自拟补肾潜阳汤联合阿仑膦酸钠维D3治疗骨质疏松症疗效及对骨代谢和TMAO-NF-κB/NFATc1通路影响分析

【目的】分析自拟补肾潜阳汤联合阿仑膦酸钠维D3治疗骨质疏松症(osteoporosis,OP)的疗效及其对骨代谢和氧化三甲胺(TMAO)-核因子κB(NF-κB)/活化T细胞核因子c1(NFATc1)通路的影响。【方法】将2021年1月至2023年1月在台州市中西医结合医院就诊的102例脾肾阳虚型OP患者按随机数字表法随机分为观察组和西药组,每组各51例。西药组给予阿仑膦酸钠维D3治疗,观察组在西药组的基础上给予自拟补肾潜阳汤治疗,疗程为12周。观察2组患者治疗前后中医证候积分、Oswestry功能障碍指数(ODI)评分、疼痛程度视觉模拟量表(VAS)评分、骨代谢指标及TMAO-NF-κB/NFATc1通路相关因子水平的变化情况,评价2组患者的临床疗效和用药安全性。【结果】(1)治疗12周后,观察组的总有效率为96.08%(49/51),西药组为78.43%(40/51),组间比较(χ^(2)检验),观察组的疗效明显优于西药组(P<0.01)。(2)治疗后,2组患者的腰背冷痛、酸软乏力、少气懒言、头昏目眩等中医证候积分均较治疗前降低(P<0.05),且观察组的降低幅度均明显优于西药组(P<0.01)。(3)治疗后,2组患者的ODI评分和疼痛程度VAS评分均较治疗前降低(P<0.05),且观察组的降低幅度均明显优于西药组(P<0.01)。(4)治疗后,2组患者的血清骨钙素(BGP)水平均较治疗前升高(P<0.05),血清总Ⅰ型原胶原氨基端延长肽(PINP)、β胶原降解产物(β-CTX)水平均较治疗前降低(P<0.05),且观察组对血清BGP水平的升高幅度及对血清PINP、β-CTX水平的降低幅度均明显优于西药组(P<0.01)。(5)治疗后,2组患者的血清TMAO、NF-κB、NFATc1水平均较治疗前降低(P<0.05),且观察组的降低幅度均明显优于西药组(P<0.01)。(6)观察组的不良反应总发生率为5.88%(3/51),西药组为9.80%(5/51),组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】自拟补肾潜阳汤联合阿仑膦酸钠维D3治疗脾肾阳虚型OP患者疗效确切,可有效缓解腰背冷痛等症状,减轻功能障碍程度,改善骨代谢,抑制血清TMAO、NF-κB、NFATc1高表达,且未引发严重不良反应,具有较高的安全性。

IGF-1介导MAPKs通路在C3H10T1/2细胞成骨分化中的作用

目的探究胰岛素样生长因子1(IGF-1)介导丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路在C3H10T1/2细胞成骨分化中的调控作用及机制。方法不同浓度IGF-1(0、5、10、20 ng/mL)培养C3H10T1/2细胞,碱性磷酸酶(ALP)与茜素红(ARS)染色检测ALP活性、钙盐沉积情况,qRT-PCR法检测成骨特性因子核心结合因子α-1(RUNX2)、成骨分化特异性因子骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)mRNA表达水平,Western Blot法检测MAPK通路蛋白磷酸化表达水平。对数期细胞分为空白组、IGF-1组、ERK通路抑制剂(PD98059)组、PD+IGF-1组、p38通路抑制剂(SB202192)组、SB+IGF-1组,qRT-PCR法检测成骨特性因子RUNX2、成骨分化特异性因子骨桥蛋白(OPN)、骨钙蛋白(OCN)mRNA表达水平。结果不同浓度IGF-1组ALP显色加深,ALP活性升高,钙盐结节形成增多,RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平升高,磷酸化ERK、p38、JNK蛋白表达增加,具有剂量效应(P<0.05)。与空白组比较,PD组、SB组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显降低(P<0.05),PD+IGF-1组、SB+IGF-1组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显升高(P<0.05);但与IGF-1组比较,PD+IGF-1组、SB+IGF-1组C3H10T1/2细胞RUNX2、OPN、OCN mRNA表达水平明显降低(P<0.05)。结论IGF-1促进C3H10T1/2细胞成骨分化,其作用机制可能与激活ERK信号通路和p38 MAPK信号通路有关。

