GC法同时测定藏药八味沉香散中挥发性指标成分含量

目的建立气相色谱(GC)法同时测定藏药八味沉香散中挥发性指标成分乙酸辛酯、苄基丙酮、肉豆蔻醚、去氢木香内酯含量的方法。方法采用GC法,以乙酸辛酯、苄基丙酮、肉豆蔻醚、去氢木香内酯作为指标成分,应用SH-WAX毛细管柱(30 m×0.25 mm,0.25μm),柱温程序升温,载气为氮气,进样口温度为220℃,检测器温度为240℃,分流进样,进样量为1μL。结果乙酸辛酯、苄基丙酮、肉豆蔻醚、去氢木香内酯质量浓度分别在12.44~124.43μg·mL^(-1)、2.90~29.01μg·mL^(-1)、15.95~159.45μg·mL^(-1)、15.62~156.15μg·mL^(-1)范围内与峰面积呈良好的线性关系(r≥0.9995);平均回收率分别为100.40%(RSD=1.55%)、97.80%(RSD=1.41%)、99.50%(RSD=0.77%)、99.50%(RSD=0.85%)(n=6)。结论该方法专属性、精密性、重复性、准确性好,可用于八味沉香散中挥发性指标成分的含量测定。

基于网络药理学与动物实验探究八味沉香散对阿霉素心脏损伤的保护作用及机制

目的基于网络药理学与动物实验探究八味沉香散对阿霉素心脏损伤的保护作用及机制。方法应用网络药理学与动物实验学方法开展研究。借助TCMSP数据库筛选八味沉香散入血成分及靶点;利用OMIM、GeneCards等数据库检索疾病靶点;取交集靶点构建PPI网络。做GO以及KEGG富集分析,并构建“入血成分-关键靶点-作用通路-关键疾病”网络。建立阿霉素心脏损伤大鼠模型。测心电图以及大鼠左心功能;检测血清ALT、AST、LDH、CK-MB含量;检测心肌组织PI3K/AKT信号通路及凋亡相关蛋白表达情况;观察心肌超微结构。结果筛选八味沉香散入血靶点1897个、阿霉素心脏损伤靶点1598个,得到八味沉香散与阿霉素心脏损伤交集靶点198个。筛选AKT1、STAT3、EGFR、SRC、BCL2、TNF、MAPK1、MAPK3、ESR1、CASP3等为关键靶点。通过GO与KEGG分析进一步发现,PI3K/AKT可能为八味沉香散改善阿霉素心脏损伤的重要信号通路。检测结果显示,八味沉香散可改善阿霉素心脏损伤大鼠左心功能,降低血清ALT、AST、LDH、CK-MB含量;上调大鼠心肌组织PI3K、AKT、BCL2蛋白,下调BAX、CASP3蛋白;改善心肌超微结构。结论八味沉香散可有效改善阿霉素心脏损伤大鼠的心脏功能,其可能作用机制为,调节PI3K/AKT信号通路,抑制细胞凋亡。

八味沉香散对心肌缺血大鼠的保护作用

目的观察八味沉香散对异丙肾上腺素所致实验大鼠心肌损伤的保护作用。方法给予SD大鼠po八味沉香散,连续10 d,第8天起ip异丙肾上腺素5 mg.kg-1,qd,连续3 d。第1次注射异丙肾上腺素后,记录Ⅱ导联心电图。末次注射异丙肾上腺素24 h,后测定心肌梗死范围。结果八味沉香散组的心电图ST段移位、T波抬高、心率变化值和心肌梗死范围明显低于生理盐水组。结论八味沉香散对异丙肾上腺素引起的心肌缺血损伤有保护作用。

