Bacillus sphaericus DS11蛋白酶基因osp在Bacillus subtilis的异源表达及酶学性质研究

将Bacillus sphaericus 2297蛋白酶基因osp在Bacillus subtilis WB800异源表达,并进行纯化和酶学性质研究。以Bacillus sphaericus DS11基因组DNA为模板,扩增osp基因,构建重组质粒pMA0911-His6-osp,重组质粒转化Bacillus subtilis WB800获得重组表达菌株Bacillus subtilis WB800-pMA0911-His6-osp。利用镍离子柱亲和层析纯化重组酶至电泳纯。重组酶最适催化温度和pH值分别为40℃和pH 8.0,在20℃~30℃下保温10 h保持80%以上酶活力,在pH 7.0~9.0处理24 h保持60%以上酶活力;Sr^2+、K^+、Mg^2+对酶活有促进作用,Fe^3+、Ba^2+、Ca^2+对酶活有抑制作用;重组蛋白酶在极性常数为0.8~3.1的有机溶剂中孵育6 d后保持53%以上的酶活力。