巨大芽孢杆菌25-B对普通生酮基古龙酸菌伴生作用机理的探究

为明确Vc混菌发酵中巨大芽孢杆菌25-B(俗称大菌)对普通生酮基古龙酸菌(俗称小菌)的伴生作用机理,通过摇瓶发酵实验考察大菌胞外组分上清液、胞内组分上清液、全组分超声上清液对小菌伴生活性的影响,并采用超滤分级分离技术,观察大菌胞外不同相对分子质量区间的组分对小菌生长和产酸的促进作用。结果表明,大菌培养12h(产芽孢前)的胞内组分上清液和大菌培养36h(大多数芽孢随母细胞裂解释放)的胞外组分上清液均能有效促进小菌生长和产酸,且二者能力相当,说明活性物质应该是在细胞内产生,并随着芽孢形成时母细胞裂解而释放,从而对小菌产生促进作用;大菌胞外组分上清液中大于30000的组分对小菌生长和产酸的促进作用最明显。

维生素D_(3)羟化菌株的筛选及工艺优化

25(OH)VD_(3)和1α,25(OH)_(2)VD_(3)在临床上具有广泛的应用,其合成方法包括化学合成法与生物转化法.生物转化法相比化学合成法具有反应条件温和、反应专一性强、成本低等优点.为获取具有生物羟基化维生素D_(3)功能的微生物,通过唯一碳源平板法从土壤中分离得到一株具有转化维生素D_(3)生成25(OH)VD_(3)和1α,25(OH)_(2)VD_(3)能力的菌株1-18.经16S rDNA测序鉴定,菌株1-18为巨大芽孢杆菌(Bacillusmegaterium),命名为巨大芽孢杆菌H-1.通过单因素法优化发酵工艺,确定最佳发酵条件为初始pH值7.5,添加6%(V/V)的甘油助溶底物,发酵6 h时投入底物维生素D_(3),接种量为2%(V/V).优化后25(OH)VD_(3)的浓度在发酵36 h时达到1433.90μg/L,1α,25(OH)_(2)VD_(3)的浓度在发酵60 h时达到811.05μg/L.本研究成功筛选到新的羟基化维生素D_(3)的菌株,并通过优化发酵条件缩短了发酵周期和提高了羟化产物的浓度.