灯盏乙素通过环状GMP-AMP合酶-干扰素基因刺激因子通路抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症

目的探讨灯盏乙素对脂多糖(LPS)诱导的BV-2小胶质细胞神经炎症的影响。方法培养BV-2小胶质细胞系,将BV-2小胶质细胞分为对照组(Ctrl)、环状GMP-AMP合酶(cGAS)抑制剂RU320521(RU.521)组、LPS组、LPS+RU.521组、LPS+灯盏乙素预处理(LPS+S)组、LPS+S+RU.521组,共6组。Western blotting及免疫荧光双标染色法检测并观察BV-2小胶质细胞中cGAS、干扰素基因刺激因子(STING)、核因子κB(NF-κB)、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、PYD结构域蛋白3(NLRP3)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达变化(n=3)。结果Western blotting和免疫荧光双标染色均显示,与对照组相比,LPS诱导后,BV-2小胶质细胞中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);与LPS组相比,LPS+S组中cGAS、STING、p-NF-κB、NLRP3和TNF-α蛋白的表达水平显著下降(P<0.05)。使用cGAS通路抑制剂RU.521后显示了与灯盏乙素预处理组相似的作用效果。此外,NF-κB在各组的变化不明显(P>0.05)。结论灯盏乙素干预抑制BV-2小胶质细胞介导的神经炎症反应,可能与cGAS-STING信号通路有关。

口腔扁平苔藓T细胞受体BV基因的优势取用初探

目的:研究口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)患者损害组织中浸润的T细胞受体(T cell receptor,TCR)BV基因的取用格局。方法:采用实时定量聚合酶链反应,分析OLP患者损害组织中浸润的T细胞和外周血中T细胞TCR BV基因的取用格局。采用GraphPad Prism version 5.00软件对数据进行Mann-Whitney U检验。结果:43例OLP患者的损害组织对BV4、BV14和BV18基因的取用显著高于39例OLP患者外周血对这些BV基因的取用。结论:OLP患者损害组织浸润的T细胞优势取用BV4、BV14和BV18基因,提示带有BV4、BV14和BV18基因的T细胞参与了OLP的发病。

川芎嗪通过AMPK-NFκB信号通路抑制BV-2小胶质细胞促炎性细胞因子基因表达

目的观察川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对Aβ25-35诱导的BV-2小鼠小胶质细胞促炎性细胞因子基因表达及对一磷酸腺苷激活的蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)-核因子κB(nuclear factor kappa B,NFκB)信号通路的影响。方法采用Aβ25-35激活BV-2细胞的炎性反应,测定TMP高、中、低剂量(终浓度分别为100、30、10μmol/L)对Aβ25-35诱导的BV-2细胞白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)及诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)mRNA表达水平的影响。在AMPK激活剂(AICAR)及抑制剂(化合物C)存在下,检测TMP对AMPK及p65(NFκB亚基)磷酸化的影响。结果 TMP高、中剂量可明显抑制BV-2细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α和iNOS基因mRNA表达水平(P<0.01),高剂量TMP可激活BV-2细胞中AMPK(P<0.01),并抑制p65磷酸化(P<0.01)。结论 TMP通过激活BV-2细胞中AMPK活性,抑制NFκB活化,进而抑制促炎性细胞因子基因的表达。

