SLC6A8通过BNIP3L调控线粒体自噬促进肝癌细胞增殖

目的:探讨SLC6A8通过BNIP3L调控线粒体自噬对肝癌细胞增殖的影响。方法:通过TCGA数据库分析SLC6A8基因在肝癌组织中的表达情况,并与BNIP3L表达进行相关性分析。使用RT-PCR和Western blot技术检测SLC6A8过表达人肝癌Huh-7及Hep3B细胞中SLC6A8和BNIP3L的表达。免疫荧光标记和CCK-8检测法用于观察SLC6A8过表达人肝癌Huh-7及Hep3B细胞线粒体自噬和细胞增殖率。使用CCK-8检测法评估在沉默BNIP3L后SLC6A8过表达人肝癌Huh-7及Hep3B细胞增殖率。结果:SLC6A8在肝癌组织中显著高表达,并与BNIP3L表达呈正相关。SLC6A8过表达可显著促进线粒体自噬和人肝癌Huh-7及Hep3B细胞的增殖。此外,SLC6A8过表达显著促进BNIP3L mRNA和蛋白的表达。沉默BNIP3L后,SLC6A8过表达对肝癌细胞增殖的促进作用被逆转。结论:SLC6A8在肝癌组织中的高表达与BNIP3L有正相关性,且SLC6A8的过表达能促进线粒体自噬和肝癌细胞的增殖,沉默BNIP3L可逆转SLC6A8过表达对肝癌细胞增殖促进作用。这为肝癌的治疗提供了新的靶点和策略。

SLC6A8 promotes liver cancer cell proliferation by regulating mitochondrial autophagy through BNIP3L

Objective: To investigate the effect of SLC6A8 on the proliferation of liver cancer cells by regulating mitophagy through BNIP3L. Methods: The expression of the SLC6A8 gene in liver cancer tissues was analyzed using the TCGA database, and its correlation with BNIP3L expression was assessed. RT-PCR and Western blot techniques were employed to detect the expression of SLC6A8 and BNIP3L in human liver cancer Huh-7 and Hep3B cells. Immunofluorescence labeling and CCK-8 assay were used to observe mitochondrial autophagy and cell proliferation rate in SLC6A8-overexpressing Huh-7 and Hep3B cells. Evaluate the proliferation rate of SLC6A8-overexpressing Huh-7 and Hep3B cells after silencing BNIP3L using the CCK-8 detection method. Results: SLC6A8 was significantly overexpressed in liver cancer tissues and positively correlated with BNIP3L expression. Overexpression of SLC6A8 significantly promoted mitochondrial autophagy and proliferation of Huh-7 and Hep3B cells. Additionally, SLC6A8 overexpression significantly enhanced the expression of BNIP3L mRNA and protein. Upon BNIP3L silencing, the proliferative effect of SLC6A8 overexpression on liver cancer cells was reversed. Conclusion: High expression of SLC6A8 in liver cancer tissues is positively correlated with BNIP3L, and overexpression of SLC6A8 promotes mitochondrial autophagy and liver cancer cell proliferation. Silencing BNIP3L can reverses the effect of overexpression of SLC6A8 on liver cancer cell proliferation. This provides new targets and strategies for the treatment of liver cancer.

