玉米赤霉烯酮BSA-ELISA检测试剂盒的制备

目的制备玉米赤霉烯酮(ZEN)生物素-链霉抗生物素ELISA(BSA-ELISA)检测试剂盒。方法应用BSA-ELISA法制备ZEN检测试剂盒,并对试剂盒进行特异性、灵敏度、精密性、准确性及稳定性检测。结果该试剂盒对玉米赤霉烯酮特异性较好;检出范围为0.0125～192.0000ng/ml;灵敏度达0.0125ng/ml;试验内变异系数为1.8%～3.1%,试验间变异系数为4.5%～8.8%;检测人工污染的香肠样品中ZEN的平均回收率为(92.00±2.71)%,检测人工污染的生理盐水样品中ZEN的平均回收率为(85.02±4.33)%;试剂盒在4℃可保存4个月,-20℃可保存6个月。结论已成功制备了特异性强、灵敏度高、精密性好、准确性高的ZENBSA-ELISA检测试剂盒。

BSA-ELISA法检测血清中■草及藜草花粉特异性IgE

目的 提高草及藜草花粉过敏性哮喘病因学诊断的可靠性。方法 应用BSA ELISA法 ,检测 6 2例哮喘患者及 30例健康成人血清中草与藜草花粉特异性IgE(sIgE) ,与临床皮肤试验 (ID)结果比较。 结果 草及藜草花粉ID与sIgE同属 ,阴性和阳性反应者均 85 %以上 ,草与藜草花粉sIgE及ID阳性率均 4 5 %以上 ;草与藜草花粉sIgE测定OD指数均值明显高于正常人 ,P <0 0 1;健康成人ID阳性率 6 7% ,sIgE无 1例阳性。结论 草及藜草花粉是西安地区哮喘患者重要吸入性致敏原 ,具有较强变应原性 ,可使敏感者体内产生较高水平的slgE ;ID及sIgE测定均为草及藜草花粉过敏性哮喘病因诊断的可靠方法 ,尤其是BSA ELISA法测定sIgE的特异性更强。

BSA-ELISA法检测隐孢子感染者mIL-2R水平的逻辑质研究

〔目的〕由逻辑质方法探讨隐孢子虫病患者的免疫细胞膜白介素 -2受体 (mIL -2R)表达功能的特征。〔方法〕采用生物素 -链霉亲和素 (Biotin -Streptavidin ,BSA)法对卵囊阳性患者分别进行外周血T细胞亚群、膜白介素 -2受体 (mIL -2R)检测 ;进行逻辑质指标分析。〔结果〕在静息期和诱导期 ,隐孢子虫卵囊阳性者的免疫细胞膜白介素 -2受体表达水平与卵囊阴性者mIL -2R相比 ,在逻辑上存在显著差异 (t≤ 0 93 0 7,P >0 0 5 ;t≥ 4 63 88,P <0 0 5 )。〔结论〕隐孢子虫感染者免疫细胞的mIL -2R表达水平降低。

应用ND-O-BSA-ELISA对贵州省贵阳市的麻风病患者家属及周围人群抗体水平的检测研究

目的 了解贵州省贵阳市麻风患者家属及周围人群血清中麻风抗体水平情况,为麻风患者家属及周围人群的重点随访提供有力依据。方法 将检测对象的一般信息和应用ND-O-BSA-ELISA检测的IgM、MMP-IgG和LID-IgG抗体检测值导入Excel电子数据库,再用SPSS 18.0分析软件对抗体检测值进行χ^(2)检验和t检验。结果 麻风患者家属中3人的IgM为阳性,周围人群无阳性病例,但两组不同人群的IgM抗体变化差异无统计学意义(P>0.05);在麻风病患者家属组中,有50人MMPIgG为阳性,占23.47%,有44人LID-IgG为阳性,占20.66%;周围人群中有12人MMP-IgG阳性,占4.90%,11人LID-IgG阳性,占4.90%。两组不同人群的MMP-IgG和LID-IgG抗体变化差异具有统计学意义(P<0.001)。结论 应用ND-O-BSAELISA方法能有效检测麻风病患者家属及周围人群的麻风特异性抗体水平。在体检和随访时不仅要关心麻风病患者本人,也要关注其家属,同时兼顾周围人群。

