淫羊藿苷、黄芩苷联合多柔比星抑制肝癌细胞APRIL表达和逆转肿瘤免疫逃逸

目的:探讨中药单体淫羊藿苷(icarrin,ICA)、黄芩苷(baicali,BAI)联合化疗药多柔比星(doxorubicin,又称ADM)抑制肝癌HepG2细胞增殖诱导配体(proliferation-inducing ligand,APRIL)的表达,进而抑制肿瘤细胞的增殖和逆转肿瘤细胞免疫逃逸的作用和机制。方法:MTT法检测25μg/ml ICA、200μg/ml BAI、2μg/ml ADM以及12.5μg/ml ICA+1μg/ml ADM、100μg/ml BAI+1μg/ml ADM等5个用药处理组与未用药对照组HepG2细胞的增殖活性;RT-PCR检测APRIL及其受体HSPG、凋亡相关蛋白Bcl-2的表达水平;MTT法检测CD3AK(anti-CD3 antibody induced activated killer cells)对用药处理组和未用药对照组HepG2细胞的杀伤活性。结果:ICA、BAI以及ADM对HepG2细胞增殖具有明显的抑制作用,且呈时间依赖效应;ICA、ADM、ICA+ADM、BAI+ADM组作用96 h抑制率最高,分别为(29.30±6.62)%、(63.60±1.35)%、(99.03±0.10)%、(98.89±0.18)%(均P<0.01)。HepG2细胞高表达APRIL及其受体HSPGmRNA。ICA、BAI以及ADM下调HepG2细胞APRILmRNA以及凋亡相关蛋白bcl-2 mRNA的表达水平。ICA、BAI、ADM以及ICA+ADM、BAI+ADM能增加HepG2细胞对CD3AK细胞杀伤的敏感性,杀伤率由对照组的(30.00±4.50)%分别增加到(97.23±5.11)%、(93.12±9.88)%、(60.45±5.71)%、(43.87±8.2)%、(47.25±2.68)%(均P<0.01);且经CD3AK作用后,HepG2细胞bcl-2 mRNA的表达进一步下调。结论:ICA、BAI联合ADM抑制HepG2细胞APRIL、bcl-2 mRNA的表达,进而抑制肿瘤细胞增殖;同时增强其对CD3AK细胞的杀伤敏感性,逆转肿瘤细胞的免疫逃逸。

通宣益气丸的质量标准研究

目的建立通宣益气丸的质量标准。方法采用薄层色谱法鉴别金银花、赤芍、黄芪,以高效液相色谱法测定黄芩苷含量。结果薄层鉴别中能检出金银花、赤芍、黄芪,阴性无干扰;HPLC测定黄芩苷在0.14~0.84μg范围内线性关系良好,r=0.9996,平均加样回收率为96.83%,RSD为1.68%。结论本方法简便可行,可做为本品的质量控制标准。

5-LOX-CysLTs-CysLTsR表达规律及黄芩苷-栀子苷配伍对大鼠脑缺血抗炎作用机制研究

目的动态观察脑卒中大鼠脑组织半胱氨酰白三烯(CysLTs)活性及其5-脂氧酶(5-LOX)、半胱氨酰白三烯受体1(CysLTs1)、半胱氨酰白三烯受体2(CysLTs2)表达水平变化规律,探讨黄芩苷-栀子苷(7:3)配伍抗脑缺血炎性损伤机制.方法线栓法制备大脑中动脉堵塞模拟脑缺血模型,模型成功后随机分为空白对照组(Control)、模型组(pMCAO)、黄芩苷-栀子苷(7:3)30mg/kg、45mg/kg、60mg/kg组、齐留通45mg/kg组、孟鲁司特0.5mg/kg组,持续35d给药治疗,每隔7d,神经功能评分观察神经保护作用,酶联免疫吸附实验(ELISA)法测脑组织CysLTs含量;蛋白质印迹(WesternBlot)法检测脑组织5-LOX、CysLTs1、CysLTs2蛋白表达水平.结果与模型组相比,黄芩苷-栀子苷(7:3)30mg/kg、45mg/kg、60mg/kg组在脑缺血28d内可显著降低了CysLTs水平;WesternBlot结果显示,5-LOX、CysLTs1和CysLTs2蛋白表达明显降低;至恢复期35d,各蛋白表达水平已无显著性差异.结论黄芩苷-栀子苷(7:3)配伍可减轻MCAO大鼠的神经功能障碍,其作用机制可能与抑制5-LOX活性、降低CysLTs1和CysLTs2蛋白表达有关.

