双氢青蒿素对前列腺癌裸鼠种植瘤Bcl-2和Bax表达的调控

目的研究双氢青蒿素(DHA)诱导前列腺癌细胞凋亡作用及其机制。方法采用人前列腺癌PC-3细胞株建立裸鼠种植瘤模型,将20只模型鼠随机平均分为对照组、溶剂(DMSO)组、DHA200μmol/kg体质量组和DHA100μmol/kg体质量组,经13d干预后,电镜观察肿瘤组织形态学表现;免疫组化检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达水平;TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡。结果与对照组及DMSO组比较,DHA治疗组电镜观察肿瘤组织中散在凋亡细胞及凋亡小体;免疫组化检测凋亡相关基因Bcl-2表达减弱、Bax表达增强,差异均有统计学意义(P<0.05);TUNEL检测结果显示肿瘤组织细胞凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论DHA具有较强的诱导前列腺癌细胞凋亡作用,这种作用可能是通过下调Bcl-2和上调Bax表达实现的。

电针对骶髓损伤后神经源性膀胱大鼠凋亡相关因子Bcl-2、Bax的影响

目的观察电针次髎、中极、三阴交穴对骶髓损伤后神经源性膀胱(逼尿肌无反射型)大鼠膀胱组织中B淋巴细胞蛋白-2(bcl-2)及Bcl相关X蛋白(bax)表达的影响,以探讨电针治疗该病的可能机制。方法将SD雌性大鼠40只,随机抽取10只为空白组,其余造模成功后随机分为模型组、电针穴位组和电针对照点组,每组10只。术后第15天起电针穴位组、电针对照点组分别施以每日1次治疗,治疗7次后取膀胱组织行Elisa法检测bcl-2及bax在膀胱组织中的表达。结果电针治疗后各组膀胱逼尿肌组织中,模型组、电针穴位组和电针对照点组bcl-2及bax表达均较空白组高(P<0.01),电针穴位组和电针对照点组bcl-2表达较模型组升高(P<0.01),bax表达较模型组降低(P<0.01),且电针穴位组疗效明显优于对照点组(P<0.01)。结论电针次髎、中极、三阴交穴可提高骶髓损伤后NB大鼠膀胱组织中bcl-2的表达、抑制bax的表达。电针对骶髓损伤后神经源性膀胱的治疗作用可能是通过促进bcl-2、抑制bax的表达以部分抑制膀胱平滑肌细胞凋亡,从而保护受损膀胱逼尿肌组织。

核因子-κB及Bcl-2在胃癌组织中的表达及意义

目的检测核因子-κB(NF-κB)及Bcl-2在胃癌组织中的表达情况,探讨它们与胃癌临床病理特征的关系及两者之间的相关性。方法应用免疫组织化学方法(S-P法)检测54例胃癌组织和32例正常胃黏膜组织中NF-κB及Bcl-2的表达情况。结果胃癌组织中NF-κB及Bcl-2的阳性表达率均明显高于正常胃黏膜组织(P<0.05);胃癌组织中NF-κB的表达与肿瘤分化程度、癌组织浸润深度及临床分期有关(P<0.05),Bcl-2的表达与临床分期有关(P<0.05);胃癌组织中NF-κB及Bcl-2的表达具有关联性(C=0.508,P<0.01)。结论 NF-κB是重要的转录调控因子,Bcl-2高表达可引起细胞凋亡抑制,两者通过调节细胞凋亡而参与胃癌的发生发展过程,胃癌组织中NF-κB及Bcl-2均呈现高表达且存在关联性,NF-κB可能通过上调Bcl-2的表达促进胃癌的发生发展。

脑缺血再灌注皮质Bax,Bcl-2和GFAP的表达及川芎嗪的干预作用

目的:探讨脑缺血再灌注(CIR)大鼠脑皮质Bax,Bcl-2和GFAP表达及川芎嗪的干预作用。方法:72只Wister大鼠随机分成假手术组,模型组,小剂量治疗组和大剂量治疗组。其中54只大鼠利用Bannister’s颈动脉血引流法复制CIR动物模型。治疗组分别向腹腔注射川芎嗪50mg/kg或100mg/kg。术后12,24,72h取脑组织,用免疫组织化学方法检测Bax,Bcl-2和GFAP(胶质纤维酸性蛋白)阳性细胞。结果:模型组Bax,Bcl-2和GFAP阳性细胞值明显高于假手术组和治疗组,Bax/Bcl-2大于1;治疗组Bax,GFAP阳性细胞数减少,Bcl-2增多,治疗大剂量组Bax/Bcl-2比值明显下降小于1。结论:川芎嗪能够下调CIR脑皮质Bax和GFAP表达和上调Bcl-2表达,说明川芎嗪通过干预基因表达发挥脑保护作用。