电针百会、神庭调控BNIP3L介导的线粒体自噬和减轻脑缺血再灌注损伤的机制研究

目的:探讨电针百会、神庭调节线粒体自噬减轻脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法:采用随机数字表法将60只SD大鼠随机分为假手术组15只和手术组45只。假手术组只分离、暴露血管,不结扎,不插入尼龙线。手术组大鼠采用大脑中动脉线栓阻塞法(MCAO)制备大鼠局灶性脑缺血-再灌注(I/R)模型,术后2 h采用Zea Longa法进行神经功能评分,最终纳入30只手术组大鼠。进一步将纳入的手术组大鼠随机分为模型组、电针组和电针+3-MA组,每组10只。造模分组成功后,各组给予电针等相应方式干预7 d,采用Zea Longa法于第1天、第3天、第5天、第7天再次进行神经功能评估。干预7 d后获取各组大鼠左侧大脑皮层组织,苏木精-伊红(HE)染色后观察脑组织病理学变化,Western blot法检测LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白表达水平,组织免疫荧光技术检测线粒体自噬相关蛋白表达共定位情况(BNIP3L和SQSTM1标记),TUNEL法检测各组大鼠神经细胞凋亡水平。结果:(1)造模2 h后手术组大鼠神经功能评分均显著升高,假手术组大鼠未表现出神经功能缺损症状,评分均为0分。干预后第7天模型组及电针+3-MA组大鼠神经功能评分仍显著升高,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。而电针组大鼠在电针干预后神经功能评分显著降低,与模型组及电针+3-MA组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)HE染色结果可见,假手术组神经元胞体较大,多角形(多个突起),核着色浅,胞质可见特征性结构尼氏体;模型组神经元皱缩,胞质结构不清,胞浆嗜依红染色增强,尼氏体边聚或消失,核固缩,有的胞体变形缩小,呈三角形,细胞周围间隙增宽;电针组可以在一定程度上减轻缺血再灌注所致的病理损伤。(3)Western blot结果表明,MCAO后第7天模型组自噬水平(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ)下降,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05);电针组可以激活自噬水平,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。(4)模型组中皮质梗死区域线粒体自噬水平缺失,表现为红色荧光和绿色荧光强度减弱,而电针干预可以激活梗死区域神经细胞的线粒体自噬,表现为红色荧光和绿色荧光的表达增高及共定位增强(橘黄色)。(5)TUNEL检测结果表明,模型组大鼠凋亡率升高,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05);电针组的凋亡率降低,与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。电针+3-MA组结果表明,自噬抑制剂3-MA可以逆转电针对MCAO模型大鼠的神经保护作用。结论:电针百会、神庭可以减轻脑缺血再灌注模型大鼠神经功能损伤,其具体机制和调控BNIP3L介导的线粒体自噬、减轻脑缺血再灌注损伤和细胞凋亡有关。

Bnip3L在人非小细胞肺癌中的表达

目的:对非小细胞肺癌标本中的Bnip3L进行检测,探索Bnip3L对患者预后的影响。方法:利用免疫组化组织芯片技术对128例非小细胞肺癌标本和64例非瘤性肺部疾病患者手术标本中的Bnip3L进行检测,并对Bnip3L的表达情况与疾病生物学特点、患者生存时间等关系进行回顾性队列研究。结果:在128例非小细胞肺癌标本中,Bnip3L阳性表达45例(35.16%);64例非瘤性肺部疾病患者手术标本中Bnip3L阳性表达53例(82.81%),两者之间的阳性表达率有统计学差异(χ2=38.78,P<0.01)。Bnip3L的表达与肿瘤T分期及患者生存时间有密切关系(P<0.05)。结论:Bnip3L在各类型的非小细胞肺癌中均有表达,可以作为外科术后非小细胞肺癌病例预后较好的标志。

