bcl-x_S增加鼻咽癌细胞对顺铂诱导凋亡的敏感性

目的 :利用bcl xS基因降低肿瘤细胞凋亡阈值 ,促进化疗药物顺铂诱导的鼻咽癌细胞凋亡 ,探索提高顺铂疗效的新途径。方法 :利用脂质体LipofectAmine将含有人bcl xS基因的重组真核表达质粒pcDNA3xS导入人鼻咽癌低分化上皮细胞株CNE 2Z ,G4 18筛选培养后 ,经Westernblot检测bcl xS的表达。以不含有bcl xS基因的pcDNA3质粒转染CNE 2Z作为对照细胞(CNE 2Zneo)。顺铂处理 2种细胞后 ,台盼蓝计数法求得各自的IC50 ,流式细胞仪及荧光染色检测凋亡细胞百分比。结果 :Westernblot检测证实获得稳定表达bcl xS的细胞 (CNE 2ZxS) ,与对照细胞相比 ,其对顺铂的IC50 值明显降低 ,经相同剂量顺铂处理后 ,流式细胞仪及荧光染色检测 ,结果表明 ,其凋亡细胞百分比明显高于对照细胞。结论 :bcl xS能显著增加鼻咽癌CNE

5-Fu诱导HepG2细胞凋亡过程中Fas抗原和bcl-X_L蛋白的表达及意义

目的 研究 5 -氟尿嘧啶 (5 -Fu)诱导人肝癌HepG2细胞凋亡过程中Fas抗原和bcl-XL 蛋白的表达及意义。方法 采用免疫细胞化学法对 5 -Fu处理的HepG2细胞进行染色 ,运用图像处理和分析系统定量分析Fas抗原和bcl-XL 蛋白表达。流式细胞仪检测抗 -Fas -抗体对氟尿嘧啶诱导人肝癌HepG2细胞凋亡百分率的影响。结果 在未用药处理的对照组细胞Fas抗原呈弱表达(0 .17± 0 .0 3) ,加入 0 .0 1mol L 5 -Fu后Fas阳性表达的细胞数目增加 ,表达强度增强。作用 16h后Fas抗原表达强度达高峰 (0 .4 5± 0 .0 5 ) ,与对照组比较两者有显著差异 (P <0 .0 1)。但在 0 .0 1mol L5 -Fu诱导HepG2细胞凋亡过程中癌基因蛋白bcl-XL 表达逐渐减弱 ,经药物处理 4、8、16、2 4h后 ,其表达分别为 0 .2 8± 0 .0 3、0 .2 0± 0 .0 3、0 .14± 0 .0 3和 0 .0 7± 0 .0 2。癌基因蛋白bcl-XL 的表达与Fas抗原表达呈负相关 (r =- 0 .787,P <0 .0 1)。流式细胞仪分析显示 5 -Fu作用 4 8h后 ,肝癌细胞凋亡百分率为 (16 .2 3± 0 .90 ) % ,而加入抗 -Fas -抗体后细胞凋亡百分率显著上升为 (40 .13± 1.4 5 ) % (P<0 .0 1)。结论 5 -Fu诱导HepG2细胞凋亡是通过Fas依赖途径 ,属于第Ⅱ型Fas信号传导途径。

Bcl-x_L及DNA-PKcs在ⅡB期骨肉瘤中的表达及临床意义

目的 探讨Bcl-xL及DNA-PKcs在ⅡB骨肉瘤中的表达及与预后的关系。方法 应用免 疫组化方法检测40例ⅡB期骨肉瘤中Bcl-xL及DNA-PKcs的表达,并分析其与无瘤生存率及生存时间 的关系。结果 Bcl-xL及DNA-PKcs表达阳性率分别为55%及60%;复发转移组Bcl-xL表达阳性率 明显高于无瘤生存组(P=0.001);Bcl-xL表达阳性者无瘤生存率较阴性者低(P=0.0039)。复发转移者 DNA-PKcs阳性率同样显著高于无瘤生存者(P=0.002);DNA-PKcs阳性组累计无瘤生存率也明显低于 阴性组(P=0.0078)。多因素分析提示Bcl-xL及DNA-PKcs的表达是影响无瘤生存率的预后因素。结 论 Bcl-xL阳性表达者预后差,其作用与抑制肿瘤细胞凋亡及化疗耐药相关。DNA-PKcs的表达与骨肉 瘤的不良预后关系密切,表明骨肉瘤细胞中的凋亡抑制普遍存在,并使肿瘤细胞修复化疗药物所致DNA 损伤的能力增强。

