百日咳毒素联合卡介苗诱导CD-1小鼠抑郁症模型研究

为了构建具备良好的治疗性干预时间窗的新型抑郁症动物模型,本研究基于抑郁症发病的炎症假说,选用血脑屏障通透剂——百日咳毒素,联合低剂量免疫激活剂——卡介苗(牛结核分枝杆菌)对CD-1小鼠造模。实验发现,与单独低剂量卡介苗诱导相比,百日咳毒素联合低剂量卡介苗诱导可以增强小鼠的抑郁样行为,如行为绝望状态增加(悬尾实验中一动不动时间)、探索性行为降低(开场实验中的区域穿梭次数和抬头直立次数)、自发运动状态降低(开场实验总运动距离)等,促进小鼠中枢神经炎症和外周炎症(IL-1β、IL-6、IFN-γ等);同时,加剧脑中色氨酸-犬尿氨酸通路的激活,表现为其关键酶——吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)进一步显著升高。经口给予抗抑郁药丙咪嗪,可缓解百日咳毒素联合低剂量卡介苗诱导的小鼠抑郁样症状、炎症反应和激活的色氨酸-犬尿氨酸通路。另外,发现百日咳毒素联合低剂量卡介苗诱导的小鼠抑郁样症状可以从第7天至少持续到第28天。综上,本研究基于百日咳毒素和低剂量卡介苗构建的小鼠抑郁模型具有较好的表面效度、结构效度和预测效度,其长期持续性的抑郁表型可为抗抑郁疗法研究提供宝贵的治疗性干预时间窗。

哮喘小鼠肺组织中趋化因子干扰素-γ诱导蛋白-10、干扰素-γ诱导单核细胞因子表达及其意义

目的:探讨趋化因子干扰素-γ诱导蛋白-10(IP-10)、干扰素-γ诱导单核细胞因子(Mig)在哮喘小鼠肺组织中的表达及其意义,观察地塞米松(DX)、卡介苗(BCG)干预对哮喘小鼠表达IP-10、Mig的影响。方法:健康雄性昆明小鼠40只,分为哮喘组、DX组、BCG组和对照组,每组10只。哮喘组分别于实验第1、3、5、7、9、11、13天腹腔注射卵清蛋白(OVA)10μg致敏,第21天起予1%OVA5 ml雾化吸入30 min,每天1次,连续7天,激发哮喘。DX组在雾化吸入前30 min,按2 mg/kg腹腔注射DX溶液。BCG组在致敏前7、3、1天分别皮内注射BCG 0.025 mg。对照组用生理盐水代替OVA。各组小鼠于末次雾化吸入24 h后,制备肺组织标本,免疫组化法检测肺组织中IP-10、Mig表达。结果:哮喘组IP-10表达较对照组明显增加(P<0.01),DX组明显降低(P<0.05),BCG组IP-10表达有下降,但差异均无统计学意义(P>0.05)。哮喘组Mig表达较对照组明显降低(P<0.01),DX组和BCG组增加(P<0.05)。结论:在哮喘小鼠肺组织中,IP-10表达增加,Mig表达降低;DX可以下调IP-10、上调Mig的表达;BCG上调Mig的表达,但对IP-10作用不明显。趋化因子IP-10、Mig参与哮喘发病过程,DX与BCG可不同程度干预IP-10、Mig的表达。

