甲基丙烯酸环氧丙酯对BALB/c 3T3细胞恶性转化的实验研究

利用建立的 BALB/c 3T3细胞转化系统进行甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)的细胞转化和裸鼠诱癌的实验研究。实验结果表明:GMA 可诱导 BALB/c 3T3细胞形态转化,并呈剂量-反应关系;从转化灶分离扩增细胞,经电镜扫描观察到转化细胞表面形态改变,可被植物凝集素 ConA凝集,并在半固体琼脂生长,在同品系裸鼠皮下形成了肿瘤,病理组织检查结果为分化程度较低的纤维肉瘤。GMA 有很强的诱导细胞恶性转化的能力,提示 GMA 有潜在的致癌危险性。

BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验预测化合物急性毒性的验证研究

目的探讨BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验预测化合物急性毒性的可行性,为建立细胞毒性试验预测急性毒性试验平台,开展化合物急性毒性筛查提供理论依据。方法选取11种受试物,开展BALB/c 3T3中性红摄取试验,以IC50结果与急性毒性试验LD50进行线性回归,将拟合的曲线与RC模型曲线进行比较。同时,将受试物的IC50值代入RC模型方程获得急性毒性LD50的预测值,依据GHS急性毒性分级法进行分级,与急性毒性试验的LD50和分级进行比较,同时对结果进行相关性分析。结果阳性对照十二烷基硫酸钠的结果符合试验质量控制的要求。受试物拟合曲线与RC模型曲线几乎平行,11种受试物中,LD50预测值与急性经口毒性试验分级一致的有9种。BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验IC50值与急性毒性试验LD50值存在相关性(Pearson r=0.997,P<0.01)。受试物分级结果与实际分级具有等级相关性(Spearman r=0.905,P<0.01)。结论在本试验体系下,BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验能够较好地预测急性毒性。既可以作为化合物急性毒性的快速初筛,又可为动物试验起始剂量的选择提供依据。

牛血小板衍化生长因子的生物学活性研究——对BALB/c 3T3细胞DNA合成的影响

目的：检测牛血小板衍化生长因子的致丝裂活性。方法：以ＢＡＬＢ／ｃ３Ｔ３细胞为靶细胞，利用３Ｈ－ＴｄＲ掺入合成ＤＮＡ的方法。结果：５ｎｇ／ｍｌ牛血小板衍化生长因子可明显促进处于静止状态的ＢＡＬＢ／ｃ３Ｔ３细胞ＤＮＡ合成，３０ｎｇ／ｍｌ浓度使细胞ＤＮＡ合成达最高峰，并在２４ｈ最为显著；热处理对其致丝裂活性无影响；而经２－巯基乙醇处理后其活性基本丧失。结论：牛血小板衍化生长因子具有良好的致丝裂活性，耐热，２－巯基乙醇可使其丧失活性。

IGF-1介导MAPKs通路在C3H10T1/2细胞成骨分化中的作用

目的探究胰岛素样生长因子1(IGF-1)介导丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路在C3H10T1/2细胞成骨分化中的调控作用及机制。方法不同浓度IGF-1(0、5、10、20 ng/mL)培养C3H10T1/2细胞,碱性磷酸酶(ALP)与茜素红(ARS)染色检测ALP活性、钙盐沉积情况,qRT-PCR法检测成骨特性因子核心结合因子α-1(RUNX2)、成骨分化特异性因子骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)mRNA表达水平,Western Blot法检测MAPK通路蛋白磷酸化表达水平。对数期细胞分为空白组、IGF-1组、ERK通路抑制剂(PD98059)组、PD+IGF-1组、p38通路抑制剂(SB202192)组、SB+IGF-1组,qRT-PCR法检测成骨特性因子RUNX2、成骨分化特异性因子骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)mRNA表达水平。结果不同浓度IGF-1组ALP显色加深,ALP活性升高,钙盐结节形成增多,RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平升高,磷酸化ERK、p38、JNK蛋白表达增加,具有剂量效应(P<0.05)。与空白组比较,PD组、SB组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显降低(P<0.05),PD+IGF-1组、SB+IGF-1组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显升高(P<0.05);但与IGF-1组比较,PD+IGF-1组、SB+IGF-1组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论IGF-1促进C3H10T1/2细胞成骨分化,其作用机制可能与激活ERK信号通路和p38 MAPK信号通路有关。