BNIP3L基因在肺癌组织中的表达及结构分析

背景与目的:BNIP3L(Bcl-2/E1B19kDa-interactingprotein3-like)基因是从人胎肝cDNA文库中克隆得到的具有抑瘤活性的基因,定位于8p21肺癌高频杂合性丢失(lossofheterozygosity,LOH)区;BNIP3L蛋白能与Bcl-2、Bcl-xL、E1B19K等抗凋亡蛋白相互作用,促进细胞凋亡。本研究旨在探讨BNIP3L基因表达、结构异常与肺癌发生、发展的关系。方法:采用免疫组化和免疫印迹技术、半定量逆转录聚合酶链反应(reversetranscription-PCR,RT-PCR)、PCR-单链构象多态性(PCR-singlestrainconformationpolymorphism,PCR-SSCP)分析等方法检测4种肺癌细胞株NCI-H520、A549、NCI-H460、NCI-H446和30例肺癌组织中BNIP3L基因的表达及结构异常。结果:(1)除NCI-H520细胞外,A549、NCI-H460和NCI-H446细胞中均无BNIP3L蛋白表达,NCI-H520细胞中BNIP3L蛋白表达水平也略低于永生化支气管上皮细胞HBE4-E6/E7。30例肺癌组织中BNIP3L蛋白阳性率为46.7%(14/30),12例正常肺组织中阳性率为100%(12/12),二者差异有统计学意义(P<0.05)。(2)4种肺癌细胞株中均存在BNIP3LmRNA表达,其表达水平与HBE4-E6/E7细胞相比无明显差异。30例肺癌组织中8例(26.7%)存在BNIP3LmRNA表达缺失或明显减弱,肺癌组织中BNIP3LmRNA平均表达量为0.404±0.070。

干扰ALAS2表达通过下调K562细胞线粒体自噬受体BNIP3L影响红系分化

目的:探讨下调亚铁血红素合成酶(ALAS2)对线粒体自噬受体BNIP3L的作用及对K562细胞红系分化的影响。方法:通过慢病毒转染干扰ALAS2的表达,实时荧光定量PCR鉴定转染效率。采用流式细胞术检测K562细胞凋亡、细胞分化、线粒体膜电位、活性氧(ROS)水平,氯化血红素诱导K562细胞红系分化;蛋白免疫印迹法检测BNIP3L的表达。免疫共沉淀检测ALAS2与BNIP3L蛋白的相互作用。结果:与病毒空载对照组比较,ALAS2干扰组的BNIP3L mRNA和蛋白表达下降(P<0.01),转录因子GATA1、Nrf2表达下调,活性氧水平降低(P<0.05)。病毒空载对照组线粒体膜电位低于ALAS2干扰组(P<0.05),2组的细胞凋亡率无明显差异。氯化血红素诱导细胞分化96 h,ALAS2干扰组BNIP3L表达增加且高于病毒空载对照组,病毒空载对照组和ALAS2干扰组的CD71^highCD235a^high+CD71^lowCD235a^high细胞比例分别为53.5%和92.9%。ALAS2与BNIP3L蛋白无直接相互作用。结论:细胞内亚铁血红素水平影响BNIP3L表达,这可能与活性氧及转录因子的调节有关。BNIP3L低表达能减少细胞凋亡,而高表达则有利于红系分化。

抑制Bnip3l二聚体降解的抗脑缺血损伤作用研究

目的线粒体自噬在脑缺血过程中发挥了神经保护作用,然而其分子机制尚不完全清楚,也缺乏有效的调控药物。本研究试图明确缺血脑内Bnip3l二聚体对线粒体自噬的调控作用,并探索抑制其降解是否可改善脑缺血损伤。方法利用小鼠永久大脑中动脉栓塞(pMCAO)模型,结合分子生物学方法,检测脑缺血过程中Bnip3l二聚体形成及其对线粒体自噬的调控作用;通过蛋白酶体抑制剂,明确抑制Bnip3l二聚体降解发挥的抗脑缺血损伤作用。结果 pMCAO处理后,小鼠缺血脑组织内Bnip3l二聚体显著减少并伴随线粒体自噬缺失。分子生物学实验表明,Bnip3l二聚体是其介导缺血脑内线粒体自噬发生所必须的。在pMCAO小鼠脑内给予泛素蛋白酶体抑制剂,逆转Bnip3l二聚体降解。给予脑缺血小鼠蛋白酶体抑制剂卡非佐米,发现其可通过逆转Bnip3l二聚体的丢失进而促进线粒体自噬,减少脑梗死体积,改善神经症状,发挥神经保护作用。结论在缺血脑内,Bnip3l二聚体的降解导致线粒体自噬障碍,给予蛋白酶体抑制剂能通过逆转Bnip3l二聚体丢失促进线粒体自噬,最终发挥抗脑缺血损伤作用。