2017-2019年贵州省BV系流感病毒的分子特征分析

目的了解贵州省BV系流感暴发疫情和重症病例毒株的分子特征,探讨其特异性分子靶标,为流感的防控提供依据。方法选取贵州省2017-2019年BV系流感暴发疫情、重症病例和普通流行毒株,经基因组的提取、HA和NA基因的扩增与测序,与参考株一起进行分子特征分析。结果贵州省所有毒株HA和NA基因进化树拓扑结构类似,整体上毒株处于3个分支,2017年的毒株聚集为一簇,2018年的分散存在,2019年的处于两个分支且相对较远,绝大部分暴发疫情毒株和重症病例毒株均处于分支1。贵州省所有毒株同疫苗株B/Colorado/06/2017 HA和NA基因同源性最高,分别为98.6%~99.3%和98.9%~99.4%;2017年BV系毒株间HA和NA基因同源性分别为99.9%和99.9%~100%,2018年分别为98.4%~99.3%和98.7%~99.1%,2019年分别为97.7%~100%和98.4%~99.9%,其中2019年分支2中的毒株间同源性分别为99.4%~100%和99.6%~99.9%,分支1中的分别为99.5%~100%和99.3%~99.9%,所有暴发疫情、重症病例毒株同当年度普通流行毒株之间同源性均高于99.4%;与疫苗株B/Colorado/06/2017相比所有毒株HA基因均存在S14N、G144D、V195I、K513R的突变,NA基因均存在Q371K、D490N的突变;2019年分支1中的毒株HA基因存在G148R、K151E和T563A以及NA基因存在A395T的特异性位点突变;分支2中的毒株HA基因存在V394I和NA基因存在V71A、K343E、A395V和V401I的特异性位点突变。同时,分支1中的毒株HA基因与疫苗株B/Brisbane/60/2008相比存在179-181KND的特异性缺失突变,与B/Colorado/06/2017相比存在181D的特异性缺失突变和150环的抗原位点突变。结论贵州省BV系暴发疫情毒株之间存在一定的差距,但暴发疫情毒株与普通流行毒株之间亲缘关系和同源性较高,2019年存在两个分支群系毒株的流行,且暴发疫情、重症病例毒株主要以分支1中的毒株流行为主;贵州省暴发疫情、重症病例毒株存在多个位点的特异性突变和缺失突变,应进一步加强分子特征的实时监测和致病力相关的特异性分子靶标研究。

猴B病毒gB基因在昆虫细胞中的表达

目的研发猴B病毒ELISA检测试剂盒中替代全病毒的抗原。方法根据已报道的猴B病毒E2490株gB蛋白基因序列(GenBank登录号:AF533768)人工合成gB基因,通过XbaⅠ和EcoRⅠ特异性酶切,将gB基因克隆于昆虫杆状病毒表达载体pFastBacHTA,经PCR、酶切、测序鉴定后,成功构建了携带gB基因的重组质粒pFastBac-HTa-gB。结果该重组质粒转化含有杆状病毒穿梭载体的DH10BAC感受态细胞,经抗生素、PCR筛选,获得转座的杆粒bacmid-gB。在脂质体介导下转染sf9昆虫细胞,细胞变大变圆细胞核扩大,收获重组杆状病毒,再感染细胞,收获目的蛋白。通过SDS-PAGE和Western blot分析及间接免疫荧光检测,结果表明该蛋白得到表达,且具有良好的生物活性,大小约为98kDa。实验结果表明已成功构建了携带目的基因的重组质粒pFastBac-HTa-gB和转座的杆粒bacmid-gB,转染后在sf9昆虫细胞上得到表达。结论研究结果为下一步以表达的gB蛋白为诊断抗原,替代现阶段以病毒作为抗原的猴B病毒ELISA检测试剂盒的研制奠定了基础。

透明颤菌vgb基因整合型大肠杆菌的培养特性

透明颤菌血红蛋白(VHb)是一种氧调节、氧结合蛋白,其基因vgb的表达在转录水平上受氧调控.大肠杆菌E.coliBV是采用基因同源重组方法将vgb基因整合到基因工程常用宿主菌E.coliBL21中构建得到的.研究了不同价态的铁离子对同源重组菌的生长特性及VHb合成的影响,研究表明,0.2mmol/L的二价铁离子具有促进VHb表达从而刺激菌体细胞生长的作用.在0.1L/h低通气量条件下,E.coliBV分别进行间歇培养和流加培养,低溶氧刺激VHb在短时间内迅速大量合成,改善了细胞内氧的传递性能,使生长期分别延长到25h和45h,生物量(DCW)分别达到9.6g/L和26g/L.

