苏云金杆菌WG-001工程菌发酵培养基的筛选

探讨了BtWG001工程菌以农副产品为主要碳、氮源的利用情况,为该菌株发酵培养基的筛选提供了广谱的原料资源。利用高速上升浓度加倍法进行了发酵培养基的优选,获得一个优良配方。发酵水平达到4024IU/μL,0.39%,与对照配方(2800IU/μL,0.26%)相比,分别提高44%,50%。证明该方法为一种筛选Bt发酵培养基配方的新模型。

苏云金芽胞杆菌基因工程菌WG-001和1125BG在盆栽土壤中的安全性评估

自从遗传改造微生物诞生以来,其安全性问题受到了持续关注和研究。本文报道了苏云金芽胞杆菌基因工程菌WG 001和1125BG在盆栽大白菜的土壤环境中的安全性评估结果。实验结果表明:当用工程菌WG 001和1125BG分别以1013cfu/cm2和1010cfu/cm2的高土壤密度喷洒盆栽大白菜后,工程菌菌数迅速上升而后逐渐下降,最后分别以相对较低的菌数水平(105cfu/g干土样和106cfu/g干土样)在实验土壤中稳定存在;对土壤中土著细菌群落在有限时间(15d)内产生了一定影响,而对土著真菌与放线菌无显著影响;未发现工程菌WG 001中特异基因发生丢失;未检测到工程菌WG 001和1125BG中特异基因(WG 001为cry1Aa和cry1Ac,1125BG为gfp)向土著细菌、真菌、放线菌和盆栽大白菜的水平转移。本文实验结果显示,高密度喷洒的两种工程菌未显著影响实验土壤环境,具有很高的安全性。同时发现以不同的喷药量喷洒两种工程菌后,在盆栽土壤中其存活水平、菌数降低的速率以及对土著细菌的影响能力都表现出不同的特点。

Bt工程菌WG-001与化学杀虫剂复配最佳配方筛选及田间防效研究

为了延缓小菜蛾Plutella xylostella(L.)抗药性的产生和发展,筛选Bt工程菌WG-001与化学杀虫剂的最佳复配配方,本研究采用浸叶法分别测定了Bt工程菌WG-001与茚虫威、丁醚脲和巴丹复配对小菜蛾的增效作用。结果表明,当Bt工程菌WG-001与茚虫威以有效成分之比为100.10∶0.72复配时,增效作用最强,共毒系数为178.05。而Bt工程菌WG-001分别与丁醚脲和巴丹复配表现相加或拮抗作用。田间试验结果表明,Bt工程菌WG-001与茚虫威以100.10∶0.72的有效成分之比进行复配后,药后7d,500倍液对小菜蛾的平均防效为84.88%,显著优于Bt工程菌WG-001和茚虫威单用的平均防效。

苏云金芽孢杆菌高效价杀虫剂的研究进展

苏云金芽孢杆菌制剂是目前应用广泛而有效的一种微生物杀虫剂。本文从菌种分离筛选、构建遗传工程菌、突变筛选及定向进化等方面介绍了获得苏云芽孢金杆菌高效价杀虫的几种研究策略,并对各种策略的进展及应用前景进行了简要综述。

苏云金芽孢杆菌工程菌伴孢晶体的形态发生

苏云金芽孢杆菌在有帮助蛋白存在的情况下杀虫晶体蛋白获得了超量表达。通过透射电镜观察了Cry1Ac超量表达工程菌伴孢晶体的形态发生以及不同芽孢发育时期的晶体形态变化。结果表明 ,该工程菌的伴孢晶体在细胞不对称分裂的隔膜形成前就已出现 ,而且晶体发生的部位与芽孢无关。但晶体在形成初期往往靠近母细胞膜。观察结果还表明 ,大量表达的晶体蛋白不能马上参与到晶体合成 ,晶体形成的最佳时期是芽孢皮层形成期。母细胞大量液泡的产生与消失可能与晶体形成有关。此外 ,在超量表达工程菌中 ,Cry1Ac蛋白能在一个细胞内形成多个伴孢晶体 。

苏云金芽胞杆菌工程菌BIOT185对金龟子幼虫的田间防效及其安全性评价

为评价苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）工程菌BIOT185对金龟子幼虫的田间防治效果以及其中间试验水平的安全性,在河北省定州市花生田开展了两年的田间小区试验。调查结果表明,每mL含100亿芽胞的工程菌BIOT185悬浮剂稀释10倍和100倍处理对金龟子幼虫具有较好的防治效果,虫口减退率可达52.08%-70.51%,保果效果为50.40%-66.57%,说明高浓度的BIOT185可以有效控制金龟子幼虫的危害。利用平板菌落计数法结合PCR检测发现,在施药后的365d中BIOT185在土壤中的菌量总体呈下降趋势;调查田间各小区的昆虫种群发现,工程菌BIOT185处理区与野生菌HBF-1、BT185以及对照区的昆虫种群差异不显著。说明BIOT185不会在土壤环境中大量残留,也不会影响花生田的昆虫种群。

苏云金芽胞杆菌基因工程菌BMB696B对实验动物的安全性评估

将来自苏云金芽胞杆菌李氏亚种的营养期杀虫蛋白基因vip83导入苏云金芽胞杆菌高毒菌株YBT 1520,得到广谱、高毒的工程菌BMB696B。室内生物测定显示该工程菌对棉铃虫和甜菜夜蛾具有很高的毒力。然而,国内外还未见有关于营养期杀虫蛋白的毒理学资料的报道,因此工程菌BMB696B的毒理学安全性也无法预测。为了对该工程菌的安全性进行合理的评价,并为该产品的生产和应用过程中安全防护措施的制定提供依据,根据国家标准GB 15670—1995《农药登记毒理学试验方法》,就BMB696B粉剂对实验动物进行了相关的毒理学试验。结果表明,工程菌对Wistar大鼠急性经口LD50大于5 000 mg/kg,急性经皮LD50大于2 000 mg/kg,均属低毒类;对兔皮肤刺激平均指数72 h后为0,皮肤刺激强度为无刺激性;眼刺激平均指数48 h后为0,眼刺激强度为无刺激性;对豚鼠致敏率为0,属I级弱致敏物。由此证明,工程菌BMB696B没有经口和经皮的急性毒性、没有急性皮肤和眼刺激性、没有致敏性。

苏云金芽胞杆菌工程菌WG-001可湿性粉剂的增效化合物筛选

为了筛选出对苏云金芽胞杆菌具有增效作用的无机化合物,并确定其最佳使用浓度,于苏云金芽胞杆菌工程菌WG-001可湿性粉剂(B tWG-001 WP)中添加MgC l2、CaC l2、NaHCO3、MgSO4、NaH2PO4、Na2CO3、Na2HPO4、KH2PO4等8种化合物,测定其对小菜蛾的毒力。结果显示,添加0.4%MgC l2、0.2%CaC l2、0.4%MgSO4、0.2%Na2CO3时,共毒因子分别为4 6.7 5、3 6.2 7、41.51、31.03,均大于20,而添加另外4种化合物,共毒因子均低于20;添加0.4%MgC l2、0.2%CaC l2、0.4%MgSO4、0.2%Na2CO3,增效比最大,分别为1.46、1.33、1.34、1.29。田间试验结果显示,BtWG-001 WP中添加0.4%MgSO4稀释500倍施用时,药后7天对小菜蛾的田间平均防效最高,为80.51%,且与其它处理差异显著。表明添加0.4%MgSO4可显著提高B t对小菜蛾的田间防效。