miR-509-3p靶向BCL2基因调控乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的分子机制

目的探讨微小RNA-509-3p(miR-509-3p)调控乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移及凋亡的分子机制。方法 qRT-PCR检测miR-509-3p、B淋巴细胞瘤(BCL)2在乳腺癌组织及不同乳腺癌细胞株中的表达情况;双荧光素酶报告基因实验检测miR-509-3p与BCL2之间的相互作用;噻唑蓝(MTT)实验与流式细胞术分别检测miR-509-3p对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡能力的变化情况;Transwell迁移及侵袭实验检测miR-509-3p对MDA-MB-231细胞迁移及侵袭行为的变化情况;Western印迹检测miR-509-3p对BCL2、细胞周期蛋白(CyclinD)1、p21、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白的调控情况。结果与癌旁正常组织相比,乳腺癌组织中miR-509-3p的表达水平显著下调(P<0.05),与其他乳腺癌细胞相比,乳腺癌MDA-MB-231细胞中miR-509-3p表达最低,而BCL2的表达水平相反;上调miR-509-3p表达MDA-MB-231细胞的增殖、迁移及侵袭能力明显降低(P<0.05),而细胞凋亡水平明显升高(P<0.05),CyclinD1、MMP-2、MMP-9表达水平明显降低(P<0.05),而p21表达水平明显升高(P<0.05);miR-509-3p可靶向调控BCL2表达;上调BCL2表达可逆转上调miR-509-3p表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的作用。结论 miR-509-3p能够靶向抑制BCL2而抑制乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭并促进细胞凋亡。

眩晕定颗粒对后循环缺血性眩晕家兔Bcl-2,Bax及BDNF表达的影响

目的探讨眩晕定颗粒对家兔气虚血瘀型后循环缺血性眩晕模型前庭神经核区Bax、Bcl-2及脑源性神经生长因子(BDNF)表达的影响。方法建立气虚血瘀型后循环缺血性眩晕家兔模型,以西比灵为西药对照,眩晕宁为中药对照,免疫组化法测定前庭神经核区Bax、Bcl-2和BDNF表达。结果造模后模型组家兔脑干前庭神经核Bcl-2及BDNF表达显著下降,Bax表达上调,差异有统计学意义(P<0.05);药物干预后,与模型组比较,眩晕定颗粒使家兔脑干前庭神经核Bcl-2及BDNF表达上调,并可抑制Bax的表达。结论眩晕定颗粒治疗家兔实验性眩晕的作用与其促进脑组织Bcl-2、BDNF表达,抑制Bax表达有关。

miR-429-5p调控Bcl2的表达参与脊髓损伤过程中神经元细胞凋亡的机制

目的观察mi R-429-5p在脊髓损伤后的表达变化及其对脊柱神经元细胞的凋亡的影响,并探讨mi R-429-5p在脊髓损伤中的作用机制。方法(1)培养大鼠背根神经节细胞,通过qPCR检测mi R-429-5p在大鼠背根神经节细胞受损后的表达变化,并通过流式细胞仪检测mi R-429-5p对受损背根神经节细胞的凋亡的影响,同时通过Western blot检测Caspase3的蛋白表达;(2)通过TargetScan基因库预测mi R-429-5p的靶基因为Bcl2,通过双荧光素酶实验验证其靶向关系,并通过Western blot检测mi R-429-5p对Bcl2表达的调控;(3)利用SD大鼠建立脊髓损伤模型,正常组10只,脊髓损伤模型组20只,mi R-429-5p Inhibitor组20只。进行BBB评分检测各组后肢运动的恢复情况,通过qPCR检测mi R-429-5p以及Bcl2的表达变化,通过Western blot检测凋亡相关基因Caspase3的变化,通过嗜银染色和HE染色观察神经纤维的再生。结果(1)miR-429-5p参与脊髓损伤后的再生过程,mi R-429-5p的表达下调(P<0.05);(2)miR-429-5p参与调控受损背根神经节细胞的凋亡,mi R-429-5p的表达下调(P<0.05)。结论 mi R-429-5p通过靶向Bcl2参与调控脊髓损伤过程中神经元细胞的凋亡,从而影响脊髓神经细胞功能的再生,为继发性脊髓损伤的治疗提供了新的靶点。