类风湿关节炎患者T细胞受体BV基因的表达

目的 检测中国人群中类风湿关节炎（ Ｒ Ａ） 患者 Ｔ 细胞 Ｔ Ｃ Ｒ Ｂ Ｖ 基因表达的偏移。方法 采用半定量 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ 方法，分析６ 例 Ｒ Ａ 患者的外周血、关节液、滑膜（ 每例均取三种标本） 中新鲜分离的未经 Ｉ Ｌ２ 刺激的 Ｔ 细胞 Ｔ Ｃ Ｒ Ｂ Ｖ１ ～２０ 基因片段的表达。结果 患者外周血与正常人外周血 Ｔ Ｃ Ｒ Ｂ Ｖ 基因表达格局相似；患者关节液与滑膜 Ｔ Ｃ Ｒ Ｂ Ｖ 基因表达格局相似；而患者关节内（ 关节液＋ 滑膜） Ｔ Ｃ Ｒ Ｂ Ｖ 基因表达格局与外周血相比， Ｂ Ｖ２ 、 Ｂ Ｖ７ 、 Ｂ Ｖ１１ 高， Ｂ Ｖ１３１ 、 Ｂ Ｖ２０ 低。结论 Ｒ Ａ 患者关节内 Ｔ 细胞在对 Ｔ Ｃ Ｒ Ｂ Ｖ 基因片段的优势表达。

T细胞识别HLA DRB1 0901分子显示TCR BV基因取用的高度局限性

目的分析ＤＲ９纯合细胞刺激下ＤＲ９阴性正常人ＴＣＲＢＶ基因片段的取用格局，确定和分离出ＤＲ９关联性疾病中的自身反应性Ｔ细胞克隆。方法常规方法获取ＰＢＭＣ经ＰＣＲ－ＳＳＯ和ＰＣＲ－ＲＦＬＰＤＮＡ分型，确定ＤＲ、ＤＱ、ＤＰ等位基因后，进行单向混合淋巴细胞培养，抽提总ＲＮＡ并合成第一链ｃＤＮＡ，定量ＰＣＲ检测２２种ＴＣＲＢＶ基因片段的取用格局。结果Ｔ细胞对ＤＲ９分子的识别和扩增具有寡克隆性，２例都有ＢＶ７和ＢＶ１６片段的优势取用，而片段ＢＶ１９和ＢＶ１０则在２例中分别表达。结论实验结果表明，共有ＢＶ７和ＢＶ１６片段的优势取用是ＤＲ９抗原等分子经直接途径激活了带有相应ＴＣＲＢＶ细胞的结果；而片段ＢＶ１９和ＢＶ１０在２例中分别表达可能是不同ＨＬＡ背景的ＡＰＣ间接递呈ＤＲ９抗原的结果。

采用MALDI-TOF MS和全基因组测序鉴定和分析动弯杆菌属及其亲缘关系

目的用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）技术结合16S rRNA基因测序鉴定动弯杆菌，并通过全基因组测序分析动弯杆菌的耐药基因及该菌属种间亲缘关系。方法将65例细菌性阴道病（bacterial vaginosis，BV）患者的阴道分泌物标本厌氧培养获得25株动弯杆菌，采用MALDI-TOF MS及16S rRNA基因测序鉴定细菌种属，并提取细菌全基因组DNA进行二代测序，测序后得到的原始数据根据SPAdes软件进行拼接组装，并与ARGD耐药基因库比对得到这些细菌含有的获得性耐药基因，最后通过Harvest软件对所有菌株进行核心基因组多样性比较，构建进化树。结果采用MALDI-TOF MS鉴定动弯杆菌属仅能获得柯氏动弯杆菌的鉴定结果；采用16S rRNA基因测序能将动弯杆菌属菌株区分为柯氏动弯杆菌和羞怯动弯杆菌；全基因组分析显示动弯杆菌主要含有四环素耐药基因tet（o）及大环内酯类耐药基因erm（x），其中tet（o）基因的检出率为84.7%，erm（x）基因的检出率为61.5%；动弯杆菌属两个种内亲缘关系相近，种间亲缘关系甚远。结论本实验结果表明目前MALDI-TOF MS不能鉴定出动弯杆菌属中的羞怯动弯杆菌；动弯杆菌对四环素类及大环内酯类抗生素具有潜在的耐药性；动弯杆菌在种内进化缓慢，暂无新种出现的趋势。