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EB病毒LMP2A和EB病毒BZLF1融合基因反转录病毒表达载体的构建 被引量:3
1
作者 朱伟 徐爱晶 罗兵 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第50期10109-10112,共4页
目的:将LMP2A和BZLF1基因进行融合同时可发挥LMP2A诱导特异性CTL和BZLF1基因诱导潜伏期EBV进入裂解期复制的作用,协同杀伤EBV阳性肿瘤细胞。实验拟构建含EB病毒潜伏膜蛋白2A编码基因和即刻早期基因融合基因的反转录病毒表达载体,并... 目的:将LMP2A和BZLF1基因进行融合同时可发挥LMP2A诱导特异性CTL和BZLF1基因诱导潜伏期EBV进入裂解期复制的作用,协同杀伤EBV阳性肿瘤细胞。实验拟构建含EB病毒潜伏膜蛋白2A编码基因和即刻早期基因融合基因的反转录病毒表达载体,并筛选建立携带该基因的高滴度产毒细胞系。方法:实验于2006—08/2007—08在济宁医学院微生物教研室和青岛大学医学院微生物教研室进行。应用反转录-聚合酶链反应分别获得潜伏膜蛋白2A和即刻早期基因编码序列的cDNA,采用剪接式重叠延伸技术将两段基因通过多肽接头(Gly4Ser)3的DNA序列进行连接.构建融合基因Z2A。将融合基因Z2A定向插入逆转录病毒表达载体pMSCVpuro,形成重组质粒pMSCVpuro-Z2A,脂质体法将pMSCVpuro-Z2A转染反转录病毒包装细胞PT67。嘌呤霉素筛选产毒细胞克隆,扩大培养产毒细胞克隆,收获病毒进行滴度测定,RT-PCR检测产毒PT67细胞目的基因的转录表达。结果:限制性酶切、PCR及测序鉴定证实Z2A正确插入逆转录病毒表达载体,筛选获得了稳定产毒的嘌呤霉素抗性细胞克隆,收获病毒的滴度为7.8×10^6CFU/L,且重组逆转录病毒在PT67细胞能有效转录。结论:携带Z2A基因的重组反转录病毒表达载体pMSCVpuro-Z2A构建成功,转染PT67细胞后包装出重组反转录病毒,进而筛选获得了能转录表达Z2A的产毒细胞系PT67-Z2A。 展开更多
关键词 LMP2A bzlf1 融合基因 逆转录病毒 表达载体
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EBV LMP2A和BZLF1融合基因重组腺病毒表达载体的构建 被引量:2
2
作者 朱伟 王云 罗兵 《青岛大学医学院学报》 CAS 2007年第5期390-393,396,共5页
目的构建EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2A(LMP2A)编码基因和即刻早期基因(BZLF1)融合基因的重组腺病毒表达载体。方法逆转录-聚合酶链反应分别获得LMP2A和BZLF1编码序列的cDNA,采用剪接式重叠延伸(SOE)技术将两段基因通过多肽接头(Gly4Ser)3的... 目的构建EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2A(LMP2A)编码基因和即刻早期基因(BZLF1)融合基因的重组腺病毒表达载体。方法逆转录-聚合酶链反应分别获得LMP2A和BZLF1编码序列的cDNA,采用剪接式重叠延伸(SOE)技术将两段基因通过多肽接头(Gly4Ser)3的DNA序列进行连接,构建融合基因Z2A。将融合基因Z2A定向亚克隆到pAdTrack-CMV质粒上,在原核细胞E.coli BJ5183中完成穿梭质粒与骨架质粒pAdEasy-1的同源重组,构建融合基因Z2A真核表达载体pAd-Z2A。经抗生素培养板筛选重组体,然后转染293细胞,获得复制缺陷型重组腺病毒vAd-Z2A。结果重组腺病毒载体经限制性核酸内切酶酶切,电泳后可观察到长31 kb和4.5 kb两条DNA条带,测序鉴定结果表明序列正确;从感染重组腺病毒vAd-Z2A的293细胞中检测到融合基因Z2A的表达。结论本研究成功地构建了EBV LMP2A和BZLF1融合基因Z2A重组腺病毒表达载体,为进一步研究Z2A的功能提供了实验基础。 展开更多
关键词 疱疹病毒4型 潜伏膜蛋白2A 基因 bzlf1 基因融合 表达载体
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EB病毒感染诱导Akata的c-fos及BZLF1基因的短暂表达 被引量:1
3
作者 温旺荣 李莉 +3 位作者 陈盛亭 林晓丹 吴勇 曹燕 《分子诊断与治疗杂志》 2009年第2期91-94,共4页