Bcl2转录抑制因子1、E-钙黏蛋白在宫颈鳞状细胞癌不同区域的表达及两者与P16INK4a表达的关系

目的检测宫颈鳞状细胞癌肿瘤出芽区及肿瘤中央区失巢凋亡因子Bcl2转录抑制因子1(Bit1)、上皮-间质转化(EMT)标志物E-钙黏蛋白及P16INK4a的表达情况,探讨Bit1、E-钙黏蛋白在宫颈癌获得高侵袭力过程中的意义及二者与P16INK4a表达的关系。方法收集甘肃省肿瘤医院病理科2014-2018年宫颈鳞状细胞癌石蜡包埋标本77例。采用免疫组织化学法检测宫颈鳞状细胞癌肿瘤出芽区及中央区Bit1、E-钙黏蛋白、P16INK4a的表达情况。以肿瘤中央区及出芽区各蛋白质表达评分的中位数作为分界点,将标本分为高表达组和低表达组,分析在不同P16INK4a表达情况下Bit1及E-钙黏蛋白的表达差异及二者与患者临床病理特征的关系,并进一步分析在肿瘤中央区及出芽区Bit1与E-钙黏蛋白的相关关系。统计学分析采用χ2检验或连续校正χ2检验和Spearman等级相关分析。结果77例宫颈鳞状细胞癌标本中,肿瘤中央区P16INK4a、E-钙黏蛋白、Bit1高表达率分别为32.5%(25/77)、67.5%(52/77)、63.6%(49/77),而在肿瘤出芽区分别为67.5%(52/77)、33.8%(26/77)、37.7%(29/77),差异有统计学意义(χ2=18.935、17.561、10.391,P均<0.01)。无论在肿瘤出芽区还是中央区,P16INK4a高表达组与P16INK4a低表达组Bit1及E-钙黏蛋白的表达差异均无统计学意义(P均>0.05)。肿瘤中央区Bit1低表达与脉管内癌栓及淋巴结转移有关(χ2=5.053、4.400,P均<0.05),肿瘤出芽区E-钙黏蛋白和Bit1低表达均与淋巴结转移有关(χ2=5.580、7.573,P均<0.05)。Spearman等级相关分析显示,在肿瘤中央区及肿瘤出芽区E-钙黏蛋白与Bit1表达均呈正相关(r=0.287,P=0.011;r=0.236,P=0.039)。结论宫颈癌侵袭力的增高与Bit1及E-钙黏蛋白表达降低及P16INK4a表达增高有关,宫颈癌细胞可能通过抑制Bit1获得失巢凋亡抗性并影响EMT的发生从而获得更高的侵袭能力,但P16INK4a并未参与此过程。

氧化苦参碱对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织Casepase-3、Bcl-2及Bax表达的影响

目的观察氧化苦参碱(OMT)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠的保护作用及对Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。方法清洁级新生7 d龄SD大鼠72只,随机分为假手术组、模型组、OMT 120 mg/kg治疗组。后2组采用经典Rice法制作HIBD动物模型,假手术组未给予缺氧处理及左侧颈总动脉结扎。模型组和假手术组在造模完成后,即刻开始腹腔注射无菌注射用水,剂量为10 m L/kg,每12 h 1次。OMT治疗组在造模完成后,即刻开始腹腔注射OMT 120 mg/kg,每12 h 1次,共注射4次。末次注射后12 h断头取材,用HE染色方法观察脑组织病理变化,采用免疫荧光及Western blot检测损伤侧脑组织内凋亡相关基因Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达情况。结果 HE染色结果表明假手术组大鼠皮层及海马CA3区锥体神经元结构完整、排列紧凑;与假手术组比较,模型组神经元边界不清、排列紊乱、组织疏松、基质不完整,OMT治疗组可以改善HIBD新生大鼠脑组织神经元的异常形态变化。免疫荧光显示假手术组脑组织中Caspase-3、Bax荧光细胞数目少、荧光强度低,Bcl-2阳性细胞较多、荧光明显;模型组Caspase-3、Bax阳性细胞数增加、荧光增强,Bcl-2阳性细胞数减少、荧光减弱,OMT治疗组显著逆转上述改变。Western blot显示模型组脑组织中Caspase-3、Bax蛋白表达增强(P<0.05),Bcl-2蛋白表达减少(P<0.05);与模型组比较,OMT治疗组Caspase-3、Bax蛋白表达减少(P<0.05),Bcl-2蛋白表达增加(P<0.05)。结论 OMT可能是通过上调Bcl-2表达,抑制Caspase-3、Bax表达,减轻缺氧缺血引起的神经元凋亡,从而对HIBD新生大鼠发挥保护作用。