Bcl-x_L、Bcl-Xs/L以及Bcl-6在骨肉瘤组织中的表达及临床意义

目的:检测凋亡相关蛋白Bcl-xL、Bcl-Xs/L以及Bcl-6在骨肉瘤中的表达,并探讨其与骨肉瘤预后的关系。方法:应用免疫组化方法检测Bcl-xL、Bcl-Xs/L以及Bcl-6在41例骨肉瘤组织中的表达,并分析其与无瘤生存率及生存时间的关系。结果:Bcl-xL、Bcl-Xs/L在骨肉瘤组织中表达的阳性率分别为53.7%和75.6%,而Bcl-6为阴性表达,是否行术前化疗不影响Bcl-xL的表达(P>0.05),Bcl-xL表达阳性者无瘤生存率较阴性者低(P<0.01),而Bcl-Xs/L表达与复发转移及无瘤生存率无相关关系。结论:Bcl-xL、Bcl-Xs/L在骨肉瘤中有不同程度的表达,Bcl-xL的表达与预后相关,Bcl-xL阳性表达者复发、转移率高,无瘤生存率低,这与Bcl-xL抑制骨肉瘤细胞凋亡导致化疗耐药的特性相关。

bcl-x_s促进三氧化二砷诱导鼻咽癌细胞凋亡的研究

目的 利用促进凋亡基因bcl-xs 降低肿瘤细胞凋亡阈值 ,增强三氧化二砷诱导的鼻咽癌细胞凋亡 ,以探索提高鼻咽癌化疗敏感性的新途径。方法 将含有人bcl -xs 基因的重组真核表达质粒导入人鼻咽癌低分化上皮细胞株 (CNE - 2Z) ,以不含有bcl-xs 基因的质粒转染CNE - 2Z作为对照细胞。用三氧化二砷处理两组细胞后 ,台盼蓝计数法求得各自的IC50 ,流式细胞仪检测凋亡细胞百分比。结果 导入bcl-xs 的细胞与对照细胞相比 ,其对三氧化二砷的IC50 值明显降低 ,流式细胞仪及荧光染色检测结果表明其凋亡细胞百分比明显高于对照细胞。结论 bcl-xs 能显著提高鼻咽癌CNE -

Effect of Antisense Oligodeoxynucleotide Directed to NF-κB-RelA on Bcl-x_L mRNA in Extended Drug Resistance Leukemia Cell Line HL- 60/E6

To explore the effect of NF κB on bcl x gene transcription in extended drug resistance leukemia cell line HL 60/E6, drug resistant subline HL 60/E6 was derived by intermittently exposing HL 60 cells to 6 ng/ml epirubicin. Indirect immunofluorescence was used to demonstrate the location of NF κB RelA in HL 60/E6 cells. FCM analysis and RT PCR were used to detect the efficiency of liposome mediated ODN transfection and the change of bcl x L mRNA levels after 5 μmol/L phosphorothioate (PS) derivatized antisense (AS) oligodeoxynucleotide (ODN) directed to RelA was transferred into HL 60/E6 cells. The results showed that RelA remained persistently active and located at the nuclei of HL 60/E6 cells,but in the cytoplasm of HL 60 cells, the efficiency of liposome mediated ODN transfection was significantly higher than that of null ODN ( P <0.01 in 4 h, 6 h, 12 h, 24 h). Exposure of HL 60/E6 cells to 5 μmol/L AS PS ODN directed to RelA led to a maximal 40 % decline of bcl x L mRNA levels within 8 h. The inhibition rate of bcl x L mRNA was (15±1.79) %, (28±2.34) %, (40±3.47) %, (20±1.54) % in 4 h, 6 h, 8 h, 15 h, respectively, but it was less than 15 % in control group. It was concluded that NF κB was involved in regulating bcl x transcription. It was suggested that NF κB was an important factor for drug resistance in leukemia cells.