目的研究EB病毒感染对EB病毒阴性的Burkitt’s淋巴瘤细胞株Akata的B细胞早早期癌前基因c-fos及病毒激活的关键转录因子BZLF1的表达的影响。方法应用EB病毒(来源于EB病毒阳性Akata∕GFP.EBV.c18)感染EB病毒阴性的Burkitt’s淋巴瘤细胞株A... 目的研究EB病毒感染对EB病毒阴性的Burkitt’s淋巴瘤细胞株Akata的B细胞早早期癌前基因c-fos及病毒激活的关键转录因子BZLF1的表达的影响。方法应用EB病毒(来源于EB病毒阳性Akata∕GFP.EBV.c18)感染EB病毒阴性的Burkitt’s淋巴瘤细胞株Akata,使用RT-PCR和蛋白质印迹技术分别检测EB病毒感染不同时间后细胞c-fos和EB病毒的BZLF1的表达。结果EB病毒感染Akata后30min到3h期间c-fos的表达明显增加,随后恢复正常;EB病毒感染后1.5h到48h的BZLF1的短暂表达,随后消失;而且EB病毒感染后6h到12hBZLF1蛋白也有短暂表达,随后消失。结论EB病毒感染能诱导Akata的B细胞c-fos及随后的BZLF1的短暂表达。 展开更多
关键词 EB病毒 Burkitt’s淋巴瘤 C-FOS bzlf1 Akata细胞
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重叠延伸PCR法扩增EB病毒BZLF1N-BLRF2融合基因及生物信息学分析
4
作者 张毅 周淑艳 +2 位作者 陈锐 孙业红 李体远 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期173-178,共6页
利用重叠延伸PCR技术扩增EB病毒BZLF1N-BLRF2融合基因,构建原核表达载体pGEX-4T-1-BZLF1N-BLRF2,并进行了蛋白的诱导表达。通过序列测定和ORF软件分析,该融合基因含有1个1 005 bp的ORF,编码335个氨基酸。应用生物信息学方法,对该融合基... 利用重叠延伸PCR技术扩增EB病毒BZLF1N-BLRF2融合基因,构建原核表达载体pGEX-4T-1-BZLF1N-BLRF2,并进行了蛋白的诱导表达。通过序列测定和ORF软件分析,该融合基因含有1个1 005 bp的ORF,编码335个氨基酸。应用生物信息学方法,对该融合基因编码的蛋白ZtaN-p23从氨基酸组成、理化性质、信号肽、疏水性/亲水性、二级结构、亚细胞定位、功能域和高级结构等方面进行了预测和分析。结果表明,该蛋白的预测分子量为46.2 kD,理论等电点约为8.97,是亲水性蛋白,推测它定位于细胞质中。序列分析表明,该蛋白可能具有信号转导、转录调控、免疫应答等功能。预测的二级结构及三级结构都表明该蛋白含有较多的不规则卷曲和α-螺旋,三级结构上呈对称形状。 展开更多
关键词 重叠延伸 PCR EB病毒 bzlf1N基因 BLRF2基因 生物信息学
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EBV裂解期蛋白BZLF1和BILF1抑制Raji细胞主要组织相容性复合体的表达
5
作者 郑洪玲 郭庆伟 +3 位作者 张伟 张艳 何兴波 叶冰 《基础医学与临床》 2023年第4期621-625,共5页
目的探讨EB病毒(EBV)裂解期蛋白BZLF1和BILF1是否能够抑制人B淋巴瘤细胞系Raji细胞主要组织相容性复合体(MHC)的表达。方法用佛波酯(TPA)和丁酸钠(NaB)诱导Raji细胞促使EBV激活进入裂解期,用Western bolt检测EBV裂解期的标志物BZLF1蛋... 目的探讨EB病毒(EBV)裂解期蛋白BZLF1和BILF1是否能够抑制人B淋巴瘤细胞系Raji细胞主要组织相容性复合体(MHC)的表达。方法用佛波酯(TPA)和丁酸钠(NaB)诱导Raji细胞促使EBV激活进入裂解期,用Western bolt检测EBV裂解期的标志物BZLF1蛋白的表达;RT-qPCR检测EBV进入裂解期后BZLF1和BILF1基因的表达;流式细胞测量术检测Raji细胞MHCⅡ类分子和MHCⅠ类分子的表达。电穿孔转染质粒过表达BZLF1和BILF1蛋白及siRNA技术敲低BZLF1和BILF1蛋白表达后,分别用流式细胞术及Western bolt检测Raji细胞MHCⅡ类分子和MHCⅠ类分子的表达。结果TPA/NaB能够诱导EBV激活进入裂解期,EBV进入裂解期后BZLF1和BILF1基因过表达。EBV进入裂解期以及过表达BZLF1和BILF1后,MHCⅡ类分子和MHCⅠ类分子表达均明显降低(P<0.05);特异性siRNA可以阻断BZLF1和BILF1对Raji细胞MHCⅡ类分子和MHCⅠ类分子的抑制作用(P<0.05)。结论EBV裂解期蛋白BZLF1和BILF1能够抑制Raji细胞MHC分子的表达。 展开更多