用ND-O-BSA-ELISA检测小鼠血清中抗麻风杆菌IgM抗体的研究

目的 为了探讨感染麻风杆菌小鼠血清中特异性IgM抗体的变化情况。 方法 用ND O BSA ELISA检测了 5 0只未感染小鼠及 12 7只感染小鼠的IgM抗体水平。结果 感染小鼠血清中IgM抗体水平非常显著地高于未感染正常小鼠 (P <0 0 1) ;未治疗组小鼠与治疗组小鼠间差异也有非常显著性 (P <0 0 1) ;而且不同抗麻风药物及同一药物不同剂量组之间抗体水平也出现明显差异 (P <0 0 1或P <0 0 5 )。结论 感染小鼠IgM抗体水平与菌负荷一致 ,并与感染程度和实际化疗结果相关。

诺氟沙星与牛血清白蛋白及卵清蛋白结合物的合成

采用碳二亚胺法制备诺氟沙星与牛血清白蛋白(BSA)的结合物,作为诺氟沙星酶联免疫用的免疫原。经紫外光谱法测定,每分子牛血清白蛋白连接的诺氟沙星分子数为16.1个。分别用碳二亚胺法和混合酸酐法制备诺氟沙星与卵清蛋白(OA)的结合物,作为诺氟沙星酶联免疫测定用的包被抗原。经紫外光谱法测定,每分子卵清蛋白连接的诺氟沙星分子数分别为5.8和1.9个。

ELISA法检测组织工程产品中残留牛血清蛋白含量

目的探讨定量检测牛血清白蛋白(Bull serum albumin,BSA)酶联免疫试剂盒用于组织工程医疗产品(Medical products of tissue engineering,TEMPs)残留BSA检测的适用性,以及清洗程序对产品BSA残留量的影响。材料和方法检测了三种组织工程医疗产品(组织工程骨、组织工程肌腱以及组织工程角膜贴片)中BSA的残留量,并比较了经不同清洗程序清洗后角膜贴片中残留BSA含量。结果(1)组织工程骨、组织工程肌腱以及组织工程角膜贴片中BSA残留量分别为31.8ng/ml,4.9ng/ml和低于2.5ng/ml,且测定值与其稀释倍数呈正相关;(2)生理盐水及无血清的MEM培养基平均OD值与试剂盒中零浓度标准品接近,表明生理盐水或无血清MEM作为样品浸提介质对最终的实验结果无明显影响;(3)样品复孔比均小于1.24,符合试剂盒有效性要求。经清洗程序2处理后,角膜贴片中残留BSA较清洗程序1明显减少。结论(1)该试剂盒适用于组织工程医疗产品中BSA残留量的检测。(2)对于组织工程医疗产品而言,不同的清洗程序对BSA的残留量有非常明显的影响。生产商应根据其预期用途制定有效的清洗程序,并在说明书中给予足够的阐述。

乳牛孕酮人工抗原的制备与鉴定

采用二环己基碳化二亚胺偶联法将孕酮-11α-半琥珀酸酯(11-αOH-P4-HS)分别与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)载体偶联,制备乳牛孕酮人工抗原P4-BSA和P4-OVA,并用SDS-PAGE对制备的人工抗原进行测定。再用制备的人工免疫抗原P4-BSA免疫BALB/c小鼠制备免疫血清。用P4-OVA作为ELISA检测抗原,方阵滴定法确定检测抗原的最佳包被浓度,间接ELISA测定免疫血清中抗体的特异性及效价。结果表明,成功制备了乳牛孕酮人工抗原,P4-OVA的最佳包被浓度为5.82×10-5ng/mL,最佳封闭液为50 mL/L的羊血清,免疫血清具有良好的特异性。

结核病与mIL-2R、sIL-2R的表达

目的探讨结核病与膜白介素-2受体(mIL-2R)、可溶性白介素-2受体(sIL-2R)表达水平的关系。方法采用生物素-链霉亲和素(Biotin-Streptavidin,BSA)系统及双抗体夹心ELISA法检测结核病患者mIL-ZR及sIL-2R的表达水平。结果结核病患者PHA诱导前后 mIL-2R水平分别为(3.28±1.35)％和(29.18±5.86)％,与对照组相比,差异有显著性(P<0.01和P<0.05);结核病患者血清中sIL-2R水平为(474.3±102.5)％,与对照相比,差异有显著性(P<0.01)。有空洞型肺结核的mIL-2R、sIL-2R表达水平的变化较无空洞者更为明显(P<0.01)。无空洞型肺结核,与结核性胸膜炎、肾结核的mIL-2R、sIL-2R表达水平相似,差异无显著性(P>0.05)。结论结核病患者体内mIL-2R表达水平降低,sIL-2R水平升高,结核病患者体内存在明显细胞免疫功能低下,其外周血单个核细胞(PBMC)对PHA的诱导反应能力降低。结核的病变部位、病变程度及预后与患者的mIL-2R、sIL-2R表达水平有一定关系。

