BRIT1基因过表达对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响

目的探讨BRIT1基因过表达对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响。方法真核表达质粒pcDNA3.1(-)/BRIT1经双酶切和测序鉴定后转染HeLa细胞,并设空载体转染组(阴性对照)和未处理组。转染后48 h,采用RT-PCR和Real timePCR法检测细胞中BRIT1基因mRNA的转录和表达情况,Western blot检测细胞中BRIT1蛋白的表达水平,流式细胞术分析细胞的凋亡情况。结果重组真核表达质粒pcDNA3.1(-)/BRIT1经双酶切和测序证实构建正确;转染48 h后,可有效上调HeLa细胞中BRIT1基因mRNA和蛋白的表达,细胞凋亡率[(12.37±0.19)%]较阴性对照组[(1.81±0.22)%]和未处理组[(2.06±0.10)%]明显增加,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 BRIT1基因过表达能诱导人宫颈癌HeLa细胞体外凋亡,为进一步研究BRIT1基因在宫颈癌细胞凋亡中的作用及其机制奠定了基础。

过表达BRIT1基因对鼻咽癌HNE-1细胞凋亡的影响及其机制

目的研究BRIT1(BRCT-repeat inhibitorof h TER expression)基因对鼻咽癌HNE-1细胞凋亡的影响,并初步探讨其相关的分子机制。方法利用免疫组织化学法检测30份鼻咽癌组织及30份鼻咽正常组织中BRIT1蛋白的表达;利用质粒pc DNA3.1(-)/BRIT1及pc DNA3.1转染HNE-1细胞,TUNEL法、Hoechst33342染色法及流式细胞术检测细胞的凋亡情况,Western blot法检测转染细胞中BRIT1蛋白及caspase-3、active caspase-3、Bax、bcl-2蛋白的表达。结果 BRIT1在鼻咽癌组织中的BRIT1蛋白表达水平低于鼻咽正常组织(P<0.05);转染质粒pc DNA3.1(-)/BRIT1的HNE-1细胞中,BRIT1蛋白水平明显上调(P<0.05);过表达BRIT1明显促进HNE-1细胞的凋亡,并导致抗凋亡蛋白caspase-3、bcl-2表达下调(P<0.05),促凋亡蛋白active caspase-3、Bax表达上调(P<0.05)。结论BRIT1基因通过调控线粒体凋亡途径相关基因的表达,促进鼻咽癌细胞HNE-1凋亡的发生。