MTT法检测Rh-bFGF提高Balb/c3T3细胞酶活性及促细胞增殖作用

以Ｂａｌｂ／ｃ３Ｔ３细胞为靶细胞，采用体外细胞培养方法，观察重组人碱性成纤维细胞生长因子的促分裂和提高酶活性作用。结果发现：重组人碱性成纤维细胞生长因子提高Ｂａｌｂ／ｃ３Ｔ３细胞酶活性的最佳作用浓度为６．２５ｎｇ／ｍＬ（μｇ／Ｌ），而促分裂增殖的最佳作用浓度为１００ｎｇ／ｍＬ（μｇ／Ｌ）。两者分别与应的对照组比较Ｐ＜０．０１，具有统计学意义。从而证实了重组人碱性成纤维细胞生长因子具有促分裂和增强酶活性的作用。

水体有机物和蓝藻对BALB/c3T3细胞的毒性作用

目的 研究水体有机物和蓝藻提取物的毒作用机理。方法 通过形态学观察、MTT法和中性红摄入法 ,从多个终点检测二者对BALB/c 3T3细胞的毒性作用。结果 二者达一定浓度时 ,可引起细胞形态改变 ;有机物在各个浓度、各个培养时相均可引起细胞的存活率下降 ,有明显的剂量 -时间 -效应关系 ;而藻毒素在低浓度短时间染毒下可引起细胞数目的增加 ,在高浓度或长时间作用下 ,细胞存活率却明显下降。结论 两种比色法可敏感检测有机物及藻毒素对BALB/c 3T3细胞的毒性作用 ,两者对细胞膜均有损伤作用 ;有机物对线粒体有损伤作用 ,而藻毒素对线粒体具有刺激和损伤的双重作用。

青石棉诱发BALB／c－3T3细胞恶性转化

用国产青石棉染毒ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞７２ｈ后继续培养５ｗｋ，观察其恶性转化．试验结果表明，从１．０μｇ·ｃｍ－２剂量组开始转化率比阴性对照组增高（Ｐ＜０．０５），且有剂量反应关系．将各剂量组转化灶的细胞分别作软琼脂生长试验，结果均有细胞增殖成克隆；将２０μｇ·ｃｍ－２剂量组－转化灶的细胞分别接种至裸鼠皮下，ｗｋ４即形成接种部位包块，所有包块经病理组织学检查证实为纤维肉瘤．本研究首次证明青石棉可诱发ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞恶性转化．

八氯二丙醚对BALB/c3T_3细胞恶性转化的研究

目的 检测八氯二丙醚 (S2 )的细胞恶性转化作用。方法 采用传代细胞系BALB/c3T3 细胞进行细胞毒性实验确定转化实验的剂量范围 ,再进行细胞转化实验并对转化细胞进行恶性行为鉴定。结果 S2 各剂量组均能诱发该细胞出现典型的细胞转化灶 ,并呈剂量 -反应关系 ;软琼脂培养证明转化细胞为恶性转化细胞。结论 S2 具有致BALB/c3T3 细胞恶性转化作用 ,有必要进行深入研究。

番茄红素或与维生素E合用对苯并(a)芘诱导BALB/c-3T3细胞转化的影响

[目的 ]观察不同浓度的番茄红素 (lycopene ,Ly)或与维生素E(VitaminE)合用对苯并 (a)芘 (benzo(a)pyrene ,BaP)诱导BALB/c 3T3细胞转化的影响。 [方法 ]每组 14瓶 ,每瓶接种 10 4个细胞 ,2 4h后加受试物及苯并 (a)芘 ,3d后 2瓶用结晶紫方法测定细胞毒性 ,其余 12瓶换含DMEM/F12转化表达培养液。每周换液 2次 ,2 5d后 10瓶固定 ,计数直径>2mm转化灶 ;其余 2瓶用定量的双抗体夹心ELISA方法测定细胞中p5 3蛋白的含量。 [结果 ]各种受试物及其混合物的细胞相对存活率均 >90 %。 0 .5、1、5 μmol/L的番茄红素可以阻止苯并 (a)芘诱导的细胞转化作用 ,细胞中p5 3蛋白的含量处在较低水平。然而当番茄红素浓度升高至 10 μmol/L时 ,番茄红素反而降低了抗转化的效果 ,细胞中p5 3蛋白的含量增加。维生素E存在能增强番茄红素抗苯并 (a)芘导致转化作用。 [结论 ]番茄红素阻止苯并 (a)芘诱导的细胞转化作用与其抗氧化作用方式相似 ,未发现番茄红素有类似 β 胡萝卜素的辅致癌作用 ;维生素E能增强番茄红素抗转化效果。