关键词 bzlf1 BILF1 主要组织相容性复合体Ⅱ 主要组织相容性复合体Ⅰ
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EBV-BZLF1通过激活PI3K/AKT信号通路促进胃癌细胞生长 被引量:5
6
作者 杨菁 李北芳 +3 位作者 张朦琦 李艳艳 章程 高静 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期159-163,共5页
目的:明确EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)BZLF1基因(EBV-BZLF1)对EB的分子机制。方法:运用过表达BZLF1的慢病毒感染胃癌细胞系AGS和HGC27,分别采用CCK8、细胞凋亡检测、细胞迁移和侵袭实验及Western blot法检测细胞的增殖能力、细胞凋... 目的:明确EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)BZLF1基因(EBV-BZLF1)对EB的分子机制。方法:运用过表达BZLF1的慢病毒感染胃癌细胞系AGS和HGC27,分别采用CCK8、细胞凋亡检测、细胞迁移和侵袭实验及Western blot法检测细胞的增殖能力、细胞凋亡与迁移侵袭能力及细胞信号通路变化情况。将过表达BZLF1的胃癌细胞HGC27注射于非肥胖糖尿病/重症联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠背部皮下构建移植瘤模型,观察BZLF1对肿瘤生长的影响。结果:过表达BZLF1的慢病毒感染组AGS-BZLF1与HGC27-BZLF1相比亲本细胞,细胞中BZLF1蛋白表达明显上调;体外细胞增殖与小鼠体内成瘤能力均显著增强(P<0.05);细胞凋亡受到BZLF1蛋白的抑制,其中AGS-BZLF1和HGC27-BZLF1凋亡率为(2.40±0.14)%和(3.90±0.14)%,显著低于AGS和HGC细胞的(5.75±0.35)%和(9.70±0.42)%(P<0.05);但细胞迁移和侵袭能力无明显改变。深入分子机制研究发现,BZLF1表达上调后,PI3K/AKT信号通路明显激活,表现为pAKT和pS6蛋白表达上调。使用BEZ235抑制剂阻断PI3K/AKT信号通路后,HGC27-BZLF1和AGS-BZLF1细胞的生长均受到抑制。结论:EBV-BZLF1可通过激活PI3K/AKT信号通路促进胃癌细胞生长,靶向PI3K/AKT通路抑制剂或可成为EBV阳性胃癌的治疗选择。 展开更多
关键词 EBV阳性胃癌 bzlf1 PI3K/AKT通路
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BZLF1激活潜伏状态EB病毒分子机制的研究进展
7
作者 曾亮 《国外医学(微生物学分册)》 2002年第3期8-9,13,共3页
EB病毒基因组中BZLF1基因及其蛋白产物在潜伏状态EB病毒再活化过程中起主要作用,本文就BZLF1激活潜伏状态EB病毒分子机制的研究进展作一介绍。
关键词 bzlf1激活潜伏状态 EB病毒 分子机制 研究进展
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EBV立即早期基因-BRLF1和BZLF1的研究进展 被引量:1
8
作者 任军 周玲 曾毅 《国外医学(病毒学分册)》 2005年第4期125-128,共4页
BRLF1和BZLF1是EBV基因组中位置相邻的两个立即早期基因。它们的蛋白表达产物Rta和Zta作为反式激活因子,可以调节EBV早期/晚期基因的表达,还可能参与病毒基因组的复制。它们与EBV感染由潜伏周期向裂解周期的转换密切相关。不同的细胞环... BRLF1和BZLF1是EBV基因组中位置相邻的两个立即早期基因。它们的蛋白表达产物Rta和Zta作为反式激活因子,可以调节EBV早期/晚期基因的表达,还可能参与病毒基因组的复制。它们与EBV感染由潜伏周期向裂解周期的转换密切相关。不同的细胞环境可能对它们的转录产生影响。Rta和Zta都包含CTL识别的表位,可能在病毒裂解周期的早期成为免疫系统识别的位点。对它们的研究还为某些EBV相关肿瘤的筛查和治疗提供了线索。这两个基因对EBV再激活的作用倍受关注。本文主要对BRLF1和BZLF1的基因结构和功能做一综述。Epstein-Barr病毒(EBV)是疱疹病毒科γ亚科成员,世界人口的90%感染此病毒。EBV可引起传染性单核细胞增多症,与Burkitt’s淋巴瘤、鼻咽癌的发生密切相关。EBV有潜伏周期和裂解周期两种状态。EBV进入细胞后,通常很快进入潜伏期,病毒基因组环化成游离体(episome)并以此形式持续存在于细胞内。但病毒在少数感染细胞中可以进入增殖期,并产生病毒颗粒。研究表明,BZLF1和BRLF1两个基因在病毒由潜伏周期向裂解周期转变的过程中起重要作用。 展开更多