乙醇对心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的影响

目的研究乙醇对心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl鄄2和Bax表达的影响。方法将雄性昆明种小鼠随机分为4组,每组6只,分别给予10%,20%,30%的乙醇和生理盐水腹腔注射,每日1次,连续30d,通过心肌细胞的核固红鄄结晶紫和免疫组织化学染色,分析细胞凋亡及凋亡相关基因——B细胞淋巴瘤/白血病鄄2基因(B鄄celllymphoma/leukemia鄄2,Bcl鄄2)和Bcl相关蛋白(Bcl鄄associatedxprotein熏Bax)的表达。结果实验组部分心肌细胞核染色质凝集,染为蓝紫色;定量分析显示,实验组异常的心肌细胞核明显多于对照组(P<0.01)。实验组心肌细胞中Bcl鄄2的表达弱于对照组(P<0.01),且分布不均;而实验组心肌细胞中Bax的表达明显增强(P<0.01),可见棕色粗大颗粒。结论心肌细胞凋亡在乙醇对心肌影响的发生机制上发挥一定的作用;随着乙醇浓度的增加,心肌细胞的凋亡征象愈加明显;乙醇引起的心肌细胞凋亡与凋亡相关基因Bcl鄄2和Bax的异常表达有关。

Bcl-2反义硫代磷酸寡核苷酸对HL60细胞生长的影响

应用Bcl-2反义硫代磷酸寡核苷酸(ASPO)与HL60细胞共培养,旨在观察不同浓度ASPO对HL60细胞生长和克隆形成的影响。结果发现,与Bcl-2正义寡核苷酸(SPO)及空白组比较,不同浓度的ASPO(A5μmol/L,A10μmol/L,A20μmol/L)培养24小时即可降低HL60细胞生长数和CFU-HL60克隆形成率。并随浓度的增大而显著(P<0.01)。72小时以后,ASPO组则与SPO组和空白组无显著差别(P>0.05)。因此认为Bcl-2的ASPO具有抑制HL60细胞生长,并呈浓度依赖性和序列特异性。

依达拉奉对内毒素致急性肺损伤大鼠肺组织bcl-2、fas表达的影响

[目的]探讨依达拉奉在急性肺损伤治疗中的作用及其机制.[方法]健康雄性Wistar大鼠,股静脉注射内毒素（lipopolysacchairde,LPS）复制急性肺损伤（acute lung injury,ALI）动物模型.采用单独给甲基强的松龙（甲强龙）（A组）,甲强龙联合依达拉奉（B组）.观察两组病理形态及肺损伤相关指标,并用免疫组化等技术观察其肺组织细胞凋亡相关基因bcl-2、fas表达情况.[结果]A组肺损伤指标（肺系数、蛋白含量和肺泡通透指数）、肺组织病理学改变显著改变.而B组病变局限且程度较A组轻,渗出比A组明显减少.免疫组化结果显示应用依达拉奉后肺组织表达bcl-2呈阳性.[结论]依达拉奉对内毒素致急性肺损伤大鼠能够有效阻抑内毒素导致的炎症反应,同时可以改善肺泡毛细血管血流灌注状态;影响肺组织表达bcl-2、fas,可能是其有效减轻肺损伤的基础.