用显微注射法建立转bcl-x_l基因小鼠

建立转bcl xl基因小鼠 ,继而传代建系 ,用于缺血性脑血管疾病的研究。采用显微注射法 ,将人bcl xl基因注入昆明小白鼠受精卵获得子代鼠 ,然后作PCR ,Southern blot ,mRNA ,Western blot检测以获得阳性鼠。实验中注射受精卵 16 5 4枚 ,移植卵数 14 4 8枚 ,受体鼠 4 9只 ,怀孕鼠 7只 ,子代鼠 13只 ,整合数 4只并均有表达 ,植入受精卵的存活率 83% ,受精卵的总存活率 0 .78% ,移植鼠的怀孕率 14 .3% ,整合效率 30 .7% ,总有效率为 0 .2 4 %。初步获得了转bcl

抑凋亡基因bcl-X_L在胰腺癌组织中的表达及意义

目的 探讨抑凋亡基因 bcl- XL 在胰腺癌组织中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组织化学链霉亲和素方法 (SABC) ,检测 5 2例份胰腺癌组织中凋亡抑制基因 bcl- XL 的基因蛋白产物 ,并与良性和正常胰腺组织作对照分析。结果 胰腺癌组织中 bcl- XL 的阳性表达率为 73.1% ,显著高于胰腺良性组织及正常组织 ,bcl-XL 的表达与肿瘤的 TNM分期有关 ,而与肿瘤直径、淋巴结转移、分化程度、病理类型等无关。结论 bcl- XL

鼠bcl-X_L基因在CHO细胞中的表达

目的 :构建携带鼠bcl XL 基因的真核表达载体 ,并将其在CHO细胞中表达 .方法 :用反转录PCR获取鼠bcl XL全长cDNA序列 ,将其克隆进pEGFP重组融合表达质粒 .脂质体法转染CHO细胞 ,荧光检测目的蛋白表达 .结果 :成功获得了鼠bcl XLcDNA ,构建了编码鼠bcl XL 的真核融合表达载体pEGFP bcl XL,转染CHO细胞后观察到融合蛋白表达 .结论 :鼠bcl XL 基因的克隆及融合表达 ,为进一步在高密度、大规模细胞培养中利用bcl

大鼠液压脑损伤后 bax/ bcl-x_L的表达在 m RNA和蛋白质水平的相关性(英文)

目的 :探讨脑创伤后 bax/bcl- x L 在 m RNA和蛋白水平的变化规律及其与神经细胞凋亡发生、发展的关系。方法 :在液压脑损伤模型中 ,应用逆转录聚合酶链反应、免疫组化分别检测大鼠脑创伤后不同时程 bax和 bcl- x L 表达 ;采用凋亡原位末端标记、电镜超微结构、DNA凝胶电泳观察脑创伤后细胞凋亡的形态和生化特征。结果 :伤后 6 h,bcl- x L m RNA表达下调 [伤侧半球为对侧的 (6 7.42± 7.5 4) % ],bcl- x L 蛋白水平下降 [伤侧为对侧的 (85 .85± 5 .72 ) % ]。伤后 3d,bcl- x L m RNA和 bcl- x L蛋白表达分别为对侧的 (39.97± 3.6 1) %和 (5 7.5 0± 6 .2 1) % ;bax m RNA和 bax蛋白分别为对侧半球的 (2 0 3.95± 17.5 3) %和 (189.0 2± 7.2 3) %。伤后 bax/bcl- x L 比率升高比细胞凋亡提前出现 ,早期由于 bcl- x L 的表达下降 ,后期主要是由于 bax的升高所致。结论 :细胞凋亡及其调节基因的表达间具有一致性 ;脑创伤对 bax和 bcl- x L 的调节发生在转录水平以前的某一环节。bax/bcl- x L