关键词 EBV BRLF1 bzlf1 研究进展 病毒裂解周期 病毒基因组
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Identification of N-acetylglucosaminyltranferase-IV as a modifier of Epstein-Barr virus BZLF1 activity
9
作者 Amy L. Adamson 《Open Journal of Genetics》 2013年第1期1-5,共5页
Epstein-Barr virus is a prevalent human herpesvirus, with about 95% of the world’s adult population positive for anti-EBV antigen antibodies. After the initial infection and production of new virus particles, the vir... Epstein-Barr virus is a prevalent human herpesvirus, with about 95% of the world’s adult population positive for anti-EBV antigen antibodies. After the initial infection and production of new virus particles, the virus may enter a latent state within a subset of cells, and therefore can remain within the host indefinitely. Epstein-Barr virus contributes to a variety of diseases, including many types of cancers. We have created a model system in Drosophila melanogaster to study the effect of expression of the Epstein-Barr virus protein BZLF1, and to identify cellular proteins that mediate BZLF1 activity. Here we present the results of a genetic screen that determined that the Drosophila melanogaster CG9384 gene (an N-acetylglucosaminyl-transferase) is a significant modulator of BZLF1 activity and EBV early lytic replication. 展开更多
关键词 EPSTEIN-BARR VIRUS bzlf1 DROSOPHILA CG9384 Gnt-IVb
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北京地区近5年来儿童EB病毒感染疾病中BZLF1及其启动区Zp基因特征分析 被引量:1
10
作者 刘亚丽 艾军红 +3 位作者 闫静 关晓蕾 刘春艳 谢正德 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期6-12,共7页
为了解儿童原发性Epstein-Barr病毒(Epstein-Barr virus,EBV)感染流行株BZLF1基因及其启动区Zp的基因特征。本文对北京儿童医院2006年至2011年收治的EBV感染传染性单核细胞增多症(EBV-associated infectious mononucleosis,EBV-IM)134例... 为了解儿童原发性Epstein-Barr病毒(Epstein-Barr virus,EBV)感染流行株BZLF1基因及其启动区Zp的基因特征。