缺氧诱导因子-1α和BCL-2/腺病毒E1B19 kDa相关蛋白3在中耳胆脂瘤表达及意义

目的探讨缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1,HIF-1α)和BCL-2/腺病毒E1B19KDa相关蛋白3(Bcl2/adenovirus E1B 19 kD interacting protein 3,BNIP3)在中耳胆脂瘤中的表达及胆脂瘤上皮的凋亡情况。方法采用免疫组织化学方法检测30例中耳胆脂瘤标本与18例外耳道皮肤标本中HIF-1α和BNIP3蛋白的表达情况,使用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end-labeling,Tunel)检测20例中耳胆脂瘤标本和18例外耳道皮肤标本的凋亡情况。使用Pearson相关分析检验HIF-1α和BNIP3蛋白之间的相关性。结果 HIF-1α在胆脂瘤组和对照组的平均光密度分别为0.16±0.07和0.08±0.03,两组比较差异有统计学意义(t=4.279,P<0.01);BNIP3在胆脂瘤组和对照组的平均光密度分别为0.16±0.08和0.11±0.06,两组比较差异有统计学意义(t=2.463,P=0.0185);经pearson相关分析,在胆脂瘤上皮中,HIF-1α和BNIP3之间呈正相关(r=0.418,P=0.003);Tunel染色中,凋亡指数在胆脂瘤组和对照组分别为(52.8±12.5)%和(9.99±2.97)%,两组比较差异有统计学意义(t=14.166,P<0.01)。结论 HIF-1α和BNIP3在中耳胆脂瘤中的异常表达可能与胆脂瘤的高凋亡特性有关。

乙醇对金黄地鼠胚胎神经上皮细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的探讨乙醇染毒对金黄地鼠胚胎神经上皮细胞内B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-celllymphoma/leukemia-2,Bcl-2)基因和Bcl相关蛋白(Bcl-associatexprotein,Bax)表达的影响。方法成年未经产金黄地鼠48只,实验组分6组,每组5只;对照组分6组,每组3只。实验组于孕7.5d腹腔注射乙醇,剂量为5.8g/kg,分别于4、8、16、24、48和72h后剖腹取胎,用免疫组织化学和图象分析技术对各期鼠胚神经上皮的Bcl-2和Bax的表达进行检测。对照组腹腔注射生理盐水。结果对照组Bcl-2和Bax正常分布于金黄地鼠胚胎神经上皮和周围间充质的核膜和胞浆,随时间推移,二者的表达量逐渐增高,于处理后16h达到高峰,与对照组相比,升高有统计学意义(P<0.01),之后逐渐下降。各实验组胚胎神经上皮细胞的Bcl-2免疫组化染色强度均不同程度地低于对照组,Bax的表达在8h低于对照组,其他各组均不同程度地高于对照组。结论乙醇能抑制Bcl-2的表达,促进Bax的表达,从而参与了乙醇致神经管畸形中细胞凋亡的调节。

NF-κB1通过促进BCL2表达抑制胶质瘤细胞的早期凋亡

目的探讨核转录因子-κB1(NF-κB1)在人脑胶质瘤和胶质瘤细胞株U87、SHG44的表达及其与凋亡的相关性;以及NF-κB1对脑胶质瘤的作用机制。方法利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测NF-κB1在非瘤脑组织和不同级别人脑胶质瘤组织中的表达水平。采用脂质体法将化学合成NF-κB1过表达/沉默表达质粒(NF-κB1 shRNA),以及BCL2沉默表达质粒(BCL2 shRNA)转染上述细胞系。通过流式细胞术检测NF-κB1对胶质瘤细胞株U87、SHG44凋亡的影响,并采用Western blotting分别检测NF-κB1、BCL2蛋白的表达水平。结果 qRT-PCR显示,NF-κB1在人脑胶质瘤中表达明显高于非瘤脑组织,并且表达水平随着肿瘤恶性程度的增高而逐渐升高(均P<0.05)。在同一人脑胶质瘤标本中BCL2的表达水平与NF-κB1的表达趋势相同。流式细胞术检测结果显示,抑制NF-κB1表达明显促进人脑胶质瘤细胞U87、SHG44的凋亡(均P<0.05)。Western blot检测证实,抑制NF-κB1蛋白表达后BCL2蛋白的表达水平也随之降低。结论 NF-κB1通过促进BCL2的表达而抑制胶质瘤细胞的早期凋亡。