藏药八味沉香散对低氧大鼠学习记忆的影响研究

目的研究在低氧下藏药八味沉香散对大鼠学习、记忆能力的影响。方法应用MORRIS水迷宫的学习记忆动物模型来观测藏药八味沉香散对低氧下大鼠空间学习、记忆能力的影响,并通过电镜图像分析和细胞形态计量研究藏药八味沉香散对神经突触可塑性的影响。结果各低氧组大鼠均出现空间学习记忆障碍,表现为MORRIS水迷宫测试潜伏期延长(P<0.05),各低氧组第1天潜伏期均明显延长,而低氧Rg1药物组和低氧BCP药物组与低氧对照组相比潜伏期逐渐缩短(P<0.05),但潜伏期都长于常氧下各组。电镜下观察到各低氧组的海马CA3区PSD厚度变薄、突触间隙增宽、突触活性区长度缩短,与各常氧组相比差异有显著性(P<0.05),低氧Rg1药物组和低氧BCP药物组与低氧对照组相比PSD厚度较厚、突触间隙较窄。结论在低氧下海马CA3区突触形态结构的变化是导致学习记忆功能减退的形态学基础,八味沉香散对低氧下大鼠海马CA3区突触形态结构的维持有一定的保护作用,对大鼠空间学习记忆有一定的促进作用。

藏药八味沉香散对急性低氧大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨藏药八味沉香散对低氧大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 W istar大鼠随机分5组,为常氧对照组、低氧组和八味沉香散高、中、低剂量组。将低氧组和八味沉香散高、中、低剂量组放入模拟海拔5 500 m的低氧低压舱内;常氧对照组和低氧组每天0.9%生理盐水灌胃,八味沉香散组每天以成人剂量的20倍、15倍和10倍灌胃,连续给药14 d,制脑缺血再灌注损伤大鼠模型,测血清血红蛋白(Hb)、红细胞压积(Hct)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET-1)的值。结果八味沉香散不同剂量组可显著降低ET-1含量(P<0.05),同时MDA、SOD、GSH、GSH-Px和NO与低氧组比较也有显著性差异(P<0.05)。结论八味沉香散在低氧环境下对脑缺血再灌注损伤具有保护作用。

藏药八味沉香散50%醇提部位对急性心肌缺血大鼠作用的研究

目的:研究八味沉香散50%醇提部位对垂体后叶素诱发的急性心肌缺血大鼠的作用。方法:采用大鼠舌下静脉注射垂体后叶素复制急性心肌缺血模型,实验大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组、八味沉香散50%醇提液大、小剂量组。观察八味沉香散50%醇提液对大鼠注射垂体后叶素后血清乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)和心肌超微结构的影响。结果:与模型对照组比较,八味沉香散50%醇提液预处理后可明显减少大鼠血CK和LDH的释放(均P<0.01),并减轻心肌超微结构线粒体的损伤。结论:八味沉香散50%醇提液对垂体后叶素所致大鼠急性心肌缺血具有一定的保护作用,而抗心肌缺血的作用可能与其保护心肌线粒体结构,改善缺血心肌的能量代谢有关。

八味沉香散对缺血再灌注损伤心肌细胞活性氧及钙离子水平的影响

目的观察八味沉香散对缺血再灌注损伤人心肌细胞的活性氧、钙离子浓度的影响。方法培养人心肌细胞,随机分为9组:正常组、缺血再灌注组(I/R组)、八味沉香散水提物高、中、低剂量组(60、30、15μg/mL)、八味沉香散醇提物高、中、低剂量组(30、15、7.5μg/mL)、曲美他嗪组(60μg/mL)。以体外缺氧缺糖再复氧复糖建立缺血再灌注损伤模型,检测细胞内活性氧、胞浆和线粒体钙离子浓度。结果模型组细胞受到缺血再灌注损伤刺激后,细胞内活性氧、胞浆和线粒体内钙离子浓度明显增高,八味沉香提取物(水提、醇提)较模型组则明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论八味沉香散对缺氧再灌注损伤HCM的大量活性氧产生和钙超载具有抑制作用。

HPLC测定藏成药仲泽八味沉香散中没食子酸的含量

目的建立测定藏成药仲泽八味沉香散中没食子酸含量的方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为Kromasil-C18（250mm×4．6mm，5μm），流动相为甲醇-0．02％磷酸（5：95），流速1ml·min^-1，检测波长274nm，柱温30℃。结果没食子酸在0．0618—0．3090μg范围内，呈良好的线性关系（r=0．9998），平均回收率为98．79％，RSD=0．77％。结论所建方法简便、快速，重复性好，能够控制仲泽八味沉香散的质量。