Balb/c 3T3细胞体外转化实验及其在环境致癌物检测上的应用

Balb/c 3T3细胞体外转化实验是利用Balb/c 3T3细胞在体外培养的环境下,模拟致癌物在动物体内致瘤过程进行致癌物筛选的一种技术,它的检测终点是正常细胞转化为恶性细胞时获得的恶性表型。本文就其方法的发展和改进,以及其在肿瘤启动剂和促癌剂检测上的应用进行了综述。

氯化镉在Balb/c3T3细胞转化过程中对细胞凋亡的影响

目的探讨氯化镉(CdCl2)在Balb/c 3T3细胞转化过程中对细胞凋亡的影响及其分子机制。方法N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)启动后,CdCl2持续处理Balb/c 3T3细胞14 d,建立两阶段细胞转化模型。苔盼蓝排染法检测CdCl2的细胞毒性,AnnexinV-FITC/PI双染色结合流式细胞仪检测细胞凋亡率,小鼠毒理基因芯片检测CdCl2促癌作用过程中的基因表达变化。结果1 mg/L MNNG启动后,324μg/L CdCl2持续处理能诱导细胞转化灶的出现。CdCl2处理2 d后细胞存活率降低,凋亡率显著升高。同时基因表达谱分析筛选出的差异表达基因中,有11个基因的功能与细胞凋亡有关,10个基因的功能与细胞抗氧化机制有关。结论CdCl2在促癌过程能诱导Balb/c 3T3细胞凋亡,同时影响凋亡和抗氧化相关基因的表达。

硫酸镍诱发BALB/c-3T3细胞转化

采用细胞灶法测定硫酸镍对ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞诱发转化的活性，结果表明当硫酸镍浓度≥１００μｍｏｌ／Ｌ时转化率增高（Ｐ＜０．０５），且有剂量反应关系。本文首次报道硫酸镍可诱发ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞转化，并与我们最近报道的氯化镍对该细胞的作用作了比较。

镍化物诱导的BALB/c-3T3转化细胞中端粒酶的表达

为了探讨镍化物诱导BALB/c- 3T3 细胞转化过程中的分子毒作用, 本研究采用TRAP—银染法检测镍对转化细胞端粒酶活性的影响。结果显示, 硫化镍、氯化镍和硫酸镍在中等细胞毒性反应剂量水平诱导的BALB/c- 3T3细胞转化过程中的端粒酶活性均表现为阳性。提示, 镍对细胞端粒酶的阳性表达与细胞转化作用密切相关,

结晶型硫化镍诱发BALB/c-3T3细胞恶性转化

采用细胞灶法测定结晶型硫化镍对ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３诱发细胞转化的活性，结果表明当硫化镍浓度≥０．２５μｇ／ｃｍ２时转化率增高（Ｐ＞０．０５），且有剂量反应关系。各剂量组转化灶细胞共６份经软琼脂培养试验均获阳性结果，而对照细胞则为阴性，提示硫化镍诱发的转化细胞具有锚着不依赖性，即恶性特征。

氯化镍诱发BALB/c-3T3细胞转化

为探讨氯化镍对不同靶细胞转化作用的差异，采用细胞灶法测定氯化镍对ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞诱发转化的活性，结果表明当氯化镍浓度在＞５０μｍｏｌ／Ｌ时转化率增高（Ｐ＜０．０５），且有剂量反应关系。本文报道氯化镍诱发ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞转化的实验结果。

某市大气悬浮颗粒提取物对BALB/c3TA细胞转化作用的研究

本研究采用ＢＡＬＢ／ｃ３Ｔ３细胞观察某市４个不同地区空气颗粒提取物转化克隆的作用。结果表明，当提取物含量为５μｇ／ｍｌ（Ｅ点样品为３μｇ／ｍｌ）时，转化克隆率与阴性对照出现显著性差异，并有良好的剂量－反应关系。表明大气悬浮颗粒有一定的诱导细胞恶性转化能力。