细菌内同源重组高效制备含绿色荧光蛋白和抗凋亡基因bcl-X_L的重组腺病毒载体

目的 :制备含绿色荧光蛋白和抗凋亡基因bcl-XL 的重组腺病毒载体。方法 :采用PCR方法从质粒pEGFP -C3 -bcl-XL 中扩增出bcl-XL 基因 ,再亚克隆至腺病毒穿梭质粒中 ,形成转移质粒pAdTrack -CMV -bcl-XL;然后与pAdEasy - 1共转化BJ51 83菌 ,采用细菌内同源重组法构建重组腺病毒质粒pAdEasy - 1 -gfp -bcl-XL,筛选同源重组的阳性克隆 ;抽提的pAdEasy - 1 -gfp -bcl-XL 经PacI线性化后 ,再用LIPOFECTAMINETM2 0 0 0介导转染至人胚肾 2 93细胞内包装扩增出重组腺病毒颗粒 ;采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定 ;用氯化铯超高速梯度离心纯化获取高滴度的重组腺病毒rAd -gfp -bcl-XL。结果 :由pAdTrack -CMV -bcl-XL 和pAdEasy - 1共转化BJ51 83菌1 6 - 2 0h后 ,可获得 35 %的阳性重组体细菌克隆。由重组质粒DNA经 2 93细胞包装后产生的重组腺病毒 ,经PCR检测表明含有目的基因bcl-XL。氯化铯纯化所得重组腺病毒滴度约为 6 5× 1 0 1 2 PFU/L。结论 :用细菌内同源重组法可以高效、简便、快捷地制备出重组腺病毒质粒载体 ,重组体病毒质粒经 2 93细胞包装、扩增和氯化铯纯化后可制备出高滴度的重组腺病毒颗粒rAd -gfp -bcl-XL,为人类相关疾病的基因治疗提供良好的基因转染载体。

BAD和Bcl-X/L基因在小鼠胸腺细胞凋亡时的表达及其意义

目的检测BAD和Bcl-X/L基因在小鼠胸腺细胞凋亡的表达,探讨细胞凋亡调控基因在小鼠胸腺细胞凋亡时的作用。方法应用免疫组织化学染色法,观察不同剂量糖皮质激素诱导的小鼠胸腺细胞凋亡时BAD和Bcl-X/L基因的表达。结果免疫组织化学结果表明,正常对照组胸腺内BAD呈低表达,地塞米松组随剂量的增加BAD的表达成递增趋势,地塞米松各组与对照组比较差异有有统计学意义(P<0.05);正常对照组胸腺内Bcl-X/L呈高表达,地塞米松组随剂量的增加Bcl-X/L的表达成递减趋势,地塞米松各组与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论促凋亡蛋白BAD和抗凋亡蛋白Bcl-X/L在糖皮质激素诱导引起的胸腺细胞凋亡调控中起重要作用。

反义RelA下调白血病耐药细胞株HL-60/E6 bcl-x_L mRNA

为了探讨NF κB对白血病耐药细胞株HL 6 0 E6bcl x基因转录的影响 ,首先在体外采用间歇小剂量表阿霉素 (6ng ml)作用于HL 6 0细胞的方法 ,建立了性能稳定的广谱耐药细胞株HL 6 0 E6。然后用RT PCR方法检测 5 μmol L硫代修饰反义RelA作用于HL 6 0 E6细胞后bcl x基因mRNA水平的变化。同时应用免疫荧光技术和流式细胞术分别对HL 6 0 E6细胞中NF κB RelA的功能状态及脂质体作为寡核苷酸载体的转染效率进行评估。结果表明 ,在HL 6 0 E6细胞中RelA表达于胞核 ,NF κB处于持续活化状态。脂质体介导的寡核苷酸 (ODN)的转染效率明显高于裸ODN组 ,在 4 ,6和12小时时有显著差异 (P <0 .0 1)。反义RelA作用于HL 6 0 E6细胞后 ,bcl xL mRNA水平下降呈时间依赖性 ,8小时抑制达到最高峰 ,15小时后逐渐恢复 ,而对照组bcl xL mRNA水平变化不明显。分析结果认为 ,NF κB对bcl x有转录调节作用 ,反义技术封闭RelA亚基可以减弱NF κB对bcl xL 基因的转录激活 ,进而推测NF κB可能是白血病细胞耐药的一个重要因子。

