Ames试验与MLA试验检测两味含马兜铃酸中药的致突变性

背景与目的:检测单味马兜铃及复方龙胆泻肝丸的遗传毒性。材料与方法:鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Amestest)检测含马兜铃酸的两味单、复方中药的细菌回复突变率;采用96孔微孔板接种法进行小鼠淋巴瘤细胞tk基因突变试验(mouse lymphoma assay,MLA),经单、复方含马兜铃酸浓度5μg/ml对L5178Y/tk(+/-)-3.7.2c细胞进行染毒,分别测定其接种效率(PE),相对总增长率(RTG)和突变频率(MF)。结果:Ames试验结果为阴性,而小鼠淋巴瘤试验显示单味马兜铃具有一定细胞毒性并诱导tk基因突变,产生突变集落;而复方龙胆泻肝丸未诱发tk基因突变。结论:受试的单味马兜铃具有一定的遗传毒而复方龙胆泻肝丸具有对马兜铃的减毒效应。

染发类产品Ames试验中不同剂量下细菌毒性和培养时间的探讨

目的对染发类产品Ames试验中常见若干问题进行探讨,以期更加科学合理地判断受试物的致突变性。方法选取3种(A、B、C)染发产品进行Ames实验,检测其致突变性,比较肉眼和低倍显微镜(100×)对不同情况背景菌苔的观察结果;比较不同培养时间对于自发回变率低的TA98菌株试验结果的影响;通过调整剂量设计对可疑结果进行复测。结果试验条件下,随着A染发产品细菌毒性的增加,肉眼和镜下均可观察到TA98菌株背景菌出现渐变规律,在1 000μg/皿增加到4 000μg/皿细菌毒性范围内仍可有效区分背景菌与回变菌落;B染发产品培养时间延长至72h后,TA98菌株试验结果由阳性变为阴性;C染发产品缩小剂量间隔复测后,TA97a菌株试验结果由阴性变为阳性。结论染发类产品进行Ames试验时,不能简单地以2倍的标准来评判。

模拟真空辐照环境对Ames和SOS标准菌株的影响

利用空间低能综合辐照实验设备对Ames标准菌株TA97,TA98,TA100,TA102和SOS显色反应标准菌株PQ37进行真空辐照处理,研究航天器内真空辐照环境对微生物的影响。通过鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验(Ames试验)和SOS显色法对航天器内的真空辐照环境的致突变作用进行生物学评价。研究结果显示,模拟航天器的真空辐照环境具有诱变性,且对微生物的生理代谢有一定的影响。

Ames试验检测硫芥的致突变作用

目的 应用Ames试验检测系统观察硫芥的诱变活性。方法 选用TA97,TA98,TA10 0 ,TA10 2标准测试菌株 ,采用标准平板掺入法检测硫芥的诱变活性。加S9混合液作为体外代谢活化系统。结果 硫芥在S9活化和非活化两种测试条件下 ,8～5 0 0 μg 皿浓度范围内 ,诱发TA98、TA10 0两种测试菌株回变菌落数与阴性对照组相比无明显增加 ,在 8～ 3 2 μg 皿浓度范围内 ,诱发TA97和TA10 2产生的回变菌落数与阴性对照相比无明显增加 ,在 12 5～ 5 0 0 μg 皿测试浓度范围内 ,对TA97和TA10 2产生的回变菌落数与阴性对照相比均达到阴性对照两倍以上。结论 硫芥具有碱基置换及移码型的直接诱变特性和间接诱变特性 ,间接诱变活性较直接诱变活性减弱。

三种补益类中草药在Ames实验中的抗诱变作用

目的研究三种补益中药的抗诱变性能。方法采用鼠伤寒沙门氏菌营养缺陷型回复突变试验(Ames实验)对三种补益中药水提物低、中、高剂量组下的抗诱变性能进行研究。结果甘草、绞股蓝低、中、高剂量组,黄芪中、高剂量组能抑制由2,7-AF诱发的TA98菌株回变菌落数增加(P<0.05);黄芪低、中、高剂量组,绞股蓝中、高剂量组能抑制由NaN3诱发的TA100菌株回变菌落数增高(P<0.05)。结论在Ames实验中,甘草、黄芪、绞股蓝均表现出了一定的抗诱变性,其中绞股蓝、黄芪抗诱变作用显著。