MTT法检测Rh-bFGF提高Balb/c3T3细胞酶活性及促细胞增殖作用

以Ｂａｌｂ／ｃ３Ｔ３细胞为靶细胞，采用体外细胞培养方法，观察重组人碱性成纤维细胞生长因子的促分裂和提高酶活性作用。结果发现：重组人碱性成纤维细胞生长因子提高Ｂａｌｂ／ｃ３Ｔ３细胞酶活性的最佳作用浓度为６．２５ｎｇ／ｍＬ（μｇ／Ｌ），而促分裂增殖的最佳作用浓度为１００ｎｇ／ｍＬ（μｇ／Ｌ）。两者分别与应的对照组比较Ｐ＜０．０１，具有统计学意义。从而证实了重组人碱性成纤维细胞生长因子具有促分裂和增强酶活性的作用。

水体有机物和蓝藻对BALB/c3T3细胞的毒性作用

目的 研究水体有机物和蓝藻提取物的毒作用机理。方法 通过形态学观察、MTT法和中性红摄入法 ,从多个终点检测二者对BALB/c 3T3细胞的毒性作用。结果 二者达一定浓度时 ,可引起细胞形态改变 ;有机物在各个浓度、各个培养时相均可引起细胞的存活率下降 ,有明显的剂量 -时间 -效应关系 ;而藻毒素在低浓度短时间染毒下可引起细胞数目的增加 ,在高浓度或长时间作用下 ,细胞存活率却明显下降。结论 两种比色法可敏感检测有机物及藻毒素对BALB/c 3T3细胞的毒性作用 ,两者对细胞膜均有损伤作用 ;有机物对线粒体有损伤作用 ,而藻毒素对线粒体具有刺激和损伤的双重作用。

青石棉诱发BALB／c－3T3细胞恶性转化

用国产青石棉染毒ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞７２ｈ后继续培养５ｗｋ，观察其恶性转化．试验结果表明，从１．０μｇ·ｃｍ－２剂量组开始转化率比阴性对照组增高（Ｐ＜０．０５），且有剂量反应关系．将各剂量组转化灶的细胞分别作软琼脂生长试验，结果均有细胞增殖成克隆；将２０μｇ·ｃｍ－２剂量组－转化灶的细胞分别接种至裸鼠皮下，ｗｋ４即形成接种部位包块，所有包块经病理组织学检查证实为纤维肉瘤．本研究首次证明青石棉可诱发ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞恶性转化．

八氯二丙醚对BALB/c3T_3细胞恶性转化的研究

目的 检测八氯二丙醚 (S2 )的细胞恶性转化作用。方法 采用传代细胞系BALB/c3T3 细胞进行细胞毒性实验确定转化实验的剂量范围 ,再进行细胞转化实验并对转化细胞进行恶性行为鉴定。结果 S2 各剂量组均能诱发该细胞出现典型的细胞转化灶 ,并呈剂量 -反应关系 ;软琼脂培养证明转化细胞为恶性转化细胞。结论 S2 具有致BALB/c3T3 细胞恶性转化作用 ,有必要进行深入研究。

结晶型硫化镍诱发BALB/c-3T3细胞恶性转化

采用细胞灶法测定结晶型硫化镍对ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３诱发细胞转化的活性，结果表明当硫化镍浓度≥０．２５μｇ／ｃｍ２时转化率增高（Ｐ＞０．０５），且有剂量反应关系。各剂量组转化灶细胞共６份经软琼脂培养试验均获阳性结果，而对照细胞则为阴性，提示硫化镍诱发的转化细胞具有锚着不依赖性，即恶性特征。

氯化镉在Balb/c3T3细胞转化过程中对细胞凋亡的影响

目的探讨氯化镉(CdCl2)在Balb/c 3T3细胞转化过程中对细胞凋亡的影响及其分子机制。方法N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)启动后,CdCl2持续处理Balb/c 3T3细胞14 d,建立两阶段细胞转化模型。苔盼蓝排染法检测CdCl2的细胞毒性,AnnexinV-FITC/PI双染色结合流式细胞仪检测细胞凋亡率,小鼠毒理基因芯片检测CdCl2促癌作用过程中的基因表达变化。结果1 mg/L MNNG启动后,324μg/L CdCl2持续处理能诱导细胞转化灶的出现。CdCl2处理2 d后细胞存活率降低,凋亡率显著升高。同时基因表达谱分析筛选出的差异表达基因中,有11个基因的功能与细胞凋亡有关,10个基因的功能与细胞抗氧化机制有关。结论CdCl2在促癌过程能诱导Balb/c 3T3细胞凋亡,同时影响凋亡和抗氧化相关基因的表达。

