-4mRNA和蛋白表达增加,而低剂量RyR提取物的作用效果优于高剂量。结论:RyR在成骨细胞分化和骨形成的过程中发挥有益的作用,对骨质疏松具有一定的治疗作用。

湖羊BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因mRNA表达水平与排卵数关系的研究

【目的】研究湖羊卵巢组织BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因mRNA表达水平与排卵数的相关性,筛选影响湖羊多胎性状的候选基因,为揭示湖羊高繁多胎分子遗传机理提供参考。【方法】选取16只经产湖羊母羊,分为产单羔组和多羔组,发情后24～36h屠宰,取卵巢,计数排卵点,记录排卵数;应用RT-PCR技术检测BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因的组织表达特征,进一步利用实时荧光定量PCR技术分析各基因mRNA在单羔组和多羔组卵巢组织中的表达差异。【结果】BMP2、BMP4和BMP7基因在湖羊母羊卵巢组织内表达,而且在垂体及下丘脑、子宫、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、输卵管组织中均有表达;BMP6基因仅在湖羊母羊卵巢、肾脏、肌肉和输卵管组织中表达。在卵巢组织,多羔组排卵数极显著高于单羔组(P<0.01),且多羔组BMP4基因mRNA表达极显著高于单羔组(P<0.01),而BMP2、BMP6和BMP7基因mRNA表达在单羔组和多羔组间无显著差异(P>0.05);相关分析表明在卵巢组织中,只有BMP4基因mRNA表达与排卵数呈正相关(r=0.741,P<0.05)。【结论】BMP4基因mRNA表达在单羔组和多羔组间差异显著,可能对湖羊排卵数起关键作用,是影响湖羊排卵数的候选基因。

实验性胰腺炎小鼠小肠隐凹素-4mRNA表达变化的研究

目的 检测实验性胰腺炎时小鼠小肠隐凹素 - 4 m RNA表达的变化 ,从分子水平上探讨胰腺炎时肠粘膜屏障受损的机制。方法 36只 ICR小鼠随机分成 6组 ,每组 6只。实验组 (A～ E组 )腹腔注射雨蛙素 ,5 0μg/(kg· h) ,共 7次 ,于首次注射后第 9、18、2 4、4 8和 72 h处死 ;对照组 (F组 )注射相应体积的生理盐水 ,于第 18h处死。取血送淀粉酶检查 ,胰腺送病理检查。用 U VI软件分析 PCR产物凝胶图像以检测各组隐凹素 - 4 m RNA的表达变化。结果 大剂量雨蛙素腹腔注射导致了 ICR小鼠急性坏死性胰腺炎 ,胰腺病理损害以首次注射后第 18h最明显。第 9h隐凹素 - 4 m RNA表达轻微下调 ,18h下调最明显 (P<0 .0 5 ) ,2 4 h后逐渐升高 ,72 h接近正常水平。结论隐凹素 - 4的获得性缺陷可能是胰腺炎时发生肠道细菌移位的重要原因之一。

强直性脊柱炎患者PBMC中IP-10、IFN-γ和IL-4 mRNA表达水平及意义

为探讨强直性脊柱炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中诱导蛋白10(IP-10)、干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-4(IL-4)mRNA水平及意义。选取强直性脊柱炎患者92例(观察组),其中稳定期42例,活动期50例;同时选取健康体检者100例作为对照组,采用RT-PCR检测PBMC中IP-10、IFN-γ和IL-4mRNA表达。观察组PBMC中IP-10、IFN-γ和IL-4mRNA相对表达量分别为明显高于对照组;观察组活动期患者PBMC中IP-10、IFN-γ和IL-4mRNA相对表达量分别明显高于稳定期;观察组患者ASDAS评分、IP-10、IFN-γ和IL-4mRNA相对表达量与ASDAS评分呈正相关。结果显示强直性脊柱炎患者PBMC中IP-10、IFN-γ和IL-4mRNA表达明显升高,与病情程度有一定关系。