八味沉香散对缺血再灌注损伤心肌细胞SOD、MDA和凋亡影响的研究

目的观察八味沉香散对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞H9C2 SOD活力、MDA浓度以及细胞凋亡的影响。方法H9C2细胞随机分为6组:正常组、缺血再灌注组(I/R组)、八味沉香散提取物(水提)高、中、低剂量组(240、120、60μg/mL)、曲美他嗪组(240μg/mL)。以体外缺糖缺氧再复糖复氧建立缺血再灌注损伤模型,WST-1法检测细胞内SOD活力,TBA法检测MDA浓度,Hoechst 33258染色法检测细胞凋亡水平。结果模型组细胞受到缺血再灌注损伤刺激后,细胞内MDA浓度明显增高,SOD活力下降,荧光显微镜下有大量致密或碎块状的浓染细胞核,半定量图像分析平均光密度增高(P<0.01),与正常组比较有显著差异。与模型组比较,八味沉香散提取物中的MDA含量降低(P<0.01),而SOD活力显著增高(P<0.05,P<0.01),荧光显微镜下的致密浓染细胞核明显减少、半定量图像分析平均光密度显著降低(P<0.01)。结论八味沉香散能够减少脂质过氧化物(MDA)生成,提高具有抗氧化能力SOD的活力,抑制细胞凋亡。推测八味沉香散抗缺氧再灌注损伤是通过减少应激状态下活性氧化自由基的形成,从而阻断活性氧化自由基诱发细胞凋亡的直接和间接途径,达到保护心肌细胞的作用。

藏药八味沉香散对H_2O_2所致乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用

目的探讨八味沉香散对过氧化氢(H2O2)所致乳鼠心肌细胞氧化应激损伤的保护作用。方法 SD乳鼠心肌细胞原代培养,H2O2诱导心肌细胞氧化应激损伤,用不同剂量藏药八味沉香散处理24 h后,测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、过氧化氢酶(CAT)的含量;同时检测培养液中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性。结果八味沉香散可明显减轻H2O2所致乳鼠心肌细胞培养液中LDH、CK和CAT的释放量,同时能够升高SOD、GSH-Px活性,降低MDA活性。结论八味沉香散对H2O2所致乳鼠心肌细胞氧化应激损伤有明显保护作用。

八味沉香散对肾缺血再灌注损伤的抗氧化作用研究

目的探讨八味沉香散对实验性大鼠肾缺血再灌注损伤的抗氧化作用。方法在大鼠肾动脉缺血再灌注模型上观察八味沉香散对肾缺血再灌注引起的血清丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、一氧化氮(NO)含量及肾组织形态学变化的影响。结果八味沉香散组MDA、SOD、GSH、GSH-Px与再灌组比较有明显差异(P<0.05),NO含量与再灌组比较有明显差异(P<0.05),肾组织病变较再灌组减轻。结论八味沉香散在肾缺血再灌注损伤中具有抗氧化作用。

藏药八味沉香散95%醇提液对垂体后叶素致心肌缺血损伤大鼠的血流动力学的影响

目的研究藏药八味沉香散95%醇提液对垂体后叶素(PIT)诱发大鼠急性心肌缺血后血流动力学的影响。方法采用大鼠舌下静脉注射垂体后叶素复制大鼠急性心肌缺血模型,观察八味沉香散95%醇提液对大鼠注射垂体后叶素后不同时间血流动力学的变化。结果八味沉香散95%醇提大、小剂量组使心肌缺血降低的LVSP和±dp/dtmax升高,升高的LVEDP降低(P<0.05或P<0.01),但对血压的影响没有显著性差异(P>0.05)。结论藏药八味沉香散95%醇提液对垂体后叶素致急性心肌缺血大鼠的舒缩功能有一定的保护作用。

八味沉香散对异丙肾上腺素致心肌缺血大鼠血流动力学影响

目的探讨八味沉香散对异丙肾上腺素(isoproterenol,Iso)致心肌缺血大鼠血流动力学影响。方法注射Iso诱导建立大鼠急性心肌缺血模型。实验动物随机分为模型组,阳性对照组,八味沉香散大、小剂量组,分别测定各组大鼠血流动力学指标(SBP,DBP,MBP,LVSP,±dp/dtmax,LVEDP)。结果模型组MBP、LVSP及±dp/dtmax低于八味沉香散大、小剂量组,而LV-EDP则高于八味沉香散大、小剂量组。结论八味沉香散具有改善急性心肌缺血大鼠血流动力学的效应。

