芒果苷对H_2O_2诱导的BRL细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨芒果苷对过氧化氢诱导的正常大鼠肝BRL细胞氧化损伤的保护作用。方法选取正常大鼠肝细胞株BRL,通过过氧化氢诱导法制备细胞氧化损伤模型,实验设对照组、H_2O_2组、芒果苷组。HE染色、台盼蓝染色观察细胞形态变化和存活率变化;比色法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量;Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达变化。结果对照组BRL细胞贴壁生长良好,排列紧密。H_2O_2诱导后细胞形态不规则,胞膜皱缩,贴壁能力下降;细胞存活率降低;抗氧化酶SOD、GSH-Px活性降低,MDA含量升高(P<0.05);Bax和Caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。与H_2O_2组相比,芒果苷可显著改善H_2O_2引起的细胞形态变化,提高细胞存活率;提高SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量(P<0.05);抑制Bax和Caspase-3蛋白表达(P<0.05),上调Bcl-2蛋白表达(P<0.05)。结论芒果苷对BRL细胞氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能与其提高细胞清除氧自由基能力和抑制细胞凋亡有关。

载BRL细胞聚鸟氨酸微胶囊的制备与功能

为了研究新型膜材聚鸟氨酸对微囊化细胞功能的影响,制备了包埋有BRL细胞的聚鸟氨酸-海藻酸盐微胶囊并考察了微囊化肝细胞的生物学活性以及细胞功能。结果表明,载BRL细胞的PLO微胶囊形态完整,表面光滑,细胞在PLO微胶囊内的三维立体环境中能够维持活性,且具有维持分泌尿素和蛋白质的功能,从而为该新型膜材在细胞微囊化的应用方面提供了实验依据。

新蛋白C7orf42促进大鼠肝细胞BRL-3A增殖

目的探讨未知功能蛋白C7orf42对体外培养的大鼠肝细胞BRL-3A增殖的影响。方法基因干涉下调C7orf42表达后,用MTT、Ed U掺入法检测C7orf42对BRL-3A细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期进程以及Reat-time PCR和Western blotting检测细胞增殖相关基因表达。结果 MTT法检测表明,转染C7orf42干涉片段后48h,干涉组比阴性对照组细胞活力降低11%(P<0.05);Ed U掺入法检测表明,实验组的Ed U阳性细胞比率比对照组降低了13%(P<0.05);流式细胞术检测表明,干涉组比阴性对照组S+G2/M期的细胞数降低12%(P<0.05);Reat-time PCR检测表明,干涉C7orf42表达后细胞增殖相关基因JUN、CCND1、MYC和CCNA2的表达分别下调26%、31%、37%和14%(P<0.05);Western blotting检测表明,干涉C7orf42表达后细胞增殖相关蛋白JUN、CCND1、MYC和CCNA2的表达分别下调59%、54%、18%和27%(P<0.05)。结论 C7orf42可能通过上调细胞增殖相关蛋白JUN、CCND1、MYC和CCNA2的表达,促进体外培养的大鼠肝细胞BRL-3A增殖。

MAPKs抑制剂对大鼠肝细胞GSH代谢相关酶的影响

目的:观察丝裂原活化的蛋白激酶(MAPKs)抑制剂对大鼠肝细胞谷胱甘肽(GSH)代谢的影响,确定哪条途径与GSH代谢相关。方法:体外培养BRL大鼠肝细胞,以c-Jun NH2-末端激酶(JNK)途径抑制剂SP600125、p38途径抑制剂SB203580、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)途径抑制剂PD98659处理24 h,采用MTT法测定细胞活力,高效液相色谱法测定细胞内GSH含量,Luminex法测定JNK和磷酸化JNK(p-JNK)的蛋白表达,采用试剂盒测定GSH代谢酶活性。结果:SP600125浓度>5μmol/L,SB203580浓度>20μmol/L,PD98659浓度>40μmol/L时,细胞活力受抑制;SP600125能显著减少大鼠肝细胞内还原型GSH的含量,SB203580和PD98659作用不明显;SP600125显著减少磷酸化JNK(p-JNK)蛋白表达,显著增强谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力。结论:JNK MAPK途径参与了大鼠肝细胞GSH的代谢。