内毒素血症大鼠心肌TLR4与IL-18 mRNA表达的变化

目的 :观察内毒素 (LPS)血症时心肌组织Toll样受体 4 (Toll likereceptor 4 ,TLR4 )及IL 18 mRNA表达的变化 ,探讨TLR4与IL 18在LPS急性心肌损伤中的作用。方法 :运用RT PCR与ELISA分别检测心肌TLR4和IL 18mRNA的表达及心肌组织匀浆TNF α浓度。结果 :LPS组心肌中TLR4与IL 18 mRNA表达分别比正常对照组显著增强 (1 5 1± 0 0 7)vs(0 85± 0 0 3) ,(1 6 5± 0 0 4 )vs(0 5 6± 0 0 3) ,心肌组织匀浆中TNF α浓度显著增高 (0 6 7± 0 0 2 )ug lvs(0 39± 0 0 5ug l)。结论 :LPS血症时心肌组织TLR4功能及其介导的信号转导作用加强 ,IL 18分泌增加 ,表明二者在LPS血症心肌损伤中起重要作用。

全身炎症反应综合征—急性肺损伤大鼠肺组织IL-4 mRNA表达及AP-1活性变化的研究

目的 复制脂多糖 (LPS)致伤的全身炎症反应综合征 (SIRS) -急性肺损伤 (ALI)的大鼠模型 ,观察肺组织白介素 - 4 (IL - 4 )mRNA表达量和激活蛋白 - 1(AP - 1)活性的变化 ,探讨SIRS -ALI中抗炎机制及其调控的意义。方法 经Wistar大鼠尾静脉注射递增剂量LPS ,复制SIRS -ALI大鼠模型 ;逆转录PCR法 (RT -PCR)检测肺组织IL - 4mRNA表达量 ;凝胶迁移率分析法 (EMSAs)检测肺组织AP - 1活性。结果 ①LPS可以介导大鼠发生SIRS -ALI;②LPS≥ 6mg/kg可致SIRS -ALI失控 ,形成ARDS ;③LPS可诱导肺组织IL - 4mRNA表达量和AP - 1活性升高 ;④LPS≥ 6mg/kg时 ,肺组织IL - 4mRNA表达量和AP - 1活性的升高幅度最大。结论 ①LPS≥ 6mg/kg是大鼠SIRS -ALI发生失控的临界剂量 ;②SIRS -ALI失控伴有IL - 4基因转录水平明显上调 ,可能与上游调控因子AP - 1活性异常增强有关 ;③抗炎机制增强在SIRS -ALI发生。

加味小柴胡汤对乙肝病毒转基因小鼠白介素-12、白介素-4、干扰素-γ mRNA表达的影响

目的:通过实验研究观察加味小柴胡汤对HBV转基因小鼠IL-12、IL-4、IFN-γmRNA表达的影响。方法:36只经筛选HBV DNA阳性的转基因小鼠随机分为3组,每组12只,中药组给予加味小柴胡汤水煎剂、西药组给予拉米夫定、空白对照组(简称盐水组)给予生理盐水,观察各组实验动物血清IL-12、IL-4和肝组织中IFN-γmR-NA活性的变化情况。结果:对IL-12、IL-4活性的影响,与盐水组和西药组比较,给药后中药组小鼠血清IL-12明显升高,而IL-4显著降低,差异有显著性意义(P<0.01,P<0.05);而对小鼠肝组织IFN-γmRNA的表达,中药组与盐水组和西药组比较,差异均有显著性意义(P<0.01)。结论:加味小柴胡汤有明显的调节和改善HBV转基因小鼠IL-12、IL-4、IFN-γmRNA活性的作用。

BMP4mRNA在Meckel's软骨中的表达及意义

目的 :观察和分析BMP4mRNA在Meckel s软骨细胞中的表达 ,探讨其在下颌骨发育中的调控作用 .方法 :建立和制备SD大鼠胚胎时期 13～ 2 1d等多时间点的下颌骨发育模型 ,采用原位杂交检测BMP4mRNA在Meckel s软骨中的表达 .结果 :BMP4mRNA在胚胎SD大鼠下颌骨发育的各个时期中呈一定的时空表达 ,在E 13～ 17d的Meckel s软骨细胞中呈阳性表达 ;E 19d时呈强阳性表达 ;E 2 1d时呈弱阳性表达 .结论 :BMP4mRNA在Meckel s软骨细胞中的表达特点 ,提示Meckel