人参水溶性总蛋白对BALB/3T3细胞增殖以及对COLⅠ和TGF-β1基因表达的影响

目的观察不同质量浓度的人参水溶性总蛋白对小鼠胚胎成纤维(BALB/3T3)细胞增殖以及对Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)和转化生长因子β1(TGF-β1)基因表达的影响。方法应用细胞培养技术,对BALB/3T3细胞进行培养,以不同质量浓度的人参水溶性总蛋白加入BALB/3T3细胞中,采用噻唑蓝(MTT)法检测人参水溶性总蛋白对BALB/3T3细胞的增殖影响,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测COLⅠ和TGF-β1 mRNA的表达,采用蛋白印迹(Western blot)法检测COLⅠ和TGF-β1的蛋白表达。结果 MTT法显示,人参水溶性总蛋白能够促进小鼠BALB/3T3细胞的增殖,并且随着人参水溶性总蛋白质量浓度的增加,细胞的增殖率逐渐增加;RT-PCR显示,与对照组比较,随着给药质量浓度的增加,COLⅠ和TGF-β1的mRNA表达逐渐增加;Western blot显示,经过处理的BALB/3T3细胞,随着给药质量浓度的增加,COLⅠ和TGF-β1的蛋白表达量逐渐增加。结论人参水溶性总蛋白能够促进小鼠BALB/3T3细胞的增殖,其增殖作用在分子水平上与可能与调控COLⅠ和TGF-β1蛋白的表达有关。

硫酸镍诱发BALB/c-3T3细胞转化

采用细胞灶法测定硫酸镍对ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞诱发转化的活性，结果表明当硫酸镍浓度≥１００μｍｏｌ／Ｌ时转化率增高（Ｐ＜０．０５），且有剂量反应关系。本文首次报道硫酸镍可诱发ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３细胞转化，并与我们最近报道的氯化镍对该细胞的作用作了比较。

BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验预测化合物急性毒性的验证研究

目的探讨BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验预测化合物急性毒性的可行性,为建立细胞毒性试验预测急性毒性试验平台,开展化合物急性毒性筛查提供理论依据。方法选取11种受试物,开展BALB/c 3T3中性红摄取试验,以IC50结果与急性毒性试验LD50进行线性回归,将拟合的曲线与RC模型曲线进行比较。同时,将受试物的IC50值代入RC模型方程获得急性毒性LD50的预测值,依据GHS急性毒性分级法进行分级,与急性毒性试验的LD50和分级进行比较,同时对结果进行相关性分析。结果阳性对照十二烷基硫酸钠的结果符合试验质量控制的要求。受试物拟合曲线与RC模型曲线几乎平行,11种受试物中,LD50预测值与急性经口毒性试验分级一致的有9种。BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验IC50值与急性毒性试验LD50值存在相关性(Pearson r=0.997,P<0.01)。受试物分级结果与实际分级具有等级相关性(Spearman r=0.905,P<0.01)。结论在本试验体系下,BALB/c 3T3细胞中性红摄取试验能够较好地预测急性毒性。既可以作为化合物急性毒性的快速初筛,又可为动物试验起始剂量的选择提供依据。

镍化物诱导的BALB/c-3T3转化细胞中端粒酶的表达

为了探讨镍化物诱导BALB/c- 3T3 细胞转化过程中的分子毒作用, 本研究采用TRAP—银染法检测镍对转化细胞端粒酶活性的影响。结果显示, 硫化镍、氯化镍和硫酸镍在中等细胞毒性反应剂量水平诱导的BALB/c- 3T3细胞转化过程中的端粒酶活性均表现为阳性。提示, 镍对细胞端粒酶的阳性表达与细胞转化作用密切相关,

某市大气悬浮颗粒提取物对BALB/c3TA细胞转化作用的研究

本研究采用ＢＡＬＢ／ｃ３Ｔ３细胞观察某市４个不同地区空气颗粒提取物转化克隆的作用。结果表明，当提取物含量为５μｇ／ｍｌ（Ｅ点样品为３μｇ／ｍｌ）时，转化克隆率与阴性对照出现显著性差异，并有良好的剂量－反应关系。表明大气悬浮颗粒有一定的诱导细胞恶性转化能力。