As_(2)O_(3)对大鼠BRL-3A和RH-35细胞TRβ1和Cyclin D1因子的影响

为了探明As_(2)O_(3)对大鼠肝脏细胞系BRL-3A和肝癌细胞系RH-35中TH信号通路的关键调控因子TRβ1和TRβ1的下游因子Cyclin D1的影响,采用qRT-PCR、Western blot技术检测2种细胞中TRβ1和Cyclin D1的基因和蛋白表达变化。结果显示:(1)与对照组相比,As_(2)O_(3)作用BRL-3A细胞12h,1.563μmol/L组TRβ1蛋白表达显著降低(P<0.01)、Cyclin D1表达显著升高(P<0.01);6.250μmol/L组TRβ1表达明显降低(P<0.05)、Cyclin D1表达显著降低(P<0.01)。As_(2)O_(3)作用24h,1.563μmol/L组TRβ1蛋白表达明显升高(P<0.05);6.250μmol/L组TRβ1显著升高(P<0.01),Cyclin D1的表达显著降低(P<0.01)。As_(2)O_(3)作用48h,6.250μmol/L组TRβ1蛋白表达显著升高(P<0.01),各组Cyclin D1表达均显著降低(P<0.01)。基因表达结果与蛋白表达结果基本一致。(2)与对照组相比,As_(2)O_(3)作用RH-35细胞12h,各组TRβ1蛋白表达量显著升高(P<0.01)。As_(2)O_(3)作用RH-3524h,1.563μmol/L组TRβ1蛋白表达量明显升高(P<0.05),其余组显著升高(P<0.01)。As_(2)O_(3)作用48h,3.125和6.250μmol/L组TRβ1蛋白表达显著升高(P<0.01),1.563μmol/L组明显降低(P<0.05)。As_(2)O_(3)作用RH-3512,24,48h,各组Cyclin D1蛋白表达量均显著降低(P<0.01)。基因结果与蛋白结果基本一致。表明As_(2)O_(3)随着作用时间的增加,引起大鼠肝脏细胞系BRL-3A和肝癌细胞系RH-35TRβ1的水平异常,进而干扰Cyclin D1的水平。

鲑鱼皮明胶水解物的抗氧化活性及其对细胞氧化损伤的保护作用

采用碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶水解鲑鱼皮明胶,得到水解度为4.7%到13.5%的7个明胶水解物,分别评价明胶水解物对自由基的清除能力。明胶水解物(0.5、1、2mg/mL)预先作用BRL大鼠肝细胞2h后,通过H2O2(5mmol/L)诱导氧化损伤,分别测定细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)等细胞内抗氧化产物的含量变化。结果表明,明胶水解物的抗氧化活性随着水解度的增大呈增强趋势。明胶水解物对细胞具有保护作用,可显著提高细胞存活率,降低LDH渗出量和MDA生成量,且存在一定的剂量关系,但细胞中GSH含量变化不显著;7个明胶水解物对H2O2诱导肝细胞损伤保护时,细胞存活率与水解物的体外抗氧化活性大小显著正相关,而LDH渗出量和MDA生成量与水解物的体外抗氧化活性大小负相关。

流体切应力促永生化大鼠BRL-3A肝细胞增殖的研究

目的观察不同大小流体切应力对永生化大鼠BRL-3A肝细胞株增殖动力学的影响。方法构建流体切应力加载细胞培养装置，以永生化大鼠BRL-3A肝细胞株为研究对象，实验分为未添加肝细胞生长因子（HGF）的A组和添加HGF的B组，各组加载0、12、24dyn／cm^2大小的流体切应力，采用直接细胞计数和分光光度计测定细胞计数试剂盒（CCK-8）的方法检测12、24、48、168h细胞增殖动力学的变化。结果未加载流体切应力时，B组细胞增殖优于A组；加载流体切应力越大，A组和B组细胞均增殖更明显；在同一时间点加载同样大小切应力时，B组细胞增殖由于A组（P〈0．05）。加载大小为24dyn／cm^2的切应力培养细胞24h，A和B组的细胞计数和CCK-8分光光度计吸光度（A）值均达到最高值，细胞计数分别为A组（10．73±2．54）×10^6个和B组（15．93±2．00）×10^6个（P〈0．05），CCK-8分光光度计A值分别为A组（2．04±0．51）和B组（3．09±0．40，P〈0．05）；24—72h逐渐下降，但仍高于未加载应力组（P〈0．05），168h则接近或略高于未加载应力组。结论流体切应力对永生化大鼠BRL-3A肝细胞株增殖有促进作用，而且，理化因素（流体切应力联合HGF）共同作用下肝细胞增殖更明显。