本文对北京儿童医院2006年至2011年收治的EBV感染传染性单核细胞增多症(EBV-associated infectious mononucleosis,EBV-IM)134例和EBV相关噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(EBV-associated hemophagocytic lymphohistiocytosis,EBV-HLH)32例患儿的外周血来源的DNA进行了EBNA3C、BZLF1和Zp基因片段的扩增分析。根据EBNA3C基因片段扩增产物的大小进行EBV-Ⅰ/Ⅱ分型,对BZLF1和Zp基因扩增产物进行直接序列测定,并用BioEdit 7.0.9进行序列分析。实验显示①儿童EBV感染流行株以EBV-I型为主,占97.2%(140/144),EBV-Ⅱ型为2.8%(4/144);②共检测出3种BZLF1基因型,12种亚型(包括6种新发现的亚型)。BZLF1-A型和BZLF1-B型两基因型在两种疾病中的分布无统计学差异(P=0.083)。BZLF1-A1是儿童EBV感染性疾病中的常见基因型。BZLF1-A型第一内含子以3个29bp重复序列为主,而B型以30bp重复序列为主(P=0.000),且重复序列的个数波动于1-13个不等;③共检测出Zp-P、Zp-V3、Zp-V4、Zp-V1四种Zp基因型,并且这四种基因型在EBV-IM和EBV-HLH两种疾病中的检出率无统计学差异(p值分别为0.272、0.252、1.0、1.0);④BZLF1和Zp基因连锁分析显示,BZLF1-A1基因型毒株的Zp基因分型以Zp-V3为主(P=0.000),而BZLF1-B4基因型以Zp-P型为主(P=0.000)。EBV-Ⅰ+BZLF1-A1与Zp分型中Zp-V3高度连锁(P=0.000);EBV-Ⅰ+BZLF1-B4与Zp-P高度连锁(P=0.000)。结果证实:①BZLF1-A1是儿童EBV感染的常见基因型。BZLF1-A型其第一内含子重复序列以29bp为主,而BZLF1-B型则以30bp的重复序列为主。②Zp-P和Zp-V3是儿童EBV感染的常见Zp基因型,二者检出率相似。③BZLF1-A1型的Zp分型以Zp-V3为主,而BZFL1-B4型则以Zp-P分型为主。EBV-Ⅰ+BZLF1-A1与Zp分型中Zp-V3高度连锁,而EBV-Ⅰ+BZLF1-B4与Zp-P高度连锁。 展开更多
关键词 Epstein—Barr病毒 bzlf1基因 Zp基因 儿童
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EBV即刻早期基因BZLF1腺病毒表达载体的构建及初步应用 被引量:1
11
作者 孙淑红 王云 +3 位作者 王笑峰 孙坚萍 朱伟 罗兵 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期555-559,共5页
目的构建EBV即刻早期基因BZLF1的重组腺病毒表达载体,探讨其表达诱导潜伏状态EBV进入裂解期增殖的作用。方法采用AdEasy系统构建携带BZLF1的重组腺病毒载体pAd- BZ,脂质体法转染人胚肾293细胞,包装产生重组腺病毒vAd-BZ。vAd-BZ感染EBV... 目的构建EBV即刻早期基因BZLF1的重组腺病毒表达载体,探讨其表达诱导潜伏状态EBV进入裂解期增殖的作用。方法采用AdEasy系统构建携带BZLF1的重组腺病毒载体pAd- BZ,脂质体法转染人胚肾293细胞,包装产生重组腺病毒vAd-BZ。vAd-BZ感染EBV阳性细胞NEC后,采用RT-PCR、Western blot、流式细胞术和MTT等方法检测目的基因表达,以及目的基因表达对EBV阳性细胞的影响。结果PCR、序列测定以及限制性酶切证实BZLF1基因正确插入穿梭质粒,并与病毒骨架质粒pAdEasy-1重组,重组腺病毒表达载体构建成功。经293细胞包装获得具有稳定感染性的重组腺病毒vAd-BZ,感染重组腺病毒的NEC靶细胞可以检测到BZLF1基因的表达,进而诱导EBV从潜伏期进入裂解期。结论重组腺病毒vAd-BZ可有效感染EBV阳性细胞NEC,诱导潜伏状态的EBV活化,进而特异性杀伤EBV阳性肿瘤细胞。 展开更多
关键词 bzlf1 腺病毒载体 EBV 即刻早期基因
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GM-CSF与BZLF1融合基因重组BCG抗肿瘤研究 被引量:2
12
作者 薛庆节 杨春青 +4 位作者 胡文洁 吕厚东 陈廷 司传平 李士根 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第7期603-605,共3页