糖皮质激素对哮喘患者IL-4mRNA与IL-5mRNA表达的影响

目的 探讨糖皮质激素对哮喘患者外周血单个核细胞 (PBMCs)白细胞介素 5 (IL 5 )mRNA、白细胞介素 4(IL 4)mRNA表达的影响。方法 采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)方法 ,测定糖皮质激素治疗前后哮喘患者PBMCsIL 5mRNA、IL 4mRNA的表达情况。结果 糖皮质激素治疗后 ,哮喘患者PBMCsIL 5mRNA、IL 4mRNA表达均低于治疗前水平 (P <0 0 5 ) ,并与对照组相比有显著性差异。结论 糖皮质激素通过在基因转录水平抑制IL 4、IL

体外与非体外循环手术T淋巴细胞白细胞介素-4 γ-干扰素mRNA表达的比较研究

目的比较体外与非体外循环手术中T淋巴细胞IL-4、IFN-γmRNA的表达及意义。方法随机抽取年龄3～12岁先心病、先天性动脉导管未闭患儿各20例，分为体外与非体外循环手术组，体外循环（CPB）手术组于术前24h、CPB结束前、术后4h、术后24h抽取静脉血，非CPB手术组于术前24h、手术结束前、术后4h、术后24h抽取静脉血。分离T淋巴细胞，提取RNA，RT—PER测定IL-4、IFN-γmRNA表达。结果CPB手术组：T淋巴细胞m-4mRNA表达在CPB结束前明显升高，术后24h逐渐恢复至术前水平；IFN-γmRNA表达在CPB结束前明显下调，术后24h逐渐恢复至术前水平。非CPB手术组：IFN-γ、IL-4mRNA表达变化无统计学意义。结论与非CPB手术比较，CPB引起T淋巴细胞IL-4mRNA表达上调、IFN—YmRNA表达下调，说明CPB可导致Th1／Th2平衡变化，在CPB创伤、炎性反应中可能起重要作用。

气传真菌染毒对大鼠外周血单个核细胞白细胞介素-4mRNA表达的影响

采用气传真菌孢子混合悬液气管染毒大鼠 ,并以逆转录聚合酶链式反应的方法观察了大鼠外周血单个核细胞 (PBMCs)白细胞介素 4(IL 4)细胞因子mRNA表达情况。结果表明 ,气传真菌孢子气管染毒大鼠可使其外周血单个核细胞高表达IL 4mRNA。实验结果提示IL 4在真菌所致过敏反应中有重要作用。

VEGF-C和受体Flt-4mRNA在舌鳞癌中的表达及临床意义

目的 研究舌鳞状细胞癌组织中血管内皮生长因子C(vascularendothelialgrowthfactorC ,VEGF C)及其受体VEGFR 3(flt 4 )的表达情况 ,分析其在淋巴转移中的作用。方法 采用RT PCR法分析 2 2例新鲜标本VEGF C/flt 4mRNA的表达情况 ,并统计分析其与各临床病理特点之间的关系。结果 2 2例中 1 6例VEGF CmRNA表达阳性 ,其中 1 2例flt 4mRNA阳性 ,VEGF C和flt 4mRNA的表达高度一致 (P <0 .0 1 )。舌鳞癌VEGF C明显高于正常组织和良性病变 ;和肿瘤病理分级、肿瘤颈淋巴结转移显著相关 ,和肿瘤发病年龄、性别以及肿瘤T分期无相关性。结论 VEGF C/flt4在舌癌表达高于正常组织和良性病变 ;与肿瘤的预后密切相关。