重组卡介苗rBCG-Ag85A-ESAT-6对人巨噬细胞免疫刺激活性的影响

目的探究重组卡介苗(rBCG-Ag85A-ESAT-6,rBCG-AE)对人巨噬细胞免疫刺激活性的影响,为该疫苗的应用提供重要的理论依据和实验基础。方法将rBCG-AE(rBCG-AE感染组)及卡介苗(BCG感染组)分别感染体外培养的受PMA诱导分化的人单核细胞系(THP-1细胞株),分别于感染后24、48及72h,观察细胞表面分子CD80和CD86的表达及细胞培养基中干扰素(IFN)-γ及肿瘤坏死因子(TNF)-a的诱生量。结果 THP-1细胞(未受PMA诱导分化的细胞)和PMA分化的THP-1细胞培养4h后,细菌吞噬率分别为(8.45±1.54)%、(91.26±2.13)%,后者显著高于前者(P=0.01);感染后24、48及72h,rBCG-AE组CD86阳性细胞比率分别为(32.84±7.13)%、(48.42±5.46)%、(39.48±5.67)%,CD80阳性细胞比率分别为(20.28±1.13)%、(23.67±1.23)%、(23.19±1.58)%,均显著高于BCG感染组的CD86[分别为(28.17±5.26)%、(40.09±7.21)%、(31.26±6.85)%]和CD80阳性细胞比率[分别为(22.15±1.82)%、(23.27±1.91)%、(22.68±0.87)%],差异均有统计学意义(均P<0.01)。感染后24、48及72h,rBCG-AE组IFN-γ诱生量分别为(1 986±156)pg/mL、(4 687±168)pg/mL、(3 238±97)pg/mL,TNF-а诱生量分别为(1 153±48)pg/mL、(5 864±97)pg/mL、(4 129±68)pg/mL,各时间点均显著高于BCG感染组的IFN-γ[分别为(1 245±32)pg/mL、(3 067±143)pg/mL、(2 879±186)pg/mL]和TNF-а诱生量[分别为(486±18)pg/mL、(3 237±86)pg/mL、(1 068±74)pg/mL],差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论 rBCG-AE可显著增强人巨噬细胞免疫刺激活性,该疫苗可作为替代BCG的候选疫苗,具有进一步开发研究的价值。

注射卡介苗素对接种乙型肝炎疫苗无、弱应答婴儿血IL-10、IL-12的影响

目的:探讨注射卡介苗素对接种乙型肝炎疫苗后无、弱应答婴儿血清IL-12和IL-10表达的作用。方法:放免法定量检测按0、1、6方案(每次10μg)标准全程接种重组乙型肝炎疫苗后婴儿表面抗体(Anti-HBs)的几何平均滴度(geometric meantiter,GMT),筛选无或弱应答者(GMT<100UL)60例,随机分为两组各30例进行疫苗复种,其中一组同时肌内注射卡介苗素。用ELISA法检测复种前后血清中IL-12、IL-10的浓度。结果:注射卡介苗素能诱导无、弱应答婴儿产生较高水平的IL-12、IL-10,并呈疗程依赖性,卡介苗注射组的抗体应答水平较对照组高,两者差异有统计学意义。结论:卡介苗素能有效诱导无、弱应答婴儿机体产生细胞因子IL-12、IL-10,为卡介苗素有望作为一种较好的乙肝疫苗佐剂提供了实验基础。

播散性卡介菌病1例

卡介苗是一种预防结核病的减毒活疫苗,健康新生儿出生时即予以接种。轻度不良反应为接种2~3 d后,接种部位皮肤发红,触之无硬结,数日后自行消退。播散性卡介菌病是最严重的不良反应,临床表现主要为接种部位红肿、破溃和溢脓,全身多发性淋巴结肿大、皮肤包块形成和肺部病变,也可累及肝脏、脾脏和骨骼。该病致死率高,早期诊断及治疗方法的选择仍是难题。现就我科诊治的1例临床诊断的播散性卡介菌病诊治过程及相关文献复习总结如下,以期为相应专业的临床医师提供一定帮助。

结核病疫苗研究进展及挑战

卡介苗是目前唯一应用于预防人类结核病的疫苗,但其保护效果备受争议,研究新型高效的结核病疫苗尤为重要。从安全性、经济成本及保护效果等方面考虑,多阶段抗原亚单位疫苗或多表位疫苗具有较好的应用前景。随着对结核分枝杆菌致病机制的深入了解以及疫苗研发技术的不断更新,结核病疫苗会有重大突破。本文论述结核病疫苗的类型及其特性,并针对结核病新型疫苗研究中抗原选择、动物模型选择、疫苗效果评价指标及人群特异性存在的问题和挑战进行讨论,旨在为新型结核病疫苗的研究提供参考。