C3H/He鼠头颈鳞癌转移淋巴结内CD8^(+)T细胞的关键基因、通路和免疫检查点表达分析

目的:探讨C3H/He鼠头颈鳞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)转移淋巴结内CD8^(+)T细胞的关键基因、通路和抑制性免疫检查点的表达。方法:应用头颈鳞癌SCC-7细胞系,构建免疫健全C3H/He小鼠腘窝淋巴结转移模型,利用免疫荧光染色技术确定淋巴结转移状态。利用流式细胞术分别分选出正常和转移淋巴结内的CD8^(+)T细胞,进行转录组测序分析,筛选出差异表达基因,并进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析。采用流式细胞术和多重免疫荧光组织化学技术,检测荷瘤小鼠转移淋巴结内CD8^(+)T细胞的4个免疫检查点的表达水平。采用SPSS 26.0软件包对数据进行统计学分析。结果:足垫注射SCC-7细胞4周后,C3H/He小鼠出现明显的腘窝引流淋巴结转移。对正常淋巴结和转移淋巴结内的CD8^(+)T细胞进行转录组测序分析,筛选出差异表达基因912个,包括3个表达上调的抑制性免疫检查点相关基因Pdcd1、Lag3和Tigit。KEGG网络分析筛选出8个上调的肿瘤相关信号通路,包括Toll样受体信号通路、NF Kappa-B信号通路、TNF信号通路、MAPK信号通路、IL-17信号通路、NOD样受体信号通路、肿瘤中PD-L1和PD-1免疫检查点通路和p53信号通路。流式细胞术显示,小鼠转移淋巴结内CD8^(+)T细胞出现PD-1和TIM-3蛋白高表达,多重免疫荧光进一步在头颈鳞癌患者的肿瘤转移淋巴结中确认CD8^(+)T细胞高表达PD-1。结论:小鼠肿瘤转移淋巴结内CD8^(+)T细胞的肿瘤相关信号通路显著激活,小鼠和头颈鳞癌患者转移淋巴结内CD8^(+)T的PD-1表达水平显著增高,靶向CD8^(+)T细胞的免疫治疗有可能成为头颈鳞癌淋巴结转移防治的新策略。

芪丹颗粒通过促进CTRP3激活PI3K/AKT信号通路改善脂肪细胞胰岛素抵抗

【目的】探究芪丹颗粒抗脂肪细胞胰岛素抵抗(IR)机制。【方法】采用棕榈酸培养法诱导3T3-L1脂肪细胞IR模型,设空白对照组,模型组,芪丹颗粒低、中、高剂量组,芪丹颗粒+C1q/TNF相关蛋白3(CTRP3)siRNA组。测定细胞上清中葡萄糖消耗量;采用酶联免疫吸附分析(ELISA)法测定细胞上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)含量;实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞CTRP3、TNF-α、IL-6、葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)基因表达;Western Blot法检测细胞中CTRP3、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)的蛋白表达及其磷酸化水平。【结果】与模型组比较,芪丹颗粒中、高剂量组的葡萄糖消耗量升高并趋于空白对照组的70%~82%,TNF-α含量降低了25%~45%,IL-6含量下降了40%~55%,GLUT4 mRNA表达水平增加了50%,CTRP3 mRNA及蛋白表达水平增加了25%~40%(均P<0.05);与芪丹颗粒组比较,芪丹颗粒+CTRP3 siRNA组的葡萄糖消耗量和GLUT4 mRNA表达水平分别降低了33%和27%,IL-6和TNF-α的含量分别增加了42%和41%,p-PI3K和p-AKT的蛋白表达水平增加了190%和180%(均P<0.05)。【结论】芪丹颗粒可能通过促进CTRP3表达降低炎症反应和激活PI3K/AKT信号通路来提高IR 3T3-L1脂肪细胞的胰岛素敏感性,改善脂肪细胞IR。

血清ANGPTL3、NFATc1水平与脑梗死患者病情严重程度、预后的关系

目的探究血管生成素样蛋白-3(ANGPTL3)、活化T细胞核因子c1(NFATc1)在脑梗死患者血清中的表达以及与脑梗死患者病情严重程度、预后的关系。方法收集唐山工人医院2021年1月至2023年1月期间进行治疗的180例脑梗死患者(脑梗死组)作为研究对象;根据NIHSS评分将患者分为轻度组(n=68),中度组(n=76),重度组(n=36);根据患mRS评分将患者分为预后良好组(n=117)和预后不良组(n=63);另选取180例同期门诊健康体检者作为对照组。比较各组血清ANGPTL3、NFATc1水平;多因素logistic回归分析脑梗死患者预后的影响因素;ROC曲线分析血清ANGPTL3、NFATc1对脑梗死患者预后的预测价值。结果脑梗死组血清ANGPTL3、NFATc1水平高于对照组(P<0.05);轻度组、中度组、重度组血清ANGPTL3、NFATc1水平依次显著升高(P<0.05);预后不良组脑梗死患者脑梗死体积、白细胞计数、ANGPTL3、NFATc1水平显著高于预后良好组(P<0.05)。回归分析显示脑梗死体积、白细胞计数、ANGPTL3、NFATc1是脑梗死患者预后的影响因素(P<0.05)。ANGPTL3、NFATc1二者联合预测脑梗死患者预后效能优于各自单独预测(Z联合检测-ANGPTL3=3.345、Z联合检测-NFATc1=2.898,P=0.001、0.004)。结论脑梗死患者血清ANGPTL3、NFATc1水平显著升高,且随着病情严重程度的增加而显著升高,二者联合对脑梗死患者预后有较高的预测价值。