医用高分子材料的Ames试验研究

男性绝育药输精管粘堵剂、男性避孕材料水凝胶、医用组织复合膜、胶原膜、复合缝线、铬制复合型可吸收缝线、药物载体聚乳酸、固定材料聚酯醚等８种医用高分子材料，经Ａｍｅｓ试验的标准菌株ＴＡ９７、ＴＡ９８、ＴＡ１００、ＴＡ１０２测试，均未诱发回复突变菌落数增加，对Ａｍｅｓ试验菌株无诱发突变作用。

曲克芦丁原料药在Ames实验中的抗突变作用研究

目的:探讨曲克芦丁原料药对TA97、TA98、TA100、TA102和TA1535菌株基因回变菌落的影响,对其遗传安全性进行评价。方法:采用直接平皿掺入法,将曲克芦丁原料药以5、1、0.2、0.04、0.008mg曲克芦丁/皿为终浓度,在活化与非活化条件下,分别与鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型突变菌株,37℃接触48小时,计数回变菌落数。结果:在5～0.008mg曲克芦丁原料药/皿的不同测试浓度,+S9与-S9两种测试系统条件下,其作用的5种测试菌株的回变菌落数与阴性对照相比无明显增加,回变菌落背景正常,未显示其有抑菌作用,且无剂量-反应关系。结论:曲克芦丁原料药在本试验所确定的5mg/皿剂量范围内,对TA系列测试菌株无明显致DNA碱基置换及移码突变性。

Ames试验与HPRT试验两种方法对6种氧化型染发剂的检测

目的:通过细菌回复突变试验(Ames试验)和体外哺乳动物细胞基因突变试验(HPRT试验)两种方法检测氧化型染发剂,并对其结果进行分析比较,探讨两种方法在检测氧化型染发剂致突变性中的应用。方法:Ames试验采用一组营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌检测6种氧化型染发剂。各受试物分别设4个可供分析的剂量组,剂量范围从312~10 000μg/皿,通过计算受试物回复突变菌落数,判定受试物的致突变性。HPRT试验采用体外培养的V79细胞,各受试物分别设4个可供分析的剂量组,剂量范围从4.88~5 000μg/mL,研究6种氧化型染发剂致细胞HPRT位点突变的频率,通过计算受试物引起的V79细胞的突变频率,判定其致突变性。结果:在Ames试验中,无论加与不加体外代谢活化系统,受试物在2 500~10 000μg/皿剂量范围均存在回变菌落数超过溶剂对照组两倍的情况,并有剂量-反应关系,表明Ames试验检测6种氧化型染发剂均为阳性结果。而在HPRT试验中,无论加与不加体外代谢活化系统,各受试物在>2 500μg/mL时具有明显毒性作用,在9.75~2 500μg/mL剂量范围细胞突变频率与阴性对照组比较,差异均无统计学意义,表明HPRT试验检测6种氧化型染发剂均为阴性结果。结论:由于氧化型染发剂有明显的细胞毒性,导致HPRT试验无法设计更高的剂量,从而无法反映受试物致突变性的真实水平。而Ames试验具有简单、快速、经济等优点,可作为检测氧化型染发剂致突变性的首选方法。

Ames试验法对阴离子合成洗涤剂安全性的评价

合成洗涤剂能否引起基因突变，有无潜在危害，已引起人们的极大关注，我们对成都产合成洗涤剂厂生产的双猫牌洗衣粉进行了Ａｍｅｓ试验，结果表明：不同浓度的洗涤剂对ＴＡ９８，ＴＡ１００，ＴＡ１０２每组菌株的回变菌落数均未超过对应溶剂对照回变菌落数的２倍，说明双猫牌洗衣粉在受试浓度下，对所用菌株无诱变活性，即未发现该产品具有政突变作用．