福建叶下珠抗小鼠免疫性肝损伤的实验研究

目的评价福建叶下珠对小鼠免疫性肝损伤的保护作用。方法48只NIH小鼠随机分为叶下珠高、低剂量组、联苯双酯组、正常对照组及模型组。于造模之日起,叶下珠高、低剂量组分别以20 g/kg、10 g/kg叶下珠药液灌胃,联苯双酯组以0.15 g/kg联苯双酯药液灌胃,正常对照组及模型组每天给予等量生理盐水。每天灌胃1次,连用12 d。检测血清谷丙转氨酶(ALT)和肝、脾脏器指数,并做肝脏病理学检查。结果联苯双酯组、叶下珠高、低剂量组小鼠血清ALT、肝指数、脾指数值较模型组有不同程度的改善(P<0.05,P<0.01)。炎症坏死程度:5组间比较,差异有非常显著性意义(P<0.005);模型组与正常组、联苯双酯组、福建叶下珠高、低剂量组与模型组间两两比较,差异有显著性意义(P值均<0.05);联苯双酯组与福建叶下珠大、小剂量组间比较,差异无显著性意义(P>0.05)。结论福建叶下珠能显著降低血清转氨酶活力和肝脾脏器指数,对肝细胞坏死有一定的改善作用,具有较好的抗小鼠免疫性肝损伤作用。

卡介苗预先免疫对大鼠慢性绿脓杆菌性肺炎的影响

为了探讨卡介苗 (BCG )预先免疫对大鼠慢性绿脓杆菌 (PA )性肺炎模型的影响。采用BCG或灭菌生理盐水皮内注射预先免疫 3周 ,然后由支气管内予以PA攻击 ;2周后评估各组的肺部细菌学、肺组织病理学、肺部细胞因子 (IL 4、IFN γ、TNF α )反应、血清PA特异性抗体IgG水平的变化。结果显示BCG免疫组肺组织内的IFN γ、TNF α水平显著升高 (P <0 0 5 ) ,肺组织匀浆PA菌落计数明显低于生理盐水对照组 (P <0 0 1) ;肺组织病理改变及血清PA特异性抗体IgG水平两组均无显著差异 (P >0 0 5 )。以上结果提示BCG接种能够诱导肺部Th1型免疫反应 ,加快PA性肺炎大鼠肺部的细菌清除 。

狭基线纹香茶菜对小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的研究狭基线纹香茶菜对卡介苗(BCG)加脂多糖(LPS)所致小鼠免疫性肝损伤的保护作用。方法 72只小鼠随机分为正常组,模型组,高、中、低剂量给药组(20,10,5g·kg-1),阳性对照组(联苯双酯60mg·kg-)1,每天给药1次,连续12d。第1天,除正常组外,各组每只小鼠尾静脉注射BCG0.2mL(10mg·mL-)1。末次给药后,除正常组外,各组小鼠尾静脉注射LPS0.2mL(37.5μg·mL-1)造模。造模16h后取血,测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST),肝组织超氧化物岐化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)含量,同时测体重、肝脏重、脾重和胸腺重,求脏器指数,并观察肝组织病理学变化。结果狭基线纹香茶菜高、中、低剂量组均能显著降低ALT、AST值和MDA含量(P<0.05或P<0.01),对肝重量和脾重量增加及胸腺萎缩有抑制作用(P<0.05或P<0.01)。病理检查结果也显示有明显的保肝作用。结论狭基线纹香茶菜对BCG和LPS所致小鼠免疫性肝损伤有保护作用,其保肝机制与其抗脂质过氧化损伤有关。