老年垂体瘤患者垂体组织NEDD4-1 mRNA PTEN蛋白的表达及其相关性

目的 探讨老年垂体瘤患者垂体组织中神经前体细胞表达发育进行性下调基因4-1 mRNA、第10号染色体丢失的磷酸酶张力蛋白同源物基因蛋白的表达及其相关性.方法 将手术切除的42例垂体瘤新鲜标本中,22例侵袭性垂体瘤组织设为A组,20例非侵袭性垂体瘤组织设为B组,另将23例正常垂体组织设为对照组,比较3组神经前体细胞表达发育进行性下调基因4-1 mRNA、磷酸酶张力蛋白同源物基因蛋白的水平及阳性率,并进行相关性分析.结果 调基因4-1 mRNA、磷酸酶张力蛋白同源物基因蛋白的水平及阳性率,并进行相关性分析.结果A组神经前体细胞表达发育进行性下调基因4-1 mRNA水平及阳性率显著高于B组、对照组(P<0.05),磷酸酶张力蛋白同源物基因蛋白水平及阳性率显著低于B组、对照组(P<0.05).相关分析显示,神经前体细胞表达发育进行性下调基因4-1 mRNA水平与磷酸酶张力蛋白同源物基因蛋白水平呈显著负相关(P<0.05).结论 神经前体细胞表达发育进行性下调基因4-1mRNA、磷酸酶张力蛋白同源物基因蛋白在老年垂体瘤患者组织中均有表达,且二者呈负相关.

脑室内注射对β-淀粉样蛋白大鼠海马BMP4和nestin表达的研究

目的通过侧脑室注射β-淀粉样蛋白(Aβ)后检测大鼠海马骨形成蛋白-4(BMP4)和巢蛋白(nestin)的表达,观察Aβ注射后局部神经干细胞(NSCs)的发生以及星型胶质细胞的活化增生情况。方法将Aβ1-42注射入大鼠侧脑室,分别于术后3、7、14、30d处死动物,应用免疫组化法观察BMP4的表达,用免疫荧光方法观察nestin,GFAP的表达,Brdu标记判断增殖细胞的种类。结果实验组的大鼠海马BMP4阳性细胞在3d已出现,到7d达到高峰,然后略微减少,维持在较高水平;而nestin阳性细胞也在3d已出现,到14d达到高峰,30d仍有表达,表达nestin的细胞主要为星形胶质细胞,部分活化星型胶质细胞来源于NSCs;对照组仅有极少数散在阳性细胞。结论β-淀粉样蛋白脑室注射后大鼠海马nestin表达增加,星型胶质细胞活化增生,BMP4可能促进了海马区NSCs向胶质细胞分化。

平喘灵对哮喘大鼠IL-4mRNA和IFN-γmRNA表达及IgE含量的影响

目的:探讨平喘灵对哮喘大鼠IL-4mRNA和IFN-γmRNA表达及IgE含量的影响。方法:SD大鼠分为空白对照组、模型组、平喘灵大、小剂量组(剂量分别为5．76,2．88g·kg^(-1))、地塞米松组(0．81mg·kg^(-1))和平喘灵小剂量(2．88g·kg^(-1))加地塞米松小剂量组(0．405mg·kg^(-1)),每组10只。用卵蛋白雾化吸入致敏法制备大鼠哮喘模型,于每天激发前12h分别灌胃相应剂量的药物,共7d。采用免疫放射法、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量法分别检测各组大鼠血清和肺泡灌洗液(BALF)中的IgE含量以及肺组织IL-4 mRNA和IFN-γmRNA的表达量。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠IgE含量、IL-4mRNA表达显著升高,IFN-γmRNA表达显著降低,IL-4/IFN-γ比值明显升高,且引喘潜伏期明显缩短,差异均有显著性(P＜0．05)。与模型组比较,平喘灵组血清IgE的含量、IL- 4的表达明显降低,IFN-γ的表达明显升高,IL-4/IFN-γ比值明显降低;呼吸状态明显改善,且引喘潜伏期明显延长,均有统计学差异(P＜0．05);地塞米松小剂量加平喘灵小剂量组对上述各项指标的改善作用较平喘灵小剂量组更明显,且在对血清及肺灌洗液IgE含量的调节方面也优于大剂量平喘灵。结论:平喘灵可能是通过调节IL-4/ IFN-γ平衡,继而调节IgE的产生。从而达到治疗哮喘的目的,且平喘灵与激素具有协同效应。

