Aβ_(1-42)对大鼠基底前脑神经元K_(ATP)通道各亚基蛋白表达的影响

目的研究β淀粉样蛋白(Aβ1-42)对原代培养基底前脑胆碱能神经元ATP敏感性钾通道(KATP)各亚基蛋白表达的影响,探讨阿尔茨海默病发病的细胞毒性分子机制。方法运用细胞原代培养的方法培养大鼠基底前脑胆碱能神经元并进行鉴定,用2μmmol/L的Aβ1-42对原代培养细胞进行干预,免疫荧光双染及免疫印记观察干预后不同时间(分别为0,24,72 h)细胞KATP通道各亚基Kir6.1、Kir6.2和SUR1、SUR2蛋白表达水平的变化。结果与正常对照组比较,Aβ1-42作用胆碱能神经元24 h后,KATP通道亚基Kir6.1及SUR2蛋白表达显著增多(P<0.05),而亚基Kir6.2及SUR1蛋白表达无明显变化。但Aβ1-42作用时间达72 h后,KATP通道各个亚基蛋白表达均显著升高(P<0.05)。结论Aβ1-42作用胆碱能神经元不同的时间段(24 h和72 h),细胞KATP通道各亚基蛋白表达有不同程度的增加,且增加速度不一致。可能由此改变KATP通道的结构和功能,从而影响Aβ1-42的神经细胞毒性作用。

左旋丁基苯酞对Aβ_(1-42)诱导的体外原代培养神经元损伤的影响

目的研究左旋丁基苯酞对β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的原代培养海马及基底前脑神经元损伤的保护作用。方法运用细胞原代培养的方法培养大鼠基底前脑及海马胆碱能神经元并进行鉴定,用2μmol/L的Aβ1-42建立神经细胞损伤模型,将细胞分为对照组、Aβ1-42模型组和Aβ1-42+左旋丁基苯酞(0.1、1、10μmmol/L)处理的低、中、高剂量组。倒置显微镜下观察给药前后细胞形态变化,Western Blot检测NF-κB及nNOS的含量。结果与对照组比较,Aβ1-42作用于原代神经元48 h后,神经细胞形态发生显著改变,NF-κB表达增高,nNOS表达降低(P均<0.05),低、中、高剂量的左旋丁基苯酞能够显著改善细胞形态,抑制NF-κB活化,提高nNOS的表达(P均<0.05)。结论左旋丁基苯酞对Aβ1-42诱导的原代神经元保护作用可能与其抑制NF-κB活化,上调nNOS的表达有关。

尼古丁对培养大鼠基底前脑胆碱能神经元生长存活及TrkA表达的影响

目的 探讨不同浓度的尼古丁对原代培养的大鼠基底前脑胆碱能神经元的高亲和力神经生长因子受体(TrkA)表达的影响 ,结合细胞形态学观察和四甲基偶氮唑盐 (MTT)实验了解TrkA表达变化对细胞生长的影响。方法 运用细胞原代培养的方法培养大鼠基底前脑胆碱能神经元并进行鉴定 ,用 0 .0 1,0 .1,1,10和 10 0 μmol/L五个终浓度的尼古丁对原代培养细胞进行干预 ,观察细胞的形态变化 ,MTT实验观察细胞的活力 ,提取细胞总RNA行RT PCR观察神经元TrkAmRNA表达的变化 ,免疫细胞学化观察TrkA表达的变化 ;用 10 μmol/L终浓度的尼古丁以不同的时间 (分别为 8,2 4 ,4 8h)进行干预 ,观察不同时间干预下上述指标的变化。结果 在 0 .0 1～ 10 μmol/L浓度范围内的尼古丁呈剂量依赖性地增加神经元TrkA的表达 ,10 0 μmol/L浓度的尼古丁则引起TrkA表达的下降 ,前浓度范围的尼古丁可以剂量依赖性地增加原代培养的神经元细胞突起数量、平均突起长度和最长突起长度 ,增加MTT法测得的OD值 ,10 0 μmol/L终浓度尼古丁则产生相反的作用。 结论 在一定浓度范围内 ,尼古丁可以增加原代培养的胆碱能神经元TrkA表达 ,对神经元可能具有营养作用。