温针灸对兔膝骨性关节炎软骨中Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨温针灸治疗膝骨性关节炎(knee osteoarthritis,KOA)软骨细胞凋亡抑制的相关机制。方法将40只新西兰兔分随机分为4组(空白组、模型组、阿仑膦酸钠组、温针灸组)。采用经典膝关节右后伸直位石膏管型固定制备KOA兔模型。空白组不予造模;模型组不予任何治疗;温针灸组在造模3 d后开始治疗,每日1次,每次15 min,7 d为1个疗程,共治疗4个疗程;阿仑膦酸钠组给予阿仑膦酸钠溶液,按150μg·(kg·d)^(-1)剂量配比蒸馏水灌胃治疗,同上疗程。干预结束后取兔关节软骨行HE染色观察软骨病理变化,免疫组织化学检测软骨细胞中B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl2-Associated X蛋白(Bax)的表达。结果空白组软骨滑膜表面完整、光滑,软骨细胞排列正常;模型组软骨表面粗糙、有裂隙,软骨细胞排列紊乱;阿仑膦酸钠组软骨表面毛糙、有裂隙延伸至软骨下骨,软骨细胞排列不均匀;温针灸组软骨表面平整、无明显缺损,细胞排列局部紊乱。Mankin's评分结果:与空白组比较,模型组评分增高(P<0.05);与模型组比较,温针灸组及阿仑膦酸钠组评分均降低(P均<0.05)。免疫组织化学结果:与空白组比较,模型组Bcl-2表达降低(P<0.05),Bax表达升高(P<0.05);与模型组相比,温针灸组和阿仑膦酸钠组中Bcl-2表达均升高(P均<0.05),Bax表达均下降(P均<0.05);温针灸组与阿伦磷酸钠组Bcl-2、Bax表达差异无统计学意义(P均>0.05)。结论温针灸治疗兔KOA效果良好,可能与Bcl-2、Bax相关凋亡抑制有关。

miR-221-3p靶向BCL2L11调控小尾寒羊卵泡颗粒细胞凋亡

【目的】BCL2L11在哺乳动物中能够促进多种细胞凋亡,同时参与繁殖性状相关组织器官的发育及疾病治疗,文章利用分子生物学方法探究miR-221-3p靶向调控BCL2L11对小尾寒羊卵泡颗粒细胞凋亡的影响,为进一步研究BCL2L11在卵泡颗粒细胞凋亡和卵泡闭锁过程中的调控作用提供依据。【方法】在前期课题组卵巢组织全转录组测序分析的基础上,获得了候选基因BCL2L11及其调控元件miR-221-3p,利用半定量和组织荧光定量(RT-qPCR)分析BCL2L11在小尾寒羊不同组织中的表达情况;通过RT-qPCR定量试验在小尾寒羊卵泡期和黄体期卵巢组织中鉴定了BCL2L11及miRNA-221-3p的表达情况;构建BCL2L11 3’UTR野生型和突变型载体,在HEK293T细胞中共转染miR-221-3p mimic和BCL2L11野生型和突变型及阴性对照,采用双荧光素酶报告基因检测系统确定miR-221-3p与BCL2L11靶向性关系;在绵羊卵巢原代颗粒细胞中转染miR-221-3p mimic及阴性对照实现miR-221-3p过表达,使用RT-qPCR技术在mRNA水平上检测miR-221-3p对BCL2L11以及卵巢颗粒细胞凋亡标志基因XIAP和Fas表达水平的影响;同时利用EdU试验分析miR-221-3p过表达和阴性对照组中颗粒细胞的增殖变化。【结果】半定量和组织RT-qPCR分析均表明BCL2L11在卵巢组织中表达量高于其他组织;RT-qPCR定量结果显示miR-221-3p和BCL2L11在小尾寒羊卵泡期和黄体期卵巢组织中差异表达,miR-221-3p在卵泡期卵巢中的表达量高于黄体期,而BCL2L11在卵泡期卵巢中的表达量低于黄体期,表现出负调控的现象;双荧光素酶报告基因验证分析显示,过表达miR-221-3p mimic显著抑制了BCL2L11 3’UTR荧光素酶的活性(P<0.05),阴性对照组则没有显著影响;过表达miR-221-3p,靶基因BCL2L11 mRNA表达水平显著降低,同时,卵泡颗粒细胞凋亡标志基因XIAP和Fas的表达量也显著降低(P<0.05);EdU试验分析显示,过表达miR-221-3p的颗粒细胞增殖率为18.9%,极显著高于阴性对照组的10.43%(P<0.01)。【结论】BCL2L11和miR-221-3p是调控绵羊卵巢发育的重要基因及调控元件,BCL2L11是miR-221-3p的靶基因之一,miR-221-3p过表达可抑制颗粒细胞凋亡,该作用结果可能通过抑制靶基因BCL2L11的表达进而影响了绵羊卵巢颗粒细胞的凋亡。