大鼠液压脑损伤后bax和bcl-X_L的表达改变在mRNA和蛋白水平的相关性

目的 探讨脑创伤后bax和bcl xL 在mRNA和蛋白水平的变化规律及其与神经细胞凋亡发生、发展的关系。方法 在液压脑损伤模型中 ,应用逆转录聚合酶链反应、免疫组化分别检测大鼠脑创伤后不同时程bax和bcl xL 的表达 ;采用凋亡原位末端标记、电镜超微结构、DNA凝胶电泳观察脑创伤后细胞凋亡的形态和生化特征。结果 伤后 6h ,bcl xL mRNA下调 [伤侧半球为对侧的 (6 7.42± 7.5 4) % ],bcl xL 蛋白水平下降 [伤侧为对侧的 (85 .85± 5 .72 ) % ]。伤后 3d ,bcl xL mRNA和bcl xL 蛋白表达分别为对侧的 (39.97± 3.6 1) %和 (5 7.5 0± 6 .2 1) % ;baxmRNA和bax蛋白分别为对侧半球的 (2 0 3.95± 17.5 3) %和 (189.0 2± 7.2 3) %。伤后bax/bcl xL 比率升高比细胞凋亡提前出现 ,早期由于bcl xL 的表达下降 ,后期主要是由于bax的升高所致。结论 细胞凋亡及其调节基因的表达间具有一致性 ;脑创伤对bax和bcl xL 的调节发生在转录水平以前的某一环节。bax/bcl xL 平衡体系的维持或紊乱影响脑创伤后神经细胞生存或死亡。

食管鳞癌端粒酶活性、端粒酶逆转录酶及bcl-X/L表达的研究

目的 探讨食管鳞癌组织中端粒酶活性、端粒酶逆转录酶 (hTERT )及bcl X /L的表达及其它们之间的关系。方法 应用TRAP -银染法检测 45例食管鳞癌组织的端粒酶活性 ,采用原位杂交及免疫组织化学方法对癌组织进行hTERT及bcl X/L表达的检测。结果 癌组织端粒酶活性阳性率为 82 .2 % ,hTERT及bcl X/L的表达阳性率分别为 64 .4%及 71.1% ,bcl X/L的蛋白表达及hTERT的mRNA表达与端粒酶活性均有相关性。结论 食管鳞癌组织中端粒酶活性、hTERT及bcl X /L的表达阳性率均较高。hTERT及bcl X/L的表达对端粒酶活性有一定调节作用。

bcl-X/L蛋白在食管鳞癌癌变过程中的表达及临床意义

目的 :探讨bcl X L蛋白在食管鳞癌癌变过程中的表达。方法 :采用SABC免疫组化法 ,检测 4 5例食管鳞癌组织、癌旁粘膜及切缘正常粘膜上皮的bcl X L表达情况。结果 :非典型增生的bcl X L阳性率明显高于正常及单纯增生上皮 ,差异有高度显著性 (P <0 0 1)。随着非典型增生的加重 (轻、中、重 )bcl X L的阳性率逐渐升高 ,差异有显著性 (P <0 0 1)。癌组织中bcl X L表达较高且与癌分化程度、淋巴结转移无关 (P >0 0 5 )。结论 :bcl X L高表达在食管鳞癌的发生中起一定作用 。

胰腺癌细胞对 5 - Fu和吉西它滨获得性耐药后bcl- x_L 和mcl- 1表达的变化(英文)