牛血清白蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

用牛血清白蛋白(BSA)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,培养上清经过双抗体夹心法检测初步筛选分泌鼠IgG的杂交瘤细胞,将此种杂交瘤细胞注射小鼠产生的腹水用间接ELISA法筛选,获得4株能稳定分泌抗BSA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2A5、3A3、3G6、4A8。鉴定结果显示,2A5细胞分泌IgG2a/κ,其余3株细胞分泌IgG1/κ;纯化后4株腹水单抗的纯度达90%以上,对BSA的ELISA滴度均可达到1∶100000以上;4株单抗均不与人以及马、猪、羊、兔、豚鼠等血清发生交叉反应;W estern B lotting试验证明4株单抗均识别分子量为68000的BSA;用间接ELISA法测定4株单抗相对亲和力及相对敏感度大小依次为3A3>2A5>3G6>4A8;杂交瘤细胞株连续培养3个月以及冻存半年后复苏,细胞生长良好,杂交瘤细胞分泌的抗体效价稳定。

牛血清白蛋白制品中杂蛋白对牛血清ELISA的影响

本试验对 8种不同厂家生产的牛血清白蛋白 (BSA)产品进行电泳试验和ELISA试验 ,判断BSA产品中杂质蛋白对ELISA检验 ,尤其是牛血清ELISA是否有影响。试验结果表明 ,(BSA)中含有杂质蛋白时 ,尤其是γ_球蛋白 ,会严重干扰牛血清ELISA结果。因此 ,在进行牛血清ELISA时 ,必须慎重选择BSA制品 ,以使ELISA检验结果更为准确。

1型糖尿病患者血清抗BSA抗体水平的初步研究

目的：研究成人１ 型糖尿病患者血清中抗ＢＳＡ 抗体的水平。方法：用ＥＬＩＳＡ 法检测了４０名年龄在２０～４５ 岁之间，病程小于２ａ 的１ 型糖尿病患者血清中的ＩｇＧ 型抗ＢＳＡ 抗体。并用４０名正常人血清做对照。结果：１ 型糖尿病患者血清抗ＢＳＡ 抗体水平与对照组无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。结论：国人成人新发１ 型糖尿病患者血清ＩｇＧ 型抗ＢＳＡ

BSA对牛结核抗体ELISA检测的影响

分别研究了封闭液、血清稀释液及酶标二抗稀释液中BSA成分对牛结核抗体ELISA检测的影响。结果显示,酶标二抗稀释液中BSA的存在使ELISA检测值普遍偏低,且BSA的含量越高,检测值越低;为了提高ELISA检测值,使其达到理想检测效果,必须提高酶标二抗的使用浓度。BSA中可能存在的牛血清抗体杂质对酶标二抗起到了“中和”作用,降低了酶标二抗与目标抗体结合的实际浓度,使检测结果普遍偏低。

哮喘斜纹天蛾及蛱蝶致敏原的临床研究

应用自己研制的斜纹天蛾及蛱蝶变应原给31例哮喘患者做皮肤试验及BSA－ELISA特异性IgE测定，研究两种常见昆虫的致敏性。结果发现哮喘患者斜纹天蛾及蛱蝶的皮肤试验及特异性IgE阳性率均明显高于正常人（P＜0．01），其OD指数均值亦明显高于对照组（P＜0．01）。提示斜拉天蛾及蛱蝶可能系哮喘致敏原，建议将这两种新发现的昆虫变应原用于哮喘病因学诊断及特异性免疫治疗中。研究还显示哮喘皮肤试验与特异性IgE阳性符合申70％以上，正常对照组无1例特异性IgE阳性，提示皮肤试验与BSA－ELISA均为诊断斜纹天蛾及蛱蝶过敏理想的方法，但后者特异性更强，更安全、可靠。

人参皂苷Re多克隆抗体的制备

为了制备半抗原人参皂苷Re的特异性多克隆抗体,用过碘酸钠法构建了Re和牛血清白蛋白(BSA)的偶联物作为抗原,分5次免疫新西兰大白兔。取免疫前的新西兰大白兔血清作为空白对照,第5次免疫后采取血清,通过酶联免疫法(ELISA)鉴定血清中Re多克隆抗体的效价,再用竞争性抑制法检测抗体的灵敏性和特异性。结果表明,抗原Re-BSA偶联物制备成功,第5次免疫后,抗体的效价达到1∶40 960,与其他人参皂苷交叉反应率低于2%,特异性强,可用于人参皂苷Re的检测。

