鼠B7-H4基因重组腺病毒的构建及其在B16F10细胞中的表达、鉴定

目的构建表达鼠B7-H4的重组腺病毒并检测其在B16F10细胞中的表达。方法采用RT-PCR技术,取小鼠肺脏,TriPure提取肺脏总RNA,反转录得到cDNA序列,PCR扩增B7-H4全长,克隆到plenti6/V5克隆载体中并经过测序证实与标准序列一致。加入适当的酶切位点,双酶切PCR扩增产物连接入pAd track CMV中构建成腺病毒穿梭质粒pAd track CMVmB7-H4,经酶切线性化后,用CaCl2的方法转化到含有腺病毒骨架质粒pAd Easy的BJ 5183大肠杆菌中,挑选同源重组菌落提取质粒,酶切线性化重组质粒并转染293细胞,包装成重组病毒颗粒。重组病毒上清感染B16F10细胞,并用PE标记的B7-H4单克隆抗体检测B16F10细胞mB7-H4蛋白的表达。结果RT-PCR扩增得到含编码mB7-H4的860 bp基因片段,与预期大小一致,并经过测序证实与标准序列一致。成功构建了mB7-H4重组腺病毒,病毒滴度达到3×1013pfu/ml,pAd mB7-H4重组腺病毒表达载体感染B16F10细胞后,荧光显微镜观察显示PE标记的mB7-H4单克隆抗体染色B16F10细胞阳性。结论成功构建了mB7-H4重组腺病毒,转染B16F10细胞后表达出有活性的B7-H4蛋白,为进一步研究B7-H4分子在器官移植、自身免疫性疾病以及肿瘤逃逸机制中的作用奠定了基础。

B7-H4、IRF-2水平检测对胰腺癌患者预后的评价

目的探讨免疫组化法检测协同刺激分子B7-H4和干扰素调控因子2(IRF-2),对预测胰腺癌患者预后的价值,以指导临床治疗。方法应用免疫组化法检测B7-H4及IRF-2在67例原发性胰腺癌手术切除标本中的表达的,研究其表达情况与胰腺癌临床病理因素及患者预后的关系。结果 67例标本B7-H4阳性48例,平均染色积分(4.07±1.28)分;IRF-2阳性38例,平均染色积分(3.58±1.07)分,2者在胰腺癌中的表达呈正相关(P<0.05)。B7-H4的表达与卡氏功能状态(KPS)评分有关;IRF-2与TNM分期、肿瘤分化程度、肿瘤T分期有关。B7-H4或IRF-2阴性患者的预后显著优于其他患者(P<0.05),COX回归多因素分析显示,B7-H4高表达、IRF-2高表达、淋巴结转移及TNM分期为影响胰腺癌预后的独立因素。结论 B7-H4及IRF-2的高表达可能会促进胰腺癌的发展,联合检测两者有助于评价患者预后并指导疾病的长期治疗。

共信号分子B7-H4在人肺腺癌中的表达及临床意义

目的研究共信号分子B7-H4在人肺腺癌组织中的表达及临床意义。方法收集2013年10月-2014年10月手术切除的肺腺癌患者肺癌组织标本94份,正常肺组织标本20份,应用免疫组织化学法,分别检测组织标本中B7-H4的表达水平。结果 B7-H4在20份正常人肺组织中表达较低,在94份人肺腺癌组织中的阳性表达率为67.32%,在合并有淋巴结转移的肺腺癌组织中B7-H4的阳性表达率为73.24%。低分化组肺腺癌组织B7-H4阳性表达率(84.82%)明显高于中分化组(77.38%)和高分化组(62.51%)。结论共信号分子B7-H4在肺腺癌组织中表达上调,有可能成为评价肺腺癌分化程度和淋巴结转移的指标之一。

超声联合血清肿瘤标记物CA125、B7同源体4(B7-H4)对卵巢癌的诊断价值

目的探讨超声检查联合血清肿瘤标记物CA125、B7同源体4(B7-H4)在卵巢癌诊断中的价值。方法选择80例卵巢癌患者作为观察组,另选80例良性卵巢肿瘤患者作为对照组。比较两组3种单项检查方法和联合检查的敏感性、特异性、准确性、阴阳性预测值。结果观察组患者的肿瘤标记物B7-H4、CA125的血清水平、TV-CDFI评分均明显优于对照组(良性卵巢肿瘤患者),统计学有意义(P<0.05),肿瘤标记物B7-H4、CA125、超声检查TV-CDFI单项检测以及3者联合检测的敏感性分别为83.8%、75.9%、76.1%、92.1%;特异性分别为94.9%、85.2%、92.5%、96.2%,准确性分别为83.7%、82.5%、85.1%、92.5%;阳性预测值87.5%、82.5%、85.2%、92.5%;阴性预测值87.5%、88.7%、88.7%、96.2%,联合检测的结果均优于单项检测结果,统计学有意义(P<0.05)。结论超声检查联合检测血清肿瘤标记物CA125、B7同源体4(B7-H4),有助于卵巢癌的诊断,值得临床推广。

协同刺激分子B7-H4在胃癌组织中的表达及定位

探讨负性协同刺激分子B7-H4在胃癌组织及浸润免疫细胞亚群中的表达及定位。应用免疫组织化学、免疫荧光染色及激光共聚焦技术检测B7-H4蛋白在胃癌组织中的表达及定位;流式细胞术检测分析胃癌患者PBMC亚群(CD3+T细胞、CD19+B细胞、CD14+单核细胞及粒细胞)中B7-H4的表达。免疫组织化学检测结果表明,B7-H4在胃癌组织中呈阳性表达。免疫荧光染色及激光共聚焦检测结果显示,B7-H4在胃癌组织中呈阳性表达,并主要定位于胃癌细胞的细胞膜,特别是在Ki67+高度增殖的胃癌细胞中B7-H4呈高表达,且B7-H4在CD34+血管内皮细胞中呈高表达;B7-H4在浸润CD19+B细胞和CD68+巨噬细胞中呈高表达;而在胃癌浸润CD4+T细胞、CD8+T细胞及CD57+NK细胞中呈弱表达。流式细胞术检测结果表明,B7-H4在胃癌患者外周血浸润CD19+B细胞及粒细胞中呈阳性表达,而在浸润CD3+T细胞及CD14+单核细胞中呈弱表达。本研究结果提示B7-H4在胃癌组织中可表达于肿瘤细胞和部分浸润免疫细胞,并可通过其介导的信号途径参与胃癌的发生与发展。检测B7-H4的表达可作为潜在的胃癌诊断、治疗及预后判断的新靶点。