卡介苗对哮喘豚鼠的影响

目的 研究卡介苗对哮喘豚鼠的防治作用。方法 24只豚鼠随机分为阳性对照组、地塞米松组、卡介苗组及阴性对照组,每组6只,除阴性对照组用生理盐水外,其余三组每只腹腔内注射鸡卵蛋白100mg,2周后用1％鸡卵蛋白激发致敏,每次30min,每日1次,持续3d,地塞米松组每次激发前肌注地塞米松2mg/kg,卡介苗组每次激发前肌往卡介苗30mg/kg,阳性对照组每次激发前30min肌注生理盐水2ml,最后用乌拉坦麻醉,检验动脉血气分析参数,嗜酸粒细胞(EOS)计数等参数,所有参数用t检验或卡方检验分析。结果 阳性对照组与其它三组比较,在豚鼠的发病程度、动脉血气分析、外周血EOS计数、支气管肺泡灌洗液中EOS计数、支气管病理切片每20个高倍视野EOS计数均有明显差异(P<0.05或P<0.01)。结论 卡介苗能够抑制动物模型中的哮喘反应。

医疗失效模式与效应分析在新生儿卡介苗接种流程中的应用

目的运用医疗失效模式与效应分析(health care failure mode and effect analysis,HFMEA)规范新生儿卡介苗(bacille calmette-Guerin vaccine,BCG)接种流程,并评估应用效果。方法组建HFMEA项目团队,根据HFMEA模式规范新生儿BCG接种流程。便利抽样法选取国际和平妇幼保健院2015年出生的新生儿为观察组,2010-2014年出生的新生儿为对照组,比较规范接种前后两组新生儿在BCG使用情况及BCG疑似预防接种异常反应(adverse events following immunization,AEFI)报告发生率之间的差异。结果应用HFMEA模式规范BCG接种流程后,新生儿BCG及时接种率由96.16%升至97.36%(P<0.01),BCG的AEFI报告发生率由493.32/100万剂次降至68.78/100万剂次(P<0.05)。结论应用HFMEA模式规范BCG接种流程,可提升BCG及时接种率及疫苗接种工作的安全性。

卡介苗对哮喘小鼠淋巴细胞凋亡的影响

目的 探讨卡介苗 (BCG)对哮喘BALB/c小鼠外周血及肺泡灌洗液 (BALF)中淋巴细胞凋亡的影响。方法 采用卵蛋白诱导的BALB/c小鼠哮喘模型 ,以BCG处理 ,用彗星法计数哮喘动物外周血及支气管肺泡灌洗液中的凋亡淋巴细胞百分比 ,用二苯胺法定量分析DNA的损伤率 ,比较阳性对照组、阴性对照组和BCG组的淋巴细胞凋亡及损伤情况。结果 外周血中淋巴细胞凋亡率 :阳性对照组为 (2 1 5± 0 44) % ,BCG组为 (4 0 3± 0 30 ) % ,两组有非常显著性差异 (P <0 0 1 ) ;BALF中淋巴细胞凋亡率 :阳性对照组和BCG组分别为 (1 0 8± 0 69) %和 (2 70± 0 82 ) % ,两组比较有显著性差异 (P <0 0 5) ;外周血DNA损伤率 :阳性对照组为 (7 2 2± 8 66) % ,BCG组为 (9 36± 0 1 5) % ,两组比较有非常显著性差异 (P <0 0 1 )。阴性对照组的各项指标与BCG组相比 ,均无明显差异 (P >0 0 5)。结论 BCG可以促进哮喘小鼠的淋巴细胞凋亡 ,加速炎性细胞消除 ,从而起到治疗哮喘的作用。

不同微生物佐剂S180瘤苗的免疫效应和抑瘤作用

目的 比较肿瘤主动特异性免疫治疗中具有佐剂作用的白色念珠菌、李斯特菌及卡介苗的免疫调节效应和抑瘤作用。方法 选择白色念珠菌、李斯特菌、卡介苗各自联合小鼠S 180肿瘤疫苗 ,皮下免疫接种荷瘤小鼠 ,检测小鼠脾细胞IL 2、IFN 产生水平 ,腹腔MTNF α产生水平 ,观察荷瘤小鼠瘤体重量和存活期。结果 三种微生物佐剂均能协同瘤苗增强免疫小鼠IL 2、IFN 和TNF α的产生能力 (P <0 0 1,0 0 5 ) ,有效抑制足垫部移植瘤的生长 ,抑制率在 6 2 8%～ 75 8%之间 ,显著高于单独注射瘤苗组 (P <0 0 1) ,延长腹腔植瘤小鼠平均存活期 7～ 14天 ,白色念珠菌、李斯特菌协同提高腹腔植瘤小鼠存活率 2 0 %。结论 白色念珠菌和李斯特菌与卡介苗具有同样的佐剂效应 。