ELISA法检测疫苗中残余牛血清蛋白含量的方法学验证

为验证ELISA法检测病毒性疫苗中残余牛血清蛋白方法的可靠性,由2个部门对12个样品进行4人连续3天的验证.结果表明：4人连续3天的12次检测结果均满足牛血清白蛋白ELISA法（BSP-ELISA法）标准曲线成立的条件,建立合格标准曲线的成功率为100%;对5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL浓度的牛血清白蛋白（BSP）标准品,不同实验人员间测定结果的变异系数在2.87%～6.33%之间,精密度较好;回收率在92.9%～103.1%之间,说明不同人的测定结果准确度高.分别采用该方法与已上市的牛血清白蛋白试剂盒对7种疫苗中100个样品的残余BSP含量进行检测,二者的检测结果合格符合率为100%,用该方法对已上市的检测BSA试剂盒中的4个标准品进行检测,回收率在90.0%～117.1%,检测灵敏度为2.5ng/mL,表明BSP-ELISA法可以敏感、准确地定量检测BSA,可用于目前我公司疫苗制品中残余牛血清白蛋白的质量控制.

ELISA法检测干细胞溶液中残留牛血清白蛋白含量

目的检测胎牛血清白蛋白(Fetal bovine serum albumin,BSA)在脐带源间充质干细胞溶液的含量以代表异源蛋白在脐带源间充质干细胞溶液中的残留情况的适用性,并通过改进培养条件和增加清洗次数以进一步减少BSA等异源蛋白在脐带源间充质干细胞溶液内的残留。方法运用定量ELISA方法检测了脐带源间充质干细胞溶液中BSA的含量,并探讨改进培养方式与增加清洗次数等方法对干细胞溶液中残留的BSA含量的影响。结果对细胞清洗次数的增加能够有效减少BSA等异源蛋白的残留,并且采用无血清培养基进行干细胞培养是减少BSA等异源蛋白在干细胞溶液内残留量的最有效方法。结论通过检测BSA以代表异源蛋白在脐带源间充质干细胞溶液中残留情况具有适用性;并且增加清洗次数能有效地降低BSA的残留量;采用无血清培养基进行干细胞培养是减少BSA等异源蛋白在干细胞溶液内残留量的最有效方法。

pHGF对人单核－巨噬细胞HLA－DR表达的影响

本文以生物素－链霉亲和素酶联免疫吸附试验（ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ）分别定量检测ｐＨＧＦ在体外对健康人、糖尿病和肿瘤患者单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达水平的影响。结果显示，ｐＨＧＦ对大多数受检对象的单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ的表达有不同程度的促进作用。对健康人的促进作用最明显，糖尿病患者次之，对肿瘤患者的促进作用最弱。提示ｐＨＧＦ对人单核－巨噬细胞的抗原递呈功能有增强作用。

用ND-O-BSA-IgM-ELISA测定正常人、麻风及结核患者血清抗体水平

目的用ND-O-BSA-IgM-ELISA测定正常人和麻风及结核患者血清抗体水平以界定大连地区正常临界值及方法的敏感性和特异性。方法用ND-O-BSA抗原对60例麻风患者,各100例男、女正常人和30例肺结核患者血清进行酶联免疫吸附试验。结果 ND-O-BSA在血清浓度1∶100和临界值取0.14时,ND-O-BSA-IgM-ELISA对麻风患者检测的敏感性为95%,特异性为96.5%;结核患者无一例阳性。结论 ND-O-BSA-IgM-ELISA实验敏感性和特异性均较高,且不存在与结核血清的交叉反应,可用来早期检测麻风杆菌的感染。

IFN_γ对健康和肿瘤患者单核细胞HLA－DR表达的影响

本文采用ＢＳＡ－ＥＬＩＳＡ方法，研究ｒＨｕＩＦＮ－γ（ＩＦＮγ）对体外培养的健康人及恶性肿瘤患者外周血单核细胞表达ＨＬＡ－ＤＲ抗原的影响。结果表明：ＩＦＮγ能促进两者单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原的表达，但ＩＦＮγ对健康人单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达促进程度较恶性肿瘤患者强（Ｐ＜０．０５）。