互隔交链孢霉毒素AME和AOH合成物的诱变性

对互隔交链孢霉毒素——交链孢酚单甲醚(Alternariol monomethyl ether,AME)和交链孢酚(Alternariol.AOH)的合成物进行了细菌回复突变试验.检测其诱变性。结果表明:AME和AOH提取物和合成物(不加S_9)对鼠伤寒沙门氏菌TA102菌株和大肠菌ND-160菌株.均显示致突变效应.而后者对AME和AOH更为敏感。用相同剂量.AOH对大肠杆菌ND—160菌株诱变比值(MR)比AME高2～7倍,表明AOH的诱变性更强。合成物与提取物相比,合成物的诱变作用较强。

世界卫生组织《结核分枝杆菌耐药相关基因突变目录(第2版)》解读

耐药结核病是2035年实现全球终结结核病流行目标的巨大障碍。世界卫生组织(World Health Organization,WHO)倡导采用快速分子药物敏感性检测技术进行耐药结核病早期诊断,而覆盖全面可靠的耐药检测靶标是提高分子药物敏感性检测技术可靠性的关键。WHO于2023年11月发布《结核分枝杆菌耐药相关基因突变目录(第2版)》,目的是基于更广泛的全球数据汇总形成更为全面准确的耐药相关基因突变目录,为开发与完善基于测序或其他方法的新型分子药物敏感性检测技术提供支持。本文对第2版目录相较于第1版目录在分析流程与耐药突变等内容的更新进行了详细的解读,并对未来目录完善的方向进行了展望。

利福平耐药结核分枝杆菌对氟喹诺酮类药物表型耐药与其基因突变的一致性研究

目的:研究利福平耐药结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)对氟喹诺酮类药物(fluoroquinolones,FQs)耐药基因突变特征与FQs最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)的关系。方法:选取2016—2021年北京市结核病防治机构及定点医院收治的利福平耐药结核病(rifampicin resistant tuberculosis,RR-TB)患者分离培养阳性菌株进行微孔板法药物敏感性检测,总结RR-TB患者菌株对左氧氟沙星(levofloxacin,Lfx)和莫西沙星(moxifloxacin,Mfx)的MIC值;同时进行一代测序。分析FQs耐药相关基因gyrA和gyrB突变特征与FQs MIC之间的关系;以表型药物敏感性试验(phenotypic drug susceptibility testing,pDST)结果为参照标准,评价基因型药物敏感性试验(genotypic drug susceptibility testing,gDST)对FQs耐药的检测效能;探讨RR-MTB对FQs表型耐药与基因型耐药差异的原因。结果:303株RR-TB患者菌株中,FQs pDST耐药率为27.7%(84/303),gyrA基因突变检出率为25.1%(76/303),未检测到gyrB基因突变。以pDST结果为参照标准,gDST检测RR-MTB的FQs耐药性的敏感度和特异度分别为84.5%(71/84;95%CI:74.6.1%~91.2%)和97.7%(214/219;95%CI:94.5%~99.1%)。两种方法结果不一致的菌株有25株,不一致率为8.3%(25/303)。FQs耐药菌株的MIC主要为2μg/ml,最常见的突变位点发生在第94位点(53.9%,41/76),gyrA基因在第88和94位点突变与pDST耐药完全一致,而第90和91位点突变的pDST耐药一致率分别为95.8%(23/24)和3/5。第88位点的突变与Lfx pDST耐药相关,与Mfx pDST高浓度耐药相关;第90位点的突变以丙氨酸转变为缬氨酸为主(92.3%,24/26),该突变发生的Lfx和Mfx最低MIC为临界浓度(1μg/ml和0.25μg/ml)。第94位点天冬氨酸突变为天冬酰胺均为Lfx和Mfx高浓度耐药(1/1),该位点天冬氨酸突变为酪氨酸与Lfx耐药(1/1)相关,与Mfx高浓度耐药相关(1/1)。结论:北京地区RR-MTB的FQs耐药的主要机制是gyrA基因突变,不同gyrA基因突变提示FQs耐药水平存在差异。FQs pDST和gDST检测RR-MTB的结果高度一致,可及早应用gDST检测RR-TB患者的FQs的耐药性,以指导临床制定合理治疗方案。

