神经节苷脂类抑制BT325细胞系的生长

应用自提的神经节苷脂GM 3,牛脑神经节苷脂 (bovinebraingangliosides,BBG)加入低血清培养的人多形成胶质细胞瘤BT32 5细胞中观察其对该细胞系的影响 ;以及GM3、BBG对表皮生长因子(EGF)刺激该细胞系生长的拮抗作用 .结果表明GM3、BBG均能抑制BT32 5细胞生长 ,GM 3的抑制作用远高于BBG ,其抑制率为 60 2 8% (P <0 0 1 ) ,BBG为 1 9 33% ,在含不同浓度的EGF培养液中分别加入GM3、BBG均可拮抗EGF对BT32 5生长的刺激作用 ,GM3的拮抗作用远高于BBG .

神经节苷脂类抑制BT325细胞系生长机理的初步探讨

用１２５ＩＥＧＦ与人多形成胶质细胞瘤ＢＴ３２５细胞系膜上ＥＧＦ受体的饱和结合实验，竞争抑制实验研究ＧＭ３，ＢＢＧ（ｂｏｖｉｎｅｂｒａｉｎｇａｎｇｌｉｏｓｉｄｅｓ）对ＥＧＦ受体最大结合量，亲和常数及受体数目的影响；放射受体法观察ＥＧＦＥＧＦＲ复合物内吞过程，测定胞质和培养基中ＥＧＦ含量．结果表明：ＢＴ３２５细胞质膜上存在高亲和力ＥＧＦ结合位点，ＧＭ３对ＥＧＦ与其受体的亲和力无明显抑制作用（Ｐ＞００５），但能明显减少其受体的数目（Ｐ＜００５）；ＧＭ３能明显延长ＥＧＦＥＧＦＲ复合物内吞过程；ＧＭ３处理的胞质中ＥＧＦ浓度比对照组显著升高（Ｐ＜００５），培养液中无明显差异。

p53和bcl-2表达与BT325细胞辐射性凋亡的关系

目的探讨癌基因表达的变化与辐射诱导肿瘤细胞凋亡的关系。方法采用免疫组化技术检测人多形性胶质母细胞瘤细胞系，经Ｘ射线处理前后ｐ５３、ｂｃｌ－２基因表达的变化；原位杂交方法检测ｐ５３基因在ｍＲＮＡ水平表达的变化。结果①凋亡组内ｐ５３蛋白表达率明显高于对照组，ｂｃｌ－２表达显著减弱，ｐ５３与ｂｃｌ－２蛋白表达呈显著性负相关。②凋亡组内ｐ５３在ｍＲＮＡ水平表达量明显高于对照组，ｐ５３基因在蛋白水平与ｍＲＮＡ水平表达呈显著性正相关。

CD、Flt-1基因共表达重组质粒的构建及对BT325细胞增殖的抑制作用

目的构建CD、Flt-1基因共表达重组质粒,并检测其对BT325细胞增殖抑制的影响。方法从大肠杆菌及人脐静脉内皮细胞中提取总RNA,利用逆转录聚合酶链式反应(RT-RCR)扩增CD基因和FLT-1基因片段,应用基因重组技术将CD基因和Flt-1基因片段克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,经酶切鉴定及DNA序列分析证实所构建的载体。转染BT325细胞株,通过MTT法和流式细胞术观察其对细胞的增殖抑制作用。结果 RT-RCR方法获得CD基因和Flt-1基因片段,酶切分析和DNA测序鉴定表明重组质粒pEGFPC1-CD-Flt-1构建成功。转染72h后实验组细胞生长速度是control组的(33.2%±5.4%),流式细胞术发现实验组细胞的G1期细胞比例明显高于control组,细胞出现凋亡,实验组细胞的凋亡率为(19.7%±5.45%)。结论成功构建真核表达重组质粒pEGFP-C1-CD-Flt-1,其体外可抑制BT325增殖并诱导其凋亡。

Flt-1基因对BT325细胞VEGF蛋白表达及细胞增殖的影响

目的 探讨Flt-1基因对BT325胶质瘤细胞VEGF蛋白表达及细胞增殖的影响.方法 从人脐静脉内皮细胞中提取总RNA,逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增Flt-1基因片段,基因重组技术将Flt-1基因片段插入真核表达载体pEGFP-C1中,双酶切及DNA测序鉴定pEGFP-C1-Flt-1重组质粒.pEGFP-C1-Flt-1重组质粒转染BT325胶质瘤细胞,转染后72hELISA法检测培养上清液中VEGF含量,MTT法检测细胞的增殖情况.结果 RT-PCR方法证实从人脐静脉血内皮细胞中成功获得1 384 bp Flt-1基因片段;经双酶切分析和DNA测序鉴定表明重组质粒pEGFP-C1-Flt-1构建成功;ELISA检测发现,BT325细胞被转染后72 h VEGF含量转染组为（56.3±41.2） pg/ml,空载体转染组为（95.5±35.3） pg/ml（P＜0.05）;MTT法检测发现,转染组和空载体转染组的生存率分别为（42.6±3.7）％和（92.8±6.6）％（P＜0.05）.结论 Flt-1基因可抑制BT325细胞VEGF的蛋白表达,抑制细胞增殖.

脑胶质瘤不同照射方案生物效应的实验研究

目的 通过对人脑多形性胶质母细胞瘤（BT325细胞系）裸小鼠移植瘤不同分割模式照射后生物效应的实验研究,加深对人脑胶质瘤放射反应生物学特性认识,为临床设计照射计划、制定合理分次治疗方案提供实验依据.方法 对BT325细胞系裸小鼠移植瘤进行单次10、20、30、40、60 Gy照射和2 Gy每周5次每天照射、3 Gy每周3次隔天照射、3 Gy每周5次每天照射、4 Gy每周3次隔天照射,总剂量分别为125、114、126、112 Gy.用肿瘤生长曲线评价剂量效应关系并测定肿瘤体积倍增时间.取贴壁生长的指数生长期BT325细胞,用生长曲线测定细胞倍增时间,细胞克隆形成分析法绘制细胞存活曲线（照射剂量为0、1、2、4、6、8、10 Gy）计算曲线参数值,彗星分析法测定DNA单链断裂半修复时间（T1/2）.结果 单次照射各剂量点均不能有效控制肿瘤.2 Gy5次/周和3 Gy3次/周治疗方案对人脑胶质瘤实体瘤也无明显治疗效果.增加分次剂量可使脑胶质瘤实体肿瘤有较明显的消退,其中4 Gy3次/周方案好于其他方案但仍未能达到治愈肿瘤的效果.表明对肿瘤干细胞的控制不理想.各项生物学参数的测定结果：BT325细胞倍增时间为30.16 h,裸小鼠移植瘤肿瘤倍增时间为43 d;细胞存活曲线LQ模型拟合的α=0.360 Gy-1、β=0.057 Gy-2,多靶单击模型拟合的D0=1.394 Gy、Dq=2.127 Gy、SF2=0.714;5 Gy照射DNA单链断裂的T1/2=9.999 min.结论 本实验从实证实验角度印证了临床上脑胶质瘤是一种放射耐受性较高的肿瘤的看法.研究结果提示增高分割剂量有可能提高肿瘤的近期疗效（使肿瘤消退率增加）,但如何提高对肿瘤干细胞的控制还需进一步深入研究.各项生物学参数测定结果提示脑胶质瘤细胞内在放射敏感性较差.