蒙药清心沉香八味散对急性抑郁模型小鼠行为学及单胺类神经递质的影响

目的:观察蒙药清心沉香八味散的抗抑郁作用及对单胺类神经递质的影响。方法:将实验动物(雄性昆明种小鼠)随机分为5组,分别为空白对照组(蒸馏水)、阳性药对照组(盐酸氟西汀0.02 g/kg)及受试蒙药清心沉香八味散高、中、低剂量组(27、9、3 g/kg),各组小鼠采用灌胃方式给药,7 d后采用小鼠悬尾实验(TST)、小鼠强迫游泳实验(FST)初步评估其抗抑郁作用。FST行为学实验完成后取血浆及海马组织,采用酶联免疫吸附方法(ELISA)分别检测动物血浆及海马组织中5-HT、DA、NE的含量。结果:与空白组比较,蒙药中、低剂量组能显著缩短小鼠FST的行为绝望时间,差异具有统计学意义(P<0.05),蒙药低剂量组能显著缩短小鼠TST的行为绝望时间,差异具有统计学意义(P<0.05),蒙药清心沉香八味散低剂量组能显著升高小鼠血浆中DA水平,差异具有统计学意义(P<0.05),蒙药清心沉香八味散低、中、高剂量组能显著升高小鼠海马组织中5-HT、DA、NE的含量,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:蒙药清心沉香八味散对小鼠可能有一定的抗抑郁样作用,其作用可能与其调节单胺类神经递质的含量相关。

八味沉香散对大鼠急性心肌缺血的保护作用

目的观察八味沉香散对大鼠急性心肌缺血的保护作用。方法建立垂体后叶素(Nh)致急性心肌缺血及冠状动脉结扎致急性心肌梗死模型,采用心电图机测定八味沉香散对大鼠Ⅱ导联及胸V1导联心电图变化的影响。结果八味沉香散40、20g/L对Nh诱发大鼠心电图T波及ST段的抬高有明显降低作用,亦能明显改善冠状动脉结扎致心肌梗死不同时间点的缺血性心电图变化。结论八味沉香散对实验性心肌缺血大鼠心电图有明显改善作用。

基于UPLC-Q-Exactive技术对藏药八味沉香散血清药物化学的初步研究

目的:采用UPLC-Q-Exactive四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱联用技术初步研究藏药八味沉香散的血清药物化学,初步揭示八味沉香散体内潜在的药效物质基础。方法:采用Thermo Scientific Hypersil GOLD aQ C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.9μm);以0.1%甲酸乙腈溶液-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱(流速为0.4 mL/min)。质谱采用正、负离子监测模式进行全扫描。对灌胃给予八味沉香散混悬液后的大鼠血清和八味沉香散提取物进行分析和比对,初步确定八味沉香散中的化学成分以及血清样品中的原型成分。结果:根据精确相对分子质量数据和多级质谱碎片比对,八味沉香散中27个主要化学成分被初步鉴定,大鼠灌胃给药后发现16个吸收入血原型成分。结论:初步鉴定出藏药八味沉香散化学成分及其在大鼠血清中的移行成分,其中这16个吸收入血原型化合物可能就是八味沉香散发挥药效的主要化合物。

电子束对藏药八味沉香散的辐照效应

为研究电子束辐照对藏药八味沉香散灭菌效果和其有效成分的影响,采用电子束(0kGy、5kGy、7 kGy、10 kGy)和^(60)Coγ(7 kGy)辐照三个厂家生产的产品,分别在处理后以及在49℃加速贮藏3个月后检测微生物指标和有效成分的变化。结果表明:经不同剂量处理后,电子束辐照和^(60)Coγ辐照均能显著降低八味沉香散内微生物数量至达标;电子束5 kGy辐照后,样品的微生物总数已降低至《中国药典》的要求限度,且其有效成分没有明显变化,吸收剂量至10 kGy时,对其有效成分含量也基本无影响。因此,电子束辐照可以有效提高八味沉香散的卫生指标,5 kGy为八味沉香散的最佳辐照工艺剂量。