细菌回复突变试验菌株鉴定方法的比较

目的:对细菌回复突变试验(Ames试验)中的菌株鉴定方法进行比较分析,以期为试验菌株鉴定提供参考。方法:根据Ames试验相关的国家和行业标准、技术规范和指导原则要求,对试验菌株的组氨酸缺陷型鉴定、脂多糖屏障缺陷(rfa突变)鉴定、氨苄青霉素抗性(R因子)鉴定、四环素抗性(pAQ1质粒)鉴定和uvrB修复缺陷型(紫外线敏感性)鉴定方法进行了分析对比。结果:鉴定结果表明,TA97a、TA98、TA100、TA102、TA1535等5株菌株生长均需组氨酸,均具有rfa突变,除TA1535外均具有氨苄青霉素抗性,除TA102外均对紫外线敏感和均无四环素抗性。结论:虽然鉴定方法不同,但是判定标准和鉴定结果相同,各个实验室应规定好试验菌株鉴定的方法和频率,为Ames试验结果的真实、可靠提供根本保障。

乳钙咀嚼片细菌回复突变试验研究

目的 对乳钙咀嚼片进行细菌回复突变试验,评价其是否有潜在的致突变性,并探索乳钙咀嚼片中组氨酸含量对自发回复突变菌落数的影响。方法 采用鼠伤寒沙门菌突变型TA97a、TA98、TA100、TA102进行试验,用肝匀浆作为体外代谢活化系统(+/–s9),同时设空白对照组、溶剂对照组和阳性对照组。乳钙咀嚼片设50,10,2,0.4,0.08 mg/ml 5个剂量,按平板掺入法进行试验。另设1000,500,250,125,62.5,31.25μg/ml 6个剂量的组氨酸对照组。结果 游离组氨酸在一定剂量范围内时,4种菌株自发回变菌落数随组氨酸剂量升高而增加,组氨酸剂量继续增高,回复突变菌落数降低。乳钙咀嚼片各剂量组在加与不加S9条件下各菌株回变菌落数均未超过溶剂对照组菌落数的2倍,未观察到剂量反应关系,Ames试验结果阴性。结论 在本试验剂量范围内,乳钙咀嚼片Ames试验结果为阴性,提示该受试物无致突变性,同时排除了组氨酸成分对乳钙咀嚼片Ames试验结果的影响。

氯唑沙宗杂质的遗传毒性研究

目的:本试验在体外条件下研究氯唑沙宗杂质是否具有遗传毒性,为临床用药安全提供依据。方法:采用Derek和Sarah方法,从定量构效关系(Q)SAR的角度对氯唑沙宗杂质进行分类和评价。对于软件预测结果为阳性的杂质,进一步采用细菌回复突变试验验证上述结果。结果:氯唑沙宗杂质6(CAS:889884-60-0)、杂质7(CAS:28443-50-7)的Derek和Sarah软件预测结果为阳性。细菌回复突变试验中,杂质6、杂质7在15~1250μg/皿剂量范围内,在代谢活化系统S9存在或不存在的情况下,五种菌株的回变菌落数均未超过自发回变菌落数2倍以上,试验结果为阴性。结论:氯唑沙宗杂质6、杂质7体外细菌回复突变试验结果均为阴性,可以按照非遗传毒性杂质进行控制。

膜法处理工艺去除微污染有机物的对比研究

为选择饮用水深度净化的主体工艺.以CODMn、UV254作为水质参数,以Ames试验这一致突变性的生物活性指标分别对超滤膜(UF)、纳滤膜(NF)和反渗透膜(RO)法的饮用水深度净化的效能进行分析评价.实验结果表明:NF膜和RO膜对饮用水中CODMn、UV254和致突变物质有良好的去除,CODMn的去除都在0.5mg/L以下,去除效率在50％以上,对UV254的去除率为75％-100％,Ames试验结果为阴性,且NF膜处理好于RO膜处理,表明纳滤膜法能够保证饮用水水质安全,可作为小区饮用水深度净化的主体工艺.而UF膜对CODMn、UV254的去除效率不高,分别在12.5％-49.0％及20％-36％,并且Ames试验结果为阳性,表明UF膜去除水中微污染有机物的效果较小,仍有致突变性的残留.