头穴透刺法对急性期脑出血大鼠脑组织Beclin1和BNIP3L蛋白表达的影响

目的通过对急性期脑出血模型大鼠进行头穴透刺法干预,观察脑组织自噬蛋白Beclin1和BNIP3L的表达情况。方法选用雄性SD大鼠90只随机分为假手术组、模型组、3-MA组、针刺组、针刺+3-MA组,每组再分为6h、1d和7d3个亚组,每个亚组各6只。脑出血模型为自体血注入法,头穴透刺选择百会穴透曲鬓穴。造模成功后各组进行神经功能评分测定,并在各自时间点取材,采用免疫化分析法观察脑组织内Beclin1和BNIP3L的表达。结果头穴透刺法可以降低急性期脑出血模型动物的神经功能评分,并随着时间递减7d达到最低。Beclin1和BNIP3L在大鼠脑出血后6h表达开始增多,7d达高峰。针刺组各时间点阳性细胞数均比模型组高(P<0.05)。针刺组与针刺+3-MA组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论头穴透刺法能够提高Beclin1和BNIP3L蛋白的表达,促进急性期脑出血后脑组织自噬水平,减轻脑出血后的继发性损伤,达到减轻神经功能缺损的目的。

Bcl-6、Bim、PUMA、BNIP3及BNIP3L在银屑病患者及正常人皮肤中的表达

目的探讨FOXO下游凋亡相关因子Bcl-6、Bim、PUMA、BNIP3及BNIP3L表达在寻常性银屑病发病中的意义。方法31例寻常性银屑病患者及30例正常对照为研究对象,采用免疫组化方法检测Bcl-6、Bim、PUMA、BNIP3及BNIP3L的表达,并利用计算机图像采集与分析系统对免疫组化染色结果进行平均光密度测定。结果免疫组化检测显示,寻常性银屑病患者皮损中Bcl-6、BNIP3的表达明显高于正常皮肤,差异具有统计学意义(P<0.001);Bim的表达明显低于正常皮肤,差异具有统计学意义(P<0.001);PUMA、BNIP3L的正常皮肤表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论Bcl-6、BNIP3的表达升高及Bim的表达降低可能参与寻常性银屑病发病中表皮角质形成细胞的凋亡异常。

BNIP3L/NIX介导线粒体自噬对缺血性脑卒中作用的研究进展

脑卒中是一种中老年多发的,具有致残率和死亡率的常见病[1]。脑卒中分为缺血性(ischemic stroke)和出血性(hemorrhagic stroke)两种类型,缺血性脑卒中约占87%[2]。缺血性脑卒中的发生机制十分复杂,涉及兴奋性氨基酸毒性、钙离子超载、炎症反应、细胞凋亡、线粒体功能障碍等,且这些因素相互影响相互联系,形成恶性循环,最终造成不可逆性脑损伤[3]。研究发现,大脑产生的ATP大部分用于神经元生电活动[4]。因此,线粒体提供足够的能量对神经元的兴奋性和存活至关重要。除了产生能量外,线粒体和NADPH氧化酶,是活性氧(reactive oxygen species,ROS)的主要来源,并作为细胞凋亡调节剂[5]。越来越多的证据表明,在各种神经系统疾病中,ROS过量产生与神经元死亡之间存在密切关系,这与脑缺血的发病机制也密切相关[6]。因此,线粒体功能障碍是缺血性脑卒中发展的重要环节,线粒体功能障碍引起的线粒体自噬与缺血性脑卒中是密不可分的。

阻断BMK1通路可通过调控BNIP3和BNIP3L抑制肿瘤干细胞

肿瘤干细胞（CSCs）具有干细胞相关的许多特性,并被认为可操控肿瘤的发生。尽管靶向CSCs具有开发新药物的巨大潜力,但由于目前缺乏有效的药物靶点和合适的药理学制剂,其发展仍有很大障碍。Song等的研究结果表明,BMK1的磷酸化不仅与胚胎干细胞和诱导性多能干细胞有关,也与CSCs有关。通过表达MEK5D激活BMK1,可增强CSCs的自我更新（微球体形成实验证实之）、增殖（克隆形成实验证实之）和成瘤能力,而BMK1抑制剂XMD8-92能抑制上述过程。