八味沉香散对局灶性脑缺血大鼠ICAM-1表达的影响

目的:探讨细胞间黏附分子-1(ICAM-1)在SD大鼠局灶性脑缺血后不同时相脑组织中的表达及八味沉香散对其影响。方法:雄性SD大鼠360只,随机分为假手术组、模型组、八味沉香散大剂量组(0. 8 g/kg)、八味沉香散中剂量组(0. 4 g/kg)和八味沉香散小剂量组(0. 2 g/kg)。每组随机分为1 h组、6 h组、12 h组、24 h组、72 h组、120 h组等6个时相组,每一时相12只大鼠。采用改良Zea Longa线栓法制备大脑中动脉(MCAO)栓塞模型,实时荧光定量(Real Time-PCR)法检测八味沉香散干预后对局灶性脑缺血大鼠不同时相脑组织ICAM-1表达的影响。结果:与假手术组比较,模型组神经功能评分提高,且模型组评分均> 2分,证明模型制作成功。ICAM-1在脑缺血损伤1 h后开始上升,于24 h达到高峰,72 h后逐渐下降(P <0. 05);八味沉香散各剂量组ICAM-1表达较模型组降低,但仍高于假手术组(P<0. 05)。结论:八味沉香散可能通过降低局灶性脑缺血大鼠脑组织中ICAM-1表达量来减轻神经功能损伤及炎症反应对脑组织的缺血性损伤,从而发挥对局灶性脑缺血损伤的治疗作用。

八味沉香散含药血清对H9c2细胞氧糖剥夺损伤的保护机制研究

目的研究八味沉香散含药血清对H9c2细胞氧糖剥夺损伤的保护机制。方法将H9c2细胞分为空白组、模型组和八味沉香散低、中、高剂量组(含药血清剂量依次为2.5、8、12 g/kg)。体外培养H9c2细胞并建立氧糖剥夺损伤模型,含药血清干预后检测细胞存活率,观察细胞形态,检测生化指标乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、呼吸链复合酶Ⅰ(ComplexⅠ)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛(MDA)水平,检测细胞内活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位和细胞凋亡情况,检测氧化应激相关蛋白[Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、核转录因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、NADH氧化还原酶辅酶10(Ndufa10)、硫氧还蛋白(Trx)]、凋亡相关蛋白[B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)和细胞色素C(Cytc)]的表达。结果与空白组比较,模型组细胞形态破损,LDH、CK和MDA水平均显著升高(P<0.01),CAT、ComplexⅠ、SOD、GSH-Px水平和线粒体膜电位均显著降低(P<0.01),细胞内ROS含量和凋亡率均显著升高(P<0.01),氧化应激相关蛋白(Keap1、Nrf2、HO-1、Ndufa10和Trx)和促凋亡相关蛋白(Bax、Caspase-3、Cytc)表达水平均显著升高(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平显著降低(P<0.05)。给予八味沉香散含药血清后,细胞形态改善,以上指标大部分显著逆转(P<0.05或P<0.01)。结论八味沉香散含药血清对H9c2细胞氧糖剥夺损伤有较好的保护作用,其机制与降低细胞氧化损伤、抑制细胞凋亡相关。

八味沉香散对局灶性脑缺血大鼠VCAM-1表达的影响

目的:探讨八味沉香散对局灶性脑缺血大鼠脑组织中血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的影响。方法:雄性SD大鼠360只,随机分为假手术组、模型组、八味沉香散大剂量组(0.8 g/kg)、八味沉香散中剂量组(0.4 g/kg)和八味沉香散小剂量组(0.2 g/kg)。每组随机分为1 h组、6 h组、12 h组、24 h组、72 h组、120 h组6个时相组,每一时相12只大鼠。采用改良Zea Longa线栓法制备大脑中动脉(MCAO)栓塞模型,实时荧光定量(real-time PCR)检测八味沉香散干预对局灶性脑缺血大鼠不同时相VCAM-1在mRNA水平表达的影响。结果:与假手术组比较,模型组神经功能评分显著升高,且模型评分均>2分,证明模型制作成功。VCAM-1在脑缺血损伤1 h后开始上升,于24 h达到高峰,之后逐渐下降(P<0.05);八味沉香散各剂量组VCAM-1表达较模型组降低(P<0.05)。结论:八味沉香散对局灶性脑缺血损伤具有明显的保护作用,通过降低血管细胞黏附分子-1对局灶性脑缺血大鼠的炎性反应,减轻脑缺血后大鼠的神经元损伤,对缺血性脑损伤起到保护作用。