有机烷酚类化合物致突变性研究

采用鼠伤寒沙门氏菌致突变试验 (AmesTest)菌株TA97,TA98,TA10 0 ,TA10 2 ,对环境中潜在内分泌激素干扰污染物甲基苯酚等 12种烷酚类有机物的致突变性进行研究。结果表明 ,除 2 ,4-二氯苯酚外 ,烷酚类化合物对Ames试验中TA98菌株的平皿掺入试验 ,均诱发显示阳性反应 ;其中对壬基酚、2 ,6 -二甲基苯酚、4-辛基酚等烷基酚类化合物呈强阳性反应 ,怀疑这几种化合物具有强致突变性 ,且以碱基移码型突变为主。

长白山野生食用菌多糖抗突变作用的研究

利用产自长白山地区的五种野生食用菌:桑黄、灵芝、桦褐孔菌、猴头菇和榛蘑为主要材料。从中提取食用菌粗多糖并进行抗突变实验,以期为食用菌保健品的开发以及精细加工提供理论参考。

蜂胶对环磷酰胺等4种诱变剂诱发突变的抑制作用

目的 探讨蜂胶对环磷酰胺等强诱变剂诱发基因突变的抑制作用。方法 应用Ames试验分别检测蜂胶对环磷酰胺 (CP)、叠氮钠 (NaN3)、正定霉素 (DNR)、2—氨基芴 (2—AF)诱发突变的抑制作用。结果 蜂胶对CP等 4种诱变剂诱发的突变均产生抑制作用 ,且伴有剂—反应关系 ;其中 8～2 0 0 μg/皿浓度蜂胶均出现中等强度或以下的抑制 (抑制率 <75 0 % ) ,10 0 0 μg/皿浓度蜂胶对 2—AF、NaN3、CP等 3种诱变剂出现了强度抑制 (抑制率分别为 80 9% ,79 7% ,98 7% )。蜂胶本身无诱变活性。结论 蜂胶对CP等

五味子的急性毒性和遗传毒性研究

目的 研究五味子的急性毒性和遗传。 方法 将五味子干燥果实用 80 %的乙醇提取制备其粗提物。用霍恩氏法设 2 .15、4.64、10 .0、2 1.9和 46.4g/kgBW五个剂量组研究五味子乙醇粗提物对昆明种小鼠的急性毒性 ;用2 .5、5 .0和 10 .0 g/kgBW三个剂量组进行了小鼠微核试验 ;用 0 .0 4、0 .12、0 .5 8、2 .3 2、11.5 9和 5 7.97mg/皿六个剂量组进行了Ames试验 ;用 113 .2 8、2 2 6.5 6、45 3 .12和 90 6.2 5 μg/ml四个剂量组进行了TK基因突变试验。 结果 46.4g/kgBW剂量组 10只小鼠 2 4h内全部死亡 ,2 1.9g/kgBW剂量组 2 4h内死亡 8只 ;10 .0g/kgBW剂量组小鼠灌胃后出现精神萎靡、活动量减少 ,行动迟缓 ,无死亡 ;4.64 g/kgBW剂量组仅有活动量减少 ,无其它症状 ;2 .19g/kgBW剂量组无异常表现 ;其LD50 分别为雄 14 .67和雌 19.96g/kgBW。微核试验中各剂量组的雄雌小鼠均未见微核率增加 ;Ames试验中各剂量组均未见回变菌落数增加 ,其中 5 7.97mg/皿剂量组菌落数显著减少 ,五味子乙醇粗提物有明显的抑菌作用 ;TK基因突变试验中各剂量组的突变频率与对照组比较差异均无显著性。 结论 在所选试验和剂量范围内五味子的乙醇粗提物未显示致突变作用。