北京鸭BNIP3L基因CDS区克隆及序列分析

BNIP3L定位于线粒体，广泛分布于各个组织中，具有促凋亡的作用。根据NCBI上鸭BNIP3L基因预测序列设计引物，利用PCR技术，对鸭BNIP3L基因CDS区序列进行克隆。结果表明：扩增出BNIP3L基因的CDS区序列全长为543bp，编码180个氨基酸，相对分子质量为19．52ku，理论等电点为6．334。另外，该氨基酸序列存在典型的3个低密度区域和1个跨膜结构域。经比对分析发现鸭的BNIP3L基因具有特有的保守序列，而且与鸟类的BNIP3L基因具有较高的相似性，并对其氨基酸序列和蛋白质结构进行了分析，整个多肽链中疏水性氨基酸为151个，亲水性氨基酸为29个，因此整个多肽链应为疏水性。其蛋白质二级结构由α-螺旋、β-转角、延伸链和无规则卷曲组成，分别占22．78％、7．22％、17．78％和52．22％。以上数据表明北京鸭 BNIP3L基因CDS区序列与安氏蜂鸟、朱鹩、鸡具有较高的一致性，且在物种进化过程中较为保守。

老年胃癌患者中BNIP3L基因的表达及其与预后的关系

BNIP3I基因是促凋亡家族的成员,它表达的蛋白能促进细胞凋亡.早期的研究认为它是肺癌的抑癌基因,之后发现在其他恶性肿瘤中也有表达,且与肿瘤的生物学行为有关,但在胃癌方面的研究极少.为此,我们收集了117例胃癌标本,应用免疫组化方法检测BNIP3L的表达,寻找它的表达规律,分析它与胃癌临床病理指标和生存期的关系,探讨其在胃癌发展过程中的意义.

长链非编码RNAMALAT1在舌鳞状细胞癌中的表达及生物学意义

目的:探讨MALAT1在人舌鳞状细胞癌组织及细胞株中的表达及生物学意义。方法:通过实时荧光定量PCR,应用Graph Pad.Prism.v5.0软件包检测MALAT1在60例舌鳞状上皮细胞癌组织中及SCC9、SCC15、SCC25、CAL27 4株鳞状细胞癌细胞系中的表达;利用生物公司构建的慢病毒干扰载体GV248建立舌鳞状细胞癌稳转细胞株,通过生物基因芯片分析,应用Graph Pad.Prism.v5.0软件包检测凋亡相关基因BNIP3L、NRG1的表达,并进行统计学处理。结果:MALAT1基因在舌鳞状细胞癌组织及4株舌鳞状细胞癌细胞株中的表达较对照组显著增高(P<0.05);经沉默MALAT1后,CAL27及SCC25中MALAT1基因的沉默效率较阴性组降低75%以上;凋亡相关基因BNIP3L、NRG1表达显著下调。结论:MALAT1基因在舌鳞状细胞癌组织和细胞株中高表达;下调MALAT1基因表达后,引起肿瘤凋亡相关基因BNIP3L、NRG1的表达下调,MALTA1有望成为新的肿瘤治疗靶点。

美国发现p53抑癌基因的早期作用方式

美国宾夕法尼亚州大学Abramson癌症中心的Wafik El-Deiry博士研究组发现了一种与p53有关的基因——Bnip3L。这种基因也能导致细胞的死亡，并且它能被p53和缺氧诱生因子(HIF)开启。研究人员将携带正常p53的细胞中的Bnip3L沉默并使细胞处于低氧条件，利用培养的细胞和移植了肿瘤细胞动物模型，发现Bnip3L被沉默的肿瘤在缺氧条件下生长的速度比含有正常Bnip3L的肿瘤和细胞快。根据这一发现，