灯盏乙素对脂多糖加卡介苗所致小鼠免疫性肝损伤保护作用的机制研究

目的在前期工作基础上,对灯盏乙素对脂多糖加卡介苗所致小鼠免疫性肝损伤保护作用的机制进行研究。方法建立脂多糖加卡介苗(LPS+BCG)致小鼠免疫性肝损伤模型,灯盏乙素50,100,200 mg.kg-1,1次/d,连续灌胃给药12d。测定血清中谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)及肝组织匀浆中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)、一氧化氮(nitric oxide,NO)、总一氧化氮合酶(total Nitricoxide synthase,total NOS)、结构型一氧化氮合酶(Constitutive Nitricoxide synthase,cNOS)、诱导型一氧化氮合酶(Inducible Nitricoxide synthase,iNOS)等生化指标。结果灯盏乙素低、中、高3个剂量组均能显著降低LPS+BCG致肝损伤小鼠血清中ALT水平,各剂量组能不同程度提高肝组织匀浆中CAT,SOD,GSH-Px的活性以及降低XOD,MDA,NO的含量。对一氧化氮合酶各分型分析表明,灯盏乙素能显著降低总NOS和iNOS的表达,对cNOS的表达基本没有影响。结论灯盏乙素对脂多糖加卡介苗引起的免疫性肝损伤具有保护作用的机制可能与其抗脂质过氧化,增强机体对自由基的清除能力及调节体内NO水平等有关。

复方柴郁汤对小鼠免疫性肝损伤的影响

目的:观察中药复方柴郁汤对小鼠免疫性肝损伤的影响。方法:将72只小鼠随机分为空白组、病理组、日达仙组以及复方柴郁汤大、中、小剂量组,采用BCG+LPS造模,观察并比较各组小鼠血清ALT、AST含量以及肝脏病理结构。结果:各治疗组和日达仙组的ALT、AST值明显低于病理组(P<0.01),组织结构明显优于病理组(P<0.01)。其中中剂量组又优于其他治疗组和对照组(P<0.05)。结论:复方柴郁汤能明显降低免疫性肝损伤小鼠血清ALT、AST的活力单位,减轻其免疫性肝损伤程度。

BCG PPD对哮喘小鼠的CD4^+ CD25^+调节性T细胞及肺部病理的影响

目的通过建立小鼠哮喘模型,以卡介苗(BCG)和结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)作干预因素,从而了解哮喘小鼠CD4+ CD25+调节性T细胞和其它T细胞亚群数量的变化,以及肺部的病理改变。方法将36只6～8周龄的BALB/C小鼠随机分成A、B、C、D4组,A组为BCG+BCG干预组,B组为BCG+PPD干预组,C组为哮喘模型组,每组各10只,D组6只为正常对照组。应用流式细胞仪分别检测各组的CD4+ CD25+调节性T细胞和T细胞亚群,同时取各组的肺组织PAS染色鉴定黏液分泌。结果A、B、C三组的CD3+、CD4+、CD8+ T细胞的百分比以及CD4+/CD8+的比值均比D组(正常对照组)低(P<0.05),而A、B两组的CD3+T细胞百分比较C组增高(P<0.05)。CD4+ CD25+ Treg占CD4+T细胞的百分比,其它三组低于D组(P<0.05),A、B两组较C组升高(P<0.05),而A、B两组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。肺组织病理提示D组未见到黏液分泌;C组支气管壁可见杯状细胞增生、变大,并有大量黏液分泌;A、B两组与C组比较,杯状细胞减少,黏液分泌减少。B组气道的炎症反应轻于A组。结论支气管哮喘的发病可能与CD4+ CD25+ Treg数量的减少及T细胞亚群功能紊乱有一定的关系;卡介苗单独应用或与PPD联合应用都能够在一定程度上减轻哮喘小鼠气道的黏液分泌,并可以提高CD4+ CD25+ Treg数量;BCG+PPD联合应用较BCG+BCG应用对哮喘的预防效果更明显。