人参水溶性总蛋白对BALB/3T3细胞增殖以及对COLⅠ和TGF-β1基因表达的影响

目的观察不同质量浓度的人参水溶性总蛋白对小鼠胚胎成纤维(BALB/3T3)细胞增殖以及对Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)和转化生长因子β1(TGF-β1)基因表达的影响。方法应用细胞培养技术,对BALB/3T3细胞进行培养,以不同质量浓度的人参水溶性总蛋白加入BALB/3T3细胞中,采用噻唑蓝(MTT)法检测人参水溶性总蛋白对BALB/3T3细胞的增殖影响,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测COLⅠ和TGF-β1 mRNA的表达,采用蛋白印迹(Western blot)法检测COLⅠ和TGF-β1的蛋白表达。结果 MTT法显示,人参水溶性总蛋白能够促进小鼠BALB/3T3细胞的增殖,并且随着人参水溶性总蛋白质量浓度的增加,细胞的增殖率逐渐增加;RT-PCR显示,与对照组比较,随着给药质量浓度的增加,COLⅠ和TGF-β1的mRNA表达逐渐增加;Western blot显示,经过处理的BALB/3T3细胞,随着给药质量浓度的增加,COLⅠ和TGF-β1的蛋白表达量逐渐增加。结论人参水溶性总蛋白能够促进小鼠BALB/3T3细胞的增殖,其增殖作用在分子水平上与可能与调控COLⅠ和TGF-β1蛋白的表达有关。

芪丹颗粒通过促进CTRP3激活PI3K/AKT信号通路改善脂肪细胞胰岛素抵抗

【目的】探究芪丹颗粒抗脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)机制。【方法】采用棕榈酸培养法诱导3T3-L1脂肪细胞IR模型,设空白对照组,模型组,芪丹颗粒低、中、高剂量组,芪丹颗粒+C1q/TNF相关蛋白3(CTRP3)siRNA组。测定细胞上清中葡萄糖消耗量;采用酶联免疫吸附分析(ELISA)法测定细胞上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)含量;实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞CTRP3、TNF-α、IL-6、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)基因表达;Western Blot法检测细胞中CTRP3、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)的蛋白表达及其磷酸化水平。【结果】与模型组比较,芪丹颗粒中、高剂量组的葡萄糖消耗量升高并趋于空白对照组的70%~82%,TNF-α含量降低了25%~45%,IL-6含量下降了40%~55%,GLUT4 mRNA表达水平增加了50%,CTRP3 mRNA及蛋白表达水平增加了25%~40%(均P<0.05);与芪丹颗粒组比较,芪丹颗粒+CTRP3 siRNA组的葡萄糖消耗量和GLUT4 mRNA表达水平分别降低了33%和27%,IL-6和TNF-α的含量分别增加了42%和41%,p-PI3K和p-AKT的蛋白表达水平增加了190%和180%(均P<0.05)。【结论】芪丹颗粒可能通过促进CTRP3表达降低炎症反应和激活PI3K/AKT信号通路来提高IR 3T3-L1脂肪细胞的胰岛素敏感性,改善脂肪细胞IR。

菌多糖对Balb/c 3T_3、Hela、HEK-293细胞增殖的影响

用苯酚法提取JM109大肠杆菌、O157大肠杆菌、霍乱弧菌、伤寒杆菌及多头绒泡菌的菌多糖,用MTT法检测菌多糖在体外对Balb/c 3T_3(鼠成纤维细胞)、Hela(人上皮细胞)和HEK-293(人胚肾细胞)增殖的影响.结果表明,菌多糖在低质量浓度(低于40mg/L)时抑制Hela细胞和HEK-293细胞的增殖,但促进Balb/c 3T_3细胞的增殖;菌多糖超过一定质量浓度(80mg/L)时,对Balb/c 3T_3细胞的增殖作用和对Hela、HEK-293细胞增殖的抑制作用趋于饱和.

非促分裂酸性成纤维细胞生长因子抑制由放线菌素D诱导的Balb/c3T3细胞的凋亡

目的探讨非促分裂酸性成纤维细胞生长因子(nmaFGF)对放线菌素D(ActD)诱导Balb/c3T3成纤维细胞凋亡的保护作用。方法利用放线菌素D诱导3T3细胞凋亡的模型,将实验分为空白对照组、ActD处理组和nmaFGF处理组,采用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪两种分析方法测定nmaFGF对3T3细胞凋亡的影响。并利用Western免疫印迹检测nmaFGF作用于3T3细胞后Akt信号通路中p-Akt分子的表达。结果空白对照组的凋亡率为1.53%;ActD处理组3T3细胞发生明显的细胞凋亡,凋亡率为33.83%;而nmaFGF处理组的细胞凋亡受到显著抑制,凋亡率分别下降到18.97%,15.17%和12.83%,凋亡下降率分别为14.86%,18.66和21.00%。Western半定量检测结果显示,在0.1～10μg/ml的浓度下,随着nmaFGF剂量的增加,p-Akt的表达水平有所增加,3T3细胞的凋亡率随之下降。结论nmaFGF可以通过AKT途径显著抑制由放线菌素D诱导的Balb/c成纤维细胞的凋亡。