小鼠脑缺血-再灌注损伤中神经细胞BCL2及p-JNK2的表达

目的探讨小鼠脑缺血-再灌注中BCL2蛋白和JNK2蛋白的表达。方法 6周龄C57小鼠20只,随机分为对照组(n=10)和脑缺血再灌注组(n=10),采用动脉夹反复夹闭双侧的颈总动脉的方法建立脑缺血-再灌注模型。免疫组织化学方法检测BCL2和JNK2蛋白的定位,Western blot检测BCL2、JNK2和p-JNK2(磷酸化JNK2)蛋白的表达情况。结果免疫组织化学可见,BCL2和JNK2蛋白在大脑皮质处表达,定位于细胞核及细胞质。与对照组比较,BCL2蛋白在脑缺血再灌注组阳性表达降低,JNK2和p-JNK2蛋白阳性表达增多(P<0.05)。Western blot检测也发现,脑缺血再灌注组BCL2蛋白的表达较对照组降低,JNK2和pJNK2蛋白的表达增加(P<0.05)。结论小鼠脑缺血-再灌注后,通过BCL2/JNK2信号通路致使大脑皮质细胞凋亡。

miR-21通过Bcl-2和P53对早期胃癌病理形态学的影响

目的探讨miR-21通过Bcl-2和P53对早期胃癌病理形态学的影响。方法选取60例早期胃癌患者切除的癌组织,将癌组织分为过表达miR-21组和敲低miR-21组各30例。分别采用免疫组化和苏木素-伊红(HE)染色病理切片检测癌组织中B细胞淋巴瘤(Bcl)-2和P53的表达,采用Western印迹检测癌组织中miR-21对Bcl-2和P53蛋白表达的影响。结果免疫组化法结果显示,过表达miR-21组Bcl-2表达显著低于敲低miR-21组,P53表达显著高于敲低miR-21组(P<0.05);HE病理切片结果显示,过表达miR-21组的病理组织学情况显著优于敲低miR-21组(P<0.05);过表达miR-21组中Bcl-2蛋白表达显著低于敲低miR-21组,P53蛋白表达显著高于敲低miR-21组(P<0.05)。结论miR-21通过调节Bcl-2和P53的表达,改善早期胃癌患者胃内理化环境,减少理化损伤,也可以作为早期胃癌检查的指标,对患者的临床治疗有一定意义。

LncRNA HOTAIR通过靶向miR-204-5p调控BCL2促进肺癌进展

目的与背景HOX转录反义RNA(HOX transcript antisense RNA,HOTAIR)是一种长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA),广泛参与多种恶性肿瘤的进展。HOTAIR可能参与了肺癌的进展,本研究旨在阐明HOTAIR对肺癌进展的作用及其潜在的分子机制。方法采用实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,RT-qPCR)检测HOTAIR和miR-204-5p在肺癌组织和肺癌细胞中的表达水平。采用MTT和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况。采用双荧光素酶报告基因检测系统和RT-qPCR分析HOTAIR和miR-204-5p之间,以及miR-204-5p和B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcell lymphoma/leukemia2,BCL2)之间的作用。采用蛋白质免疫印迹检测BCL2的表达水平。结果在肺癌组织和细胞株中,HOTAIR表达水平升高,而miR-204-5p的表达水平降低,并且HOTAIR与miR-204-5p的表达呈负相关。HOTAIR可促进肺癌细胞增殖,抑制肺癌细胞凋亡。HOTAIR可作为miR-204-5p的海绵,发挥竞争性内源RNA(competing endogenousRNA,ceRNA)作用。miR-204-5p表达上调后,HOTAIR对肺癌细胞增殖和凋亡的作用发生逆转。此外,miR-204-5p可靶向BCL2,HOTAIR通过调控miR-204-5p影响BCL2表达。结论 HOTAIR可通过miR-204-5p调控BCL2表达,进而促进肺癌细胞的生长,抑制细胞凋亡,HOTAIR/miR-204-5p/BCL2轴可能是肺癌中新的调控机制和潜在治疗靶点。