反义寡脱氧核苷酸对脯氨酰4-羟化酶mRNA表达的抑制作用

目的：观察反义寡脱氧核苷酸（ＯＤＮ）对脯氨酰４－羟化酶（Ｐ４Ｈ）两种亚基ｍ ＲＮＡ 表达的影响。方法：采用定量ＲＴ－ＰＣＲ技术检测培养的人皮肤成纤维细胞中Ｐ４Ｈ ｍ ＲＮＡ的相对含量。结果：不同浓度（０．１，０．２，０．５，１．０ μｍ ｏｌ／Ｌ）反义ＯＤＮ处理组，人皮肤成纤维细胞中Ｐ４Ｈ ｍ ＲＮＡ表达水平均显著低于对照组及错配ＯＤＮ 处理组；其中０．１，０．２ μｍ ｏｌ／Ｌ反义ＯＤＮ作用２０ ｈ 时，抑制效应达到最大，５０～７０ ｈ 后，逐渐恢复到对照组水平。正义ＯＤＮ与错配ＯＤＮ对Ｐ４Ｈ ｍ ＲＮＡ表达则无明显抑制作用。结论：反义ＯＤＮ 对Ｐ４Ｈ 两种亚基的ｍ ＲＮＡ表达均有显著和特异的抑制作用。

密骨方对去势后骨质疏松性骨折模型大鼠骨痂BMP-3mRNA表达的研究

目的应用荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测密骨方在去势后骨质疏松性骨折模型大鼠骨折愈合过程中的骨形态发生蛋白(BMP)-3mRNA水平。方法建立Wistar大鼠去势后骨质疏松性骨折的动物模型和BMP-3mRNA表达水平的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR方法,分别于术后第2、4、6周取断端组织,通过荧光定量RT-PCR检测标本中BMP-3mRNA水平。结果大鼠骨组织BMP-3mRNA表达水平:在时间上的总体比较呈递减的趋势并有显著性差异(F=153.19,P<0.05);组别的总体比较是模型组<实验组<对照组,并有显著性差异(F=262.23,P<0.05);在时间与组别的交互比较也存在显著性差异(F=81.50,P<0.05);任两组间都有统计学差异(P<0.05)。结论中药密骨方对去势后骨质疏松性骨折大鼠模型的骨折愈合有促进作用。

TLR4 mRNA和HO-1水平在ICVD病情及预后评估中的价值

目的探讨Toll样受体(TLR)4 mRNA和血红素氧合酶-1(HO-1)在缺血性脑血管病(ICVD)病情及预后评估中的价值。方法选取ICVD患者324例(ICVD组)、体检健康者324名(正常对照组)。分别检测HO-1水平及外周血TLR4 mRNA相对表达量。根据美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分将ICVD患者分为轻度损伤组、中度损伤组和重度损伤组。根据头颅多普勒超声检查结果将ICVD患者分为轻度狭窄组、中度狭窄组和重度狭窄组。对ICVD患者随访6个月,根据随访结果分为预后较好组和预后不良组。采用Pearson相关分析评估HO-1及TLR4mRNA与NIHSS评分的相关性,采用Spearman相关分析评估HO-1及TLR4mRNA与颅内动脉狭窄程度的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估HO-1及TLR4 mRNA判断ICVD预后的价值。结果 ICVD组HO-1水平及TLR4 mRNA相对表达量均高于正常对照组(P=0.000)。轻度狭窄组、中度狭窄组、重度狭窄组之间以及轻度损伤组、中度损伤组、重度损伤组之间HO-1水平及TLR4 mRNA相对表达量均依次升高,各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。预后较好组HO-1水平及TLR4 mRNA相对表达量均低于预后不良组(P<0.05)。ICVD组HO-1水平及TLR4 mRNA相对表达量与颅动脉狭窄程度、NIHSS评分均呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,HO-1、TLR4 mRNA判断ICVD预后不良的最佳临界值分别为4.364 ng/mL、0.989,曲线下面积分别为0.800、0.815,敏感性分别为81.4%、85.1%,特异性分别为72.4%、73.5%。结论 HO-1及TLR4或可作为ICVD患者病情评估及预后判断的有效指标。