河北省奶牛牛病毒性腹泻/粘膜病病毒的分离鉴定

从河北省某规模化奶牛场牛病毒性腹泻/粘膜病(BVD/MD)疑似病例中采集病料,将处理好的病料接种MDBK细胞,盲传9代,得到了不产生细胞病变的病毒。琼脂扩散试验表明本病毒能与牛病毒性腹泻病毒(BVDV)OregonC24标准阳性血清反应,出现沉淀线;细胞培养物用BVD/MD荧光抗体染色检测,可见到荧光着染的特异性细胞,荧光颗粒出现于胞浆中。双抗体夹心ELISA检测病毒抗原结果BVDVOregonC24VP/N为3.141,分离毒P/N为3.012,P/N>2,与BVDVOregonC24V结果一致;电镜观察到圆形、直径为40～60nm,有囊膜,囊膜表面有突起的病毒粒子,与BVDV颗粒基本一致。经RT-CR检测,扩增出了唯一的315bp的目的条带,进一步证实为牛病毒性腹泻/粘膜病病毒。

多价荧光抗体监测外源病毒污染的研究

用猪瘟病毒（ＨＣＶ）、猪细小病毒（ＰＰＶ）、牛病毒性腹泻／粘膜病病毒（ＢＶＤ／ＭＤＶ）、伪狂犬病病毒（ＰｒＶ）、兰舌病病毒（ＢｔＶ）、羊口疮病毒（ＯＶ）等六种病毒，多次同时或先后强化免疫猪，制取六价高免血清；用狂犬病病毒（ＲＶ）免疫兔，制取ＲＶ单价高免血清。分别用异硫氰酸荧光素（ＦＩＴＣ）标记制成荧光抗体（ＦＡ）。并按二者最佳染色价配制成七价（多价）ＦＡ。由于各病毒在其宿主细胞中复制部位和与宿主细胞相互关系各不相同，在荧光显微镜下，多价ＦＡ对其相应病毒的细胞培养物，能显示出各不相同的荧光特点，而得以检测、鉴定。用相应的多、单价高免血清作抑制染色试验，结果各病毒荧光可被一一抑制，表明了多价ＦＡ具有高度的特异性。对各病毒进行ＦＡ细胞培养物半数感染量（ＦＡ－ＴＣＩＤ５０）与常规ＴＣＩＤ５０或ＬＤ５０测定比较试验，结果前者均高于后者，表明了这种荧光抗体制剂同时具有高度的敏感性。应用多价ＦＡ，对非禽源细胞苗生产中外源病毒的污染进行了中间监测，选用了与强毒荧光无区别的７种感染的细胞作阳性参照，保证了生产单位在使用中的安全，对Ａ、Ｂ二厂生产猪瘟苗有干扰的细胞，进行抽样监测８０批，结果１３批污染ＢＶＤＶ（１６．２５％），１?

猪瘟细胞苗与犊牛血清中BVD/MD抗体的检测

猪瘟兔化牛睾丸细胞苗在生产中,常出现疫苗毒价不达标的问题。其主要的原因是在生产中使用了含BVD/MD抗体的犊牛血清。试验过程中,采用合格的疫苗与标准的BVD/MD抗血清中和,然后再加入标准BVD/MDV,接种BT细胞,结果出现CPE。证实了疫苗中的HCV与BVD/MD抗体发生了结合。故生产前对血清中BVD/MD抗体的检测是不可忽视的。

金丝桃素可溶性粉体外抗犊牛病毒性腹泻-黏膜病病毒的实验研究

为了探讨金丝桃素可溶性粉抗犊牛病毒性腹泻-黏膜病病毒(BVD-MDV)的作用机制,试验过程中采用先给药后接毒、先接毒后给药和同时给药接毒3种不同的途径,分别在72、96、120h观察病毒致牛肾原代细胞(MDBK)的病变(CPE)情况。结果表明,病毒的TCID50为10-6/0.1mL,金丝桃素可溶性粉的TC0为2.5g/L;药物质量浓度在0.3～2.5g/L范围内同时给药和接毒组细胞生长良好,细胞单层完整,视野中未见大量圆细胞或死细胞,而其余2种给药途径细胞病变明显。结果提示,金丝桃素可溶性粉对BVD-MDV有显著的直接杀灭作用。

绵羊感染牛病毒性腹泻-粘膜病病毒的调查研究

应用双抗体夹心ELISA对长春、内蒙等地区的244只绵羊进行了牛病毒性腹泻-粘膜病病毒(BVD—MDV)感染调查.结果,BVD—MDV的阳性感染率为14.6％～83.3％.应用电镜对部分ELISA阳性和阴性样品进行观察,结果7份阳性样品中均见有BVD—MDV粒子,5份阴性样品均未观察到BVD—MDV粒子.定期采取11只自然感染BVD—MD病毒的绵羊粪便进行检查,结果自然感染BVD—MDV的绵羊,排毒持续时间至少为3个月.本试验表明,羊感染BVD—MDV可长时间排毒,是潜在的危险传染源.

双抗体夹心阻断ELISA检测血清中牛病毒性腹泻-粘膜病病毒抗体的研究

本研究建立了检测血清中牛病毒性腹泻-粘膜病(BDV-MD)病毒抗体的双抗体夹心阻断ELISA,并用其检测了长春地区293头奶牛和262头黄牛的血清.结果,奶牛的阳性率为54.9％.黄牛的阳住率为43.5％.本方法是一种敏感、特异、快速的检测抗体方法,可在基层推广应用.

病毒性腹泻-粘膜病病毒实验感染绵羊及其血清中和抗体的消长规律

将6只8月龄公绵羊随机分为2组,分别经肌肉注射和滴鼻两途径,每只羊给予BVD/MDV长春184毒株第14代肾细胞培养毒澄清液20mL。结果,两种途径感染羊皆出现牛粘膜病的类似症状,并产生明显的抗体反应,中和抗体消长规律因接种途径不同而有所差异。感染羊在接种后第2周产生抗体,10～15周抗体滴度达到高峰,在1:160以上至少能持续11～17周。肌注组抗体产生较早,升高较快,持续时间短,至第27周抗体降至1:20。滴鼻组抗体升高较缓慢,持续时间较长,至第27周抗体滴度仍在1:160以上。实验还证明,BVD/MDV长春184毒株及Oregon毒株均能在MDBK、BT及牛睾丸细胞上繁殖,并有明显的细胞病变。