HPLC法测定解热消炎胶囊剂中黄芩苷的含量

目的 建立解热消炎胶囊剂的含量测定方法。方法 采用用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.4％磷酸水溶液（55：45）为流动相；流速为0．90ml·min^-1；柱温为40℃，检测波长280nm，进样量为10μl，外标法计算含量。结果黄芩苷在19．7～98．5μg·ml^-1内峰面积与对照品浓度呈良好线性关系，其回归方程为Y=61824X＋75898，平均回收率为100．3％，RSD为1．87％（n=5）。结论 该方法简便、准确、重现性好，为解热消炎胶囊剂的质量控制提供了依据。

淫羊藿苷与黄芩苷联合多柔比星对肝癌细胞APRIL表达和血管内皮细胞生长抑制的研究

目的:探讨中药单体淫羊藿苷(ICA)、黄芩苷(BAI)联合化疗药多柔比星(ADM)抑制肝癌HepG2细胞APRIL、VEGF的表达,进而抑制血管内皮细胞生长的作用机制。方法:MTT法检测血管内皮细胞ECV304的增殖活性;RT-PCR法检测HepG2细胞APRIL表达水平和ECV304细胞中APRIL受体HSPG的表达情况;免疫细胞化学检测HepG2细胞VEGF表达水平。结果:HepG2细胞中VEGF蛋白、APRIL和ECV304细胞中APRIL受体HSPG的mRNA均呈高表达状态,且APRIL与VEGF两者高表达呈显著正相关(P<0.001);HepG2细胞经25μg/mLICA、200μg/mLBAI、2μg/mLADM以及12.5μg/mLICA+1μg/mLADM、100μg/mLBAI+1μg/mLADM5组药物处理后,与未用药对照组相比,APRILmRNA表达水平明显下降;HepG2细胞经5组药物处理后的上清液与未用药对照组相比,对ECV304细胞具有明显的增殖抑制作用,抑制率分别为(2.79±5.57)%、(15.20±3.79)%、(12.10±4.50)%、(19.34±8.17)%和(20.27±4.77)%(P均<0.05);HepG2细胞经5组药物处理后,与未用药对照组相比,VEGF的表达水平明显下降。结论:A-PRIL具有促进静脉内皮细胞ECV304增殖的作用。ICA、BAI联合ADM能降低HepG2细胞中APRIL与VEGF的表达水平,从而发挥其抑制血管内皮细胞ECV304生长的作用。

RP-HPLC法同时测定小儿柴桂退热口服液中7个成分的含量

目的:建立同时测定小儿柴桂退热口服液中没食子酸、葛根素、芍药苷、黄芩苷、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d和桂皮醛的含量测定方法。方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Thermo ODS C18(250 mm×4.6mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长254 nm(没食子酸、葛根素、芍药苷)、278 nm(黄芩苷)、210 nm(柴胡皂苷a、柴胡皂苷d)、290 nm(桂皮醛),柱温25℃,进样量20μL。结果:没食子酸、葛根素、芍药苷、黄芩苷、柴胡皂苷a、柴胡皂苷d和桂皮醛检测质量浓度的线性范围分别为0.0078~0.0933、0.1544~1.8532、0.0313~0.3756、0.0704~0.8450、0.0434~0.5212、0.0232~0.2789、0.0131~0.1577 mg·mL^-1(r为0.9994~0.9999);平均加样回收率分别为101.1%、100.3%、98.8%、101.2%、98.3%、99.9%、99.4%(RSD<2.0%,n=6)。5批小儿柴桂退热口服液样品中测得的上述7个成分平均含量分别为0.200~0.221、4.146~4.200、0.818~0.856、1.698~1.754、1.086~1.236、0.586~0.732、0.084~0.320 mg·mL^-1。结论:该方法操作简便,结果准确,重复性好,可用于小儿柴桂退热口服液的质量控制。