目的对已融合的人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因(GM-CSF)与EB病毒即刻早期基因(BZLF1)进行抗肿瘤活性及免疫学研究。方法建立C57BL/6小鼠肿瘤模型,rBCG注射免疫后采用ELISA检测其特异性抗体,用乳酸脱氢酶法检测特异性CTL,HE染色检测... 目的对已融合的人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因(GM-CSF)与EB病毒即刻早期基因(BZLF1)进行抗肿瘤活性及免疫学研究。方法建立C57BL/6小鼠肿瘤模型,rBCG注射免疫后采用ELISA检测其特异性抗体,用乳酸脱氢酶法检测特异性CTL,HE染色检测肿瘤组织中的淋巴细胞浸润情况。并对各试验组小鼠成瘤时间、肿瘤大小进行分析,采用t检验方法对重组BCG抗肿瘤效果进行初步分析和评价。结果 rBCG免疫小鼠肿瘤成瘤时间延迟,最迟长达11.9d;肿瘤生长缓慢,生存时间显著延长,平均抑瘤率为82%;rBCG刺激小鼠产生特异性GM-CSF和BZLF1抗体,特异性CTL活性增强;当效靶比(E/T)为40∶1时,CTL杀伤率为(37.25士5.09)%;HE染色镜检肿瘤组织中淋巴细胞浸润。结论重组BCG免疫小鼠能诱导产生特异性体液免疫和细胞免疫,可抑制EB病毒阳性肿瘤细胞生长。 展开更多
关键词 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因 即刻早期基因 重组卡介苗 抗肿瘤
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人IL-2与EB病毒BZLF1融合基因重组BCG的构建及免疫学研究
13
作者 于美美 崔晏硕 +3 位作者 邵为林 密田 陈廷 薛庆节 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2022年第1期37-42,共6页
目的构建人IL-2与EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)基因BZLF1的融合基因重组BCG(recombinant BCG,rBCG),并分析其免疫效果。方法通过重叠延伸技术,构建融合基因ILBZ,将ILBZ与穿梭表达载体pMV261连接并转化至BCG中进行表达。注射rBCG至C57... 目的构建人IL-2与EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)基因BZLF1的融合基因重组BCG(recombinant BCG,rBCG),并分析其免疫效果。方法通过重叠延伸技术,构建融合基因ILBZ,将ILBZ与穿梭表达载体pMV261连接并转化至BCG中进行表达。注射rBCG至C57BL/6J小鼠体内,通过流式细胞术检测和CTL检测分析其免疫反应;注射rBCG至构建的人源性EBV阳性肿瘤的BALB/c-nu裸鼠中,观察rBCG对肿瘤的治疗效果。结果重叠延伸PCR获得的融合基因ILBZ为1248bp;Western blot检测rBCG表达的融合蛋白能被IL-2抗体和ZEBRA抗体识别,大小约55ku;动物免疫试验显示,注射rBCG的小鼠CD4^(+)T细胞和CD8^(+)T细胞百分率分别为45.1%和32.3%,高于BCG(28.5%和24.0%)及PBS的百分率(21.3%和18.1%)(P<0.05);动物治疗实验显示,注射rBCG治疗的裸鼠NK细胞占2.99%,高于BCG(NK细胞为1.89%)和PBS(NK细胞为0.68%)(P<0.05);rBCG注射2周,EBV阳性小鼠肿瘤体积和重量明显小于对照组。结论成功构建rBCG并表达出稳定的融合蛋白,且rBCG能刺激小鼠产生免疫反应,具有抗肿瘤作用。 展开更多
关键词 IL-2 bzlf1 亚单位疫苗 EB病毒阳性肿瘤
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EB病毒BZLF1基因表位疫苗的预测及构建
14
作者 丁一 李昆芳 +1 位作者 薛庆节 屈艳琳 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2023年第1期12-18,共7页
