T7 cDNA噬菌体展示文库筛选法氏囊活性肽BPP-Ⅱ结合蛋白及鉴定

法氏囊活性五肽BPP-Ⅱ是近期发现的具有免疫调节功能的活性多肽。为了研究法氏囊活性肽对B细胞的作用机制,采用鸡B淋巴细胞cDNA T7噬菌体文库筛选法氏囊五肽BPP-Ⅱ与鸡B相互作用的受体蛋白。三轮筛选后,富集的噬菌体滴度达1010pfu以上。富集噬菌体克隆的序列分析结果表明,与BPP-Ⅱ相互作用的鸡B淋巴细胞cDNA文库中序列与核受体辅阻遏物2同源。结果说明,法氏囊活性肽BPP-Ⅱ可能参与多种细胞过程,从而产生多种生物学效应。

法氏囊活性肽-Ⅱ对肿瘤细胞增殖的抑制作用及其可能机制

目的:研究法氏囊活性肽(Bursal-derived pentapeptide,BPP)-Ⅱ对肿瘤细胞增殖的抑制作用及其可能的作用机制。方法:采用不同质量浓度(0.02、0.2、2、20μg/ml)的BPP-Ⅱ分别处理小鼠B细胞淋巴瘤细胞WEHI-231、人鼻咽癌细胞CNE、大鼠肝癌细胞RH-35和正常细胞系人胚肾细胞293、猪肾细胞PK15、中国仓鼠卵巢细胞CHO,48 h后采用MTT法检测细胞增殖情况;以双荧光素酶报告系统和Western blotting方法检测BPP-Ⅱ对荧光素酶标记的p53-Luc质粒转染的Vero细胞中p53转录活性和P53蛋白表达的影响;利用噬菌体随机12肽库筛选BPP-Ⅱ特异性结合肽,人工合成BPP-Ⅱ结合肽,采用MTT法检测BPP-Ⅱ结合肽对BPP-Ⅱ抗WEHI-231细胞增殖能力的影响。结果:2和20μg/ml的BPP-Ⅱ对肿瘤细胞WEHI-231、CNE、RH-35的增殖均有抑制作用(均P<0.05),而对正常细胞系293、PK15、CHO的增殖均不表现出抑制作用。BPP-Ⅱ明显激活p53基因的转录,并上调P53蛋白的表达。应用噬菌体展示技术筛选获得3个BPP-Ⅱ结合肽P3-12、P5-12、P6-12,其中2和20μg/ml的P3-12能显著抑制BPP-Ⅱ的抗WEHI-231细胞增殖能力[(97.5±3.4)%、(98.9±3.5)%vs(86.3±1.9)%,P<0.05];20μg/ml的P5-12和P6-12均能显著抑制BPP-Ⅱ的抗WEHI-231细胞增殖能力[(96.7±3.1)%、(95.4±3.8)%vs(86.3±1.9)%,P<0.05]。结论:BPP-Ⅱ可特异性抑制WEHI-231、CNE、RH-35等肿瘤细胞增殖,其机制可能与激动p53信号通路有关。