目的 :探讨胰腺癌细胞对 5 Fu和吉西它滨的获得性耐药后bcl xL 和mcl 1表达的变化。方法 :应用SRB方法检测 5 Fu和吉西它滨对胰腺癌细胞株Panc 1,Mia Paca 2和Capan 1的细胞毒性作用 ,应用Westernblot法来检测bcl xL 和mcl 1的蛋白表达水平。结果 :5 Fu和吉西它滨对 3株胰腺癌细胞均产生了细胞毒性作用 ,5 Fu长期作用后 ,Capan 1细胞IC50 上升了 2 .1倍 (P <0 .0 5 )。吉西它滨长期作用后 ,Capan 1细胞IC50 上升了 1.5倍 (P <0 .0 5 )。 5 Fu或吉西它滨长期作用后 ,产生了获得性耐药的胰腺癌细胞bcl xL 和mcl 1表达水平上调。结论 :5 Fu或吉西它滨长期作用后 ,产生了获得性耐药 ,这种耐药与bcl xL 和mcl 1的过度表达相关。

热诱导颊癌细胞凋亡与Bcl-x_L蛋白表达的关系

目的 探讨热诱导BcaCD885细胞凋亡与Bcl-xL 蛋白表达变化的关系。方法 4 3 C 4 0min水浴加温诱导BcaCD885细胞产生凋亡。采用流式细胞仪 (FCM) -DNA及抗体检测技术分别测定细胞凋亡率及Bcl-xL蛋白表达量 ,观测热诱导颊癌细胞凋亡过程中Bcl-xL 蛋白表达的动态变化 ,探讨二者间的关系。结果 凋亡组内Bcl-xL 蛋白表达量明显低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,凋亡率与Bcl-xL 蛋白表达水平存在负相关关系 (r =- 0 .89,P<0 .0 5 )。结论 Bcl-xL

大鼠bcl-x_L cDNA的克隆和高滴度重组bcl-x_L腺相关病毒的制备

以RT PCR法从大鼠脑组织中克隆bcl XL 基因 ,将其定向插入带rep cap基因和neu基因的三功能腺相关病毒 (AAV)载体 ,转染HeLa细胞并以G4 18筛选 ,然后用腺病毒感染筛选后的细胞克隆 ,包装成重组腺相关病毒 .用带rep cap基因的C12细胞筛选和滴定产生重组腺相关病毒的细胞克隆 ,粗制细胞裂解物中病毒滴度最高只有 3× 10 5IU ml.从产病毒量较高的克隆大量制备重组病毒 ,经肝素柱高压液相亲和层析法纯化、浓缩病毒后获得了高达 4× 10 11IU ml的重组病毒 .为研究脑缺血动物模型中BCL XL

肝肽、脾肽对荷瘤裸鼠肿瘤细胞中Bcl-2、Bax表达的影响

目的:观察两种抗癌生物活性肽对荷瘤裸鼠肿瘤细胞中Bcl-2、Bax表达的影响。方法:建立人胃癌裸鼠模型,裸鼠随机分为三组:对照组11只、脾肽实验组12只,肝肽实验组11只;分别尾静脉注射生理盐水0.2mL、脾肽0.2mL,肝肽0.2mL,隔日给药2wk后处死裸鼠,剥取肿瘤,以4%多聚甲醛固定,常规石蜡包埋,4μm切片。应用免疫组化法检测Bcl-2、Bax蛋白在实验组与对照组中的表达情况。结果:Bcl-2蛋白在对照组肿瘤中阳性表达较强,肝肽、脾肽组裸鼠肿瘤中Bcl-2蛋白的表达均比对照组表达弱,且有显著性差异(P<0.001);Bax蛋白在对照组肿瘤中阳性表达较弱,在肝肽组、脾肽组裸鼠肿瘤中Bax蛋白的表达均比对照组的表达强,有显著性差异(P<0.001)。结论:肝肽、脾肽具有较好的抑制荷胃癌裸鼠肿瘤生长的作用,其作用机制与影响Bcl-2及Bax的表达相关。