目的 采用生物信息学方法预测EB病毒BZLF1基因编码蛋白的结构、抗原表位及疫苗的初步构建,为EB病毒相关疾病的疫苗的研制提供依据。方法 通过NCBI获得EB病毒BZLF1蛋白的核苷酸序列和氨基酸序列,采用ORF Finder、Protparam、SOPMA、DTU H... 目的 采用生物信息学方法预测EB病毒BZLF1基因编码蛋白的结构、抗原表位及疫苗的初步构建,为EB病毒相关疾病的疫苗的研制提供依据。方法 通过NCBI获得EB病毒BZLF1蛋白的核苷酸序列和氨基酸序列,采用ORF Finder、Protparam、SOPMA、DTU Health Tech、TMHMM-2.0、Cell-PLoc 2.0、NetPhos 3.1 Servera、NetNGlyc、SWISS MODE、Immunomedicine Group、IEDB、BLAST、Uniprot等生物信息学软件对EB病毒BZLF1蛋白的理化性质、亲疏水性、结构域、信号肽、跨膜区、亚细胞定位、磷酸化及糖基化位点、二级结构、三级结构、抗原决定簇、B细胞与T细胞抗原表位、蛋白同源性及相互作用蛋白进行预测分析。在T4DNA连接酶作用下连接BZLF1基因与穿梭表达载体pMV261,对连接产物进行PCR及双酶切鉴定。结果 BZLF1蛋白是由245个氨基酸组成的亲水蛋白,分子式为C_(1185)H_(1850)N_(332)O_(366)S_(8),相对分子质量为26.860×10^(3),理论等电点为5.25,脂肪族氨基酸指数为71.35,平均亲水系数为-0.529;该蛋白二级结构以无规则卷曲居多,占51.84%,无信号肽和跨膜区,存在18个磷酸化位点,2个糖基化位点,含有1个碱性亮氨酸拉链结构。预测该蛋白有9个抗原决定簇,8个B细胞优势抗原表位,9个CTL细胞优势表位,8个Th细胞表位,与人类环状amp反应元件结合蛋白相似度为6.12%,同源性较低。PCR及双酶切鉴定含BZLF1基因的pMV261载体构建正确。结论 生物信息学预测BZLF1属于亲水蛋白,热稳定性较好。该蛋白含有多个磷酸化位点可参与相关信号通路,对疾病的发展起到重要作用。BZLF1含有多个B、T细胞抗原表位,且与人体蛋白同源性低,不易发生免疫交叉反应,可作为EB病毒候选疫苗表位。 展开更多
关键词 EB病毒 bzlf1 生物信息学 抗原表位
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EB病毒融合蛋白ZtaN-p23在大肠杆菌中的表达、纯化及活性鉴定 被引量:5
15
作者 张毅 周淑艳 +4 位作者 孙业红 涂惠英 秦晓林 陈锐 李体远 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期120-123,共4页
目的:克隆EB病毒立即早期蛋白ZtaN和衣壳蛋白p23,构建原核表达载体,并在大肠杆菌中表达融合蛋白,为后续利用蛋白进行疾病诊断奠定基础。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从B95-8细胞中分别扩增出目的基因BZLF1N和BLRF2,利用融合... 目的:克隆EB病毒立即早期蛋白ZtaN和衣壳蛋白p23,构建原核表达载体,并在大肠杆菌中表达融合蛋白,为后续利用蛋白进行疾病诊断奠定基础。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从B95-8细胞中分别扩增出目的基因BZLF1N和BLRF2,利用融合PCR法将两个基因进行连接,构建重组质粒pGEX-4T-1-BZLF1N-BLRF2,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。加入IPTG诱导表达融合蛋白ZtaN-p23,通过SDS-PAGE和Western blot确定蛋白表达量及活性鉴定。结果:重组质粒pGEX-4T-1-BZLF1N-BLRF2经双酶切鉴定和序列分析正确,证实已成功构建原核表达载体;SDS-PAGE显示诱导的蛋白Mr约46 000,与预期值一致;对融合蛋白表达条件进行优化后,发现其主要以包涵体的形式存在于细胞中;亲和层析结果显示纯化后的ZtaN-p23纯度>95%;Westernblot显示ZtaN-p23具有良好的生物活性。结论:成功构建原核表达载体pGEX-4T-1-BZLF1N-BLRF2,并在大肠杆菌中进行了表达纯化,融合蛋白显示出良好的活性。 展开更多
关键词 EB病毒 bzlf1N基因 BLRF2基因 表达 纯化
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EB病毒融合基因重组腺病毒表达载体的构建
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作者 朱伟 山长武 +1 位作者 陈廷 罗兵 《济宁医学院学报》 2007年第1期29-32,共4页