牛血小板衍化生长因子的生物学活性研究——对BALB/c 3T3细胞DNA合成的影响

目的：检测牛血小板衍化生长因子的致丝裂活性。方法：以ＢＡＬＢ／ｃ３Ｔ３细胞为靶细胞，利用３Ｈ－ＴｄＲ掺入合成ＤＮＡ的方法。结果：５ｎｇ／ｍｌ牛血小板衍化生长因子可明显促进处于静止状态的ＢＡＬＢ／ｃ３Ｔ３细胞ＤＮＡ合成，３０ｎｇ／ｍｌ浓度使细胞ＤＮＡ合成达最高峰，并在２４ｈ最为显著；热处理对其致丝裂活性无影响；而经２－巯基乙醇处理后其活性基本丧失。结论：牛血小板衍化生长因子具有良好的致丝裂活性，耐热，２－巯基乙醇可使其丧失活性。

菌多糖对Balb/c 3T_3、Hela、HEK-293细胞增殖的影响

用苯酚法提取JM109大肠杆菌、O157大肠杆菌、霍乱弧菌、伤寒杆菌及多头绒泡菌的菌多糖,用MTT法检测菌多糖在体外对Balb/c 3T_3(鼠成纤维细胞)、Hela(人上皮细胞)和HEK-293(人胚肾细胞)增殖的影响.结果表明,菌多糖在低质量浓度(低于40mg/L)时抑制Hela细胞和HEK-293细胞的增殖,但促进Balb/c 3T_3细胞的增殖;菌多糖超过一定质量浓度(80mg/L)时,对Balb/c 3T_3细胞的增殖作用和对Hela、HEK-293细胞增殖的抑制作用趋于饱和.

回火对E101T1-K3C熔敷金属显微组织和力学性能的影响

采用E101T1-K3C低合金高强钢药芯焊丝对EH620钢进行焊接。焊接接头分别在460℃、580℃进行保温1 h回火热处理,应用金相显微镜、材料试验机、冲击试验机、扫描电子显微镜等对试样进行分析与测量。结果表明:焊态下熔敷金属显微组织为条状铁素体+少量贝氏体+第二相颗粒,熔合区显微组织为片状铁素体+马氏体+第二相颗粒。焊接接头经过460℃×1 h焊后回火处理后,焊缝区的显微组织为铁素体+少量贝氏体+第二相颗粒,熔合区组织为铁素体+回火屈氏体+第二相颗粒。焊接接头经过580℃×1 h回火处理后,焊缝及熔合区显微组织均为铁素体+回火索氏体+第二相颗粒;熔敷金属屈服强度由725 MPa下降589 MPa,-40℃冲击吸收能量KV2由71 J提高到114 J;维氏硬度值在焊接接头焊缝及热影响区的分布趋向一致,焊接接头具有理想的力学性能。

非促分裂酸性成纤维细胞生长因子抑制由放线菌素D诱导的Balb/c3T3细胞的凋亡

目的探讨非促分裂酸性成纤维细胞生长因子(nmaFGF)对放线菌素D(ActD)诱导Balb/c3T3成纤维细胞凋亡的保护作用。方法利用放线菌素D诱导3T3细胞凋亡的模型,将实验分为空白对照组、ActD处理组和nmaFGF处理组,采用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪两种分析方法测定nmaFGF对3T3细胞凋亡的影响。并利用Western免疫印迹检测nmaFGF作用于3T3细胞后Akt信号通路中p-Akt分子的表达。结果空白对照组的凋亡率为1.53%;ActD处理组3T3细胞发生明显的细胞凋亡,凋亡率为33.83%;而nmaFGF处理组的细胞凋亡受到显著抑制,凋亡率分别下降到18.97%,15.17%和12.83%,凋亡下降率分别为14.86%,18.66和21.00%。Western半定量检测结果显示,在0.1～10μg/ml的浓度下,随着nmaFGF剂量的增加,p-Akt的表达水平有所增加,3T3细胞的凋亡率随之下降。结论nmaFGF可以通过AKT途径显著抑制由放线菌素D诱导的Balb/c成纤维细胞的凋亡。