卡介苗治疗支气管哮喘的免疫机制及研究进展

随着儿童计划免疫的普及,结核病的发病率呈下降趋势,而支气管哮喘(简称哮喘)的发病率却呈现上升趋势。卡介苗是由活的牛型结核杆菌在体外减毒培养后制成的活疫苗。卡介苗对哮喘的免疫调节作用早已引起重视,但对卡介苗在防治哮喘中的免疫机制还不是太清楚。现主要针对哮喘发病的免疫学基础及卡介苗在防治哮喘中可能的免疫机制予以综述,并提出卡介苗作为免疫调节剂在哮喘防治中存在的问题。

铜陵市婴幼儿卡介菌纯蛋白衍生物试验结果分析

目的了解卡介苗(BCG)预防接种质量,分析存在的问题及其影响因素,提出改进措施,促进预防接种规范、安全、有效地开展。方法用卡介菌纯蛋白衍生物(BCG-PPD)试验方法,随机调查300名儿童接种卡介苗3个月后的阳转率。结果卡介菌纯蛋白衍生物试验总阳性率86.33%,城市儿童卡介菌纯蛋白衍生物试验阳性率高于农村儿童。卡痕大小与卡介菌纯蛋白衍生物试验阳性率呈正相关;县级及以上医院产科接种卡介苗的儿童卡介菌纯蛋白衍生物试验阳性率高于乡镇级医院产科和预防接种门诊接种卡介苗的儿童。结论加强对卡介苗接种人员,尤其要加强农村乡镇卫生院和接种门诊的接种人员的技术培训,提高接种质量。

692例儿童接种卡介苗效果调查

为了解卡介苗 (BCG)接种效果 ,随机抽查接种过卡介苗的健康儿童 6 92例 ,按年龄分为 5组 (12～ 16周、～ 1岁、～ 2岁、～ 3岁、～ 4岁 ) ,进行结核菌纯蛋白衍生物 (PPD)试验 ,72 h后观察硬结直径 ,同时测量 BCG接种后卡痕直径。结果 PPD阳性率为 88.0 0 % ,阴性率为 11.99% ;各年龄组 PPD阳性率比较 ,差异有统计学意义 (P<0 .0 1) ,其阳性率随着年龄增加而下降 ;PPD反应强度与卡痕大小有相关关系。提示本组接种 BCG效果好 ;一般情况下可根据卡痕大小估计 BCG接种效果 ;对 PPD试验阴性者 ,应及时补种卡介苗。

1533名婴幼儿卡介苗接种质量及其相关影响因素研究

目的：了解婴幼儿卡介苗（BCG）接种质量,分析其相关影响因素,提高预防接种效果。方法：收集常州市结核病防治研究所预防接种门诊已接种BCG的1 533例婴幼儿资料,对其进行结核菌素试验（PPD试验）,分析PPD试验结果及有关影响因素,对BCG接种质量予以评价。结果：1 533例婴幼儿中卡痕率94.59%,PPD试验阳转率96.09%。不同性别、户籍地、出生体质量和不同年龄婴幼儿PPD试验阳转率差异均无统计学意义（P〉0.05）。卡痕均径3~5 mm和〉5 mm的婴幼儿PPD试验阳转率均明显高于卡痕〈3 mm者（P〈0.01）。结论：常州市结核病防治研究所BCG接种质量较好,达到国家基础免疫标准。性别、户籍地、出生体质量、PPD试验年龄对BCG阳转率均无明显影响,重视BCG质量和BCG接种技术对提高接种效果作用显著。