目的构建EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2A(LMP2A)编码基因和即刻早期基因(BZLF1)融合基因的重组腺病毒表达载体。方法逆转录-聚合酶链反应分别获得LMP2A和BZLF1编码序列的cD-NA,采用剪接式重叠延伸(spliced overlap exetension,SOE)技术将两段... 目的构建EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白2A(LMP2A)编码基因和即刻早期基因(BZLF1)融合基因的重组腺病毒表达载体。方法逆转录-聚合酶链反应分别获得LMP2A和BZLF1编码序列的cD-NA,采用剪接式重叠延伸(spliced overlap exetension,SOE)技术将两段基因通过多肽接头(Gly4Ser)3的DNA序列进行连接,构建融合基因Z2A。将融合基因Z2A定向亚克隆到pAdTrack-CMV质粒上,在原核细胞E.coli BJ5183中完成穿梭质粒与骨架质粒pAdEasy-1的同源重组,构建融合基因Z2A真核表达载体pAd-Z2A。经抗生素培养板筛选重组体,然后转染293细胞,获得复制缺陷型重组腺病毒vAd-Z2A。结果重组腺病毒载体经限制性核酸内切酶酶切,电泳后可观察到长31kb和4.5kb两条DNA条带,测序鉴定结果表明序列正确;从感染重组腺病毒vAd-Z2A的293细胞中检测到融合基因Z2A的表达。结论本研究成功地构建了EBV LMP2A和BZLF1融合基因Z2A重组腺病毒表达载体,为进一步研究Z2A的功能提供了实验基础。 展开更多
关键词 LMP2A bzlf1 融合基因 腺病毒 表达载体
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EBV融合基因Z2A腺病毒的制备及其在诱导EBV阳性细胞凋亡的应用
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作者 王森 赵毅 +6 位作者 康海仙 丁伟斌 姚运红 胡新荣 王云 罗兵 朱伟 《现代生物医学进展》 CAS 2014年第13期2426-2429,共4页
目的:构建EB病毒基因LMP2A及BZLF1的融合基因(Z2A)重组腺病毒表达载体,探讨Z2A融合蛋白对EBV+细胞凋亡的作用。方法:利用AdEasy系统构建重组腺病毒载体pAd-Z2A,而后将之转染293细胞(人胚肾细胞)产生重组腺病毒rAd-Z2A。后者用于感染EBV... 目的:构建EB病毒基因LMP2A及BZLF1的融合基因(Z2A)重组腺病毒表达载体,探讨Z2A融合蛋白对EBV+细胞凋亡的作用。方法:利用AdEasy系统构建重组腺病毒载体pAd-Z2A,而后将之转染293细胞(人胚肾细胞)产生重组腺病毒rAd-Z2A。后者用于感染EBV阳性及阴性细胞,RT-PCR、Western-blotting检测Z2A的mRNA和蛋白表达,以及流式细胞术检测其对EBV阳性细胞凋亡的调控。结果:序列测定和酶切实验均证实,Z2A融合基因正确插入穿梭质粒,并成功获得重组腺病毒表达载体pAd-Z2A及重组腺病毒rAd-Z2A。感染rAd-Z2A的NEC靶细胞检测到Z2A的表达。流式细胞术检测发现,与EBV-细胞组及EBV+空白质粒转染组相比,接种rAd-Z2A的EBV+细胞组48h(P<0.05)凋亡细胞显著增多,72h时细胞近乎全部凋亡(P<0.01)。结论:重组腺病毒rAd-Z2A可有效感染EBV+及EBV-细胞,从而显著促进EBV+细胞凋亡而不影响EBV-细胞,为进一步特异性靶向EBV+肿瘤的基因治疗奠定基础。 展开更多
关键词 LMP2A bzlf1 融合基因 腺病毒载体 EBV
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EB病毒BZLFl基因和启动区Zp的多态性及其相关研究进展
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作者 刘亚丽 谢正德 《国际流行病学传染病学杂志》 CAS 2012年第3期208-211,共4页
Epstein-Barr病毒(EBV)属于疱疹病毒科γ亚科,为线性双链DNA病毒。BZLF1基因的表达产物Zta在病毒裂解感染级联反应的启动和维持中起了至关重要的作用。BZLF1基因的启动子Zp调节着BZLF1的表达。近年来,基因BZLF1及其启动子Zp区域的... Epstein-Barr病毒(EBV)属于疱疹病毒科γ亚科,为线性双链DNA病毒。BZLF1基因的表达产物Zta在病毒裂解感染级联反应的启动和维持中起了至关重要的作用。BZLF1基因的启动子Zp调节着BZLF1的表达。近年来,基因BZLF1及其启动子Zp区域的多态性成为研究的热点,此文对BZLF1基因及其启动区Zp的多态性的研究进展进行了综述。 展开更多
关键词 病毒 bzlf1基因 基因多态性
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