夹脊电针对大鼠脊髓损伤后bcl-2mRNA表达的影响

为了探讨夹脊电针治疗脊髓损伤的机制,选用Wistar健康雄性大鼠,随机分为模型组、电针密波治疗组、地塞米松组及假手术组.采用改良的Allen's捶击法致大鼠T11-12脊髓损伤,应用原位杂交化学方法观察脊髓损伤早期bcl-2mRNA的表达.研究结果表明:伤后6h内进行治疗较伤后12h进行治疗,能更好地促进损伤大鼠的运动功能恢复,并且脊髓损伤早期,地塞米松治疗疗效优于密波组;脊髓损伤中晚期,密波组疗效好于药物组.结论表明:夹脊电针可上调bcl-2mRNA表达,从而减少或抑制细胞凋亡的发生.

抗痫灵对戊四氮诱导癫痫大鼠海马区Bcl-2mRNA及其蛋白表达的影响

目的:观察中药复方抗痫灵对戊四氮致痫大鼠海马Bcl-2mRNA及其蛋白表达的影响。方法:观察大鼠痫性发作行为;采用免疫组化方法检测大鼠脑组织中海马Bcl-2蛋白的表达;采用实时荧光定量(Real timePCR)方法检测大鼠海马组织Bcl-2mRNA的相对表达。结果:经过中药复方抗痫灵治疗6周后,大鼠痫性发作行为明显减少;海马区抑制凋亡基因Bcl-2mRNA及其蛋白表达均升高。结论:抗痫灵能减少癫痫发作次数,上调海马区抑凋亡基因Bcl-2mRNA及其蛋白表达。

传染性法氏囊病毒对SPF雏鸡免疫器官细胞凋亡及bcl-2mRNA表达的影响

为证实传染性法氏囊病毒(IBDV)感染SPF雏鸡后,其免疫器官细胞凋亡与bcl-2mRNA动态表达的关系,应用TUNEL和实时荧光定量PCR方法分别对雏鸡免疫器官细胞凋亡数量和bcl-2mRNA表达的动态变化进行了检测,结果发现,IBDV感染雏鸡后3～7d,法氏囊、胸腺和脾脏中凋亡细胞数量显著或极显著高于相应对照雏鸡(P<0.01或P<0.05);同时在上述3种免疫器官中bcl-2mRNA的表达均不同程度增加,并于病毒感染后3～7d差异显著或极显著(P<0.01或P<0.05)。表明IBDV可增加感染雏鸡免疫器官的细胞凋亡数量和bcl-2mR-NA的表达。

针灸预处理对缺血再灌注大鼠心肌Bcl-2mRNA和BaxmRNA基因表达的影响

目的:为探求针灸预处理与缺血预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠Bcl-2mRNA及BaxmRNA的影响,丰富治未病理论。方法:采用针灸预处理组间,针灸预处理与缺血预处理比较,利用大鼠心肌缺血再灌注模型观察,分正常对照组,假手术组,缺血再灌注组,缺血预处理组,手针预处理日1次组,电针预处理日1次组,艾灸预处理日1次组,手针预处理日2次组,电针预处理日2次组,艾灸预处理日2次组。结果:表明针灸预处理与缺血预处理使bcl-2mRNA增多,使baxmRNA减少,且针灸预处理日2次组比日1次组和缺血预处理更有效,进一步证明了中医针灸"治未病"理论科学价值。

清热化瘀滋阴法对系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞bcl-2mRNA表达的影响

目的探讨清热化瘀滋阴法对系统性红斑狼疮(SLE)早期患者外周血淋巴细胞bcl-2mRNA表达的影响。方法用清热化瘀滋阴法治疗SLE患者15例,抽取患者服药前后肘静脉血,淋巴细胞分离液分离其外周血淋巴细胞,提取淋巴细胞总RNA,采用一步法RT-PCR技术,检测服用清热化瘀滋阴中药对bcl-2mRNA的表达的影响。结果用药前后均可见bcl-2mRNA的表达。服用清热化瘀滋阴中药后bcl-2mRNA的表达明显低于用药前(P<0.01)。结论清热化瘀滋阴中药可能通过下调患者外周血淋巴细胞bcl-2mRNA的表达发挥对SLE的治疗作用。

槲寄生碱对人肝癌细胞株SMMC-7721 bcl-2mRNA表达的影响

为研究槲寄生碱对人肝癌细胞株SMMC-7721对bcl-2mRNA表达的影响。采用半定量RT-PCR法测定bcl-2mRNA表达变化。结果表明,RT-PCR检测SMMC-7721细胞中bc1-2、mRNA表达的相对强度,发现bc1-2mRNA的表达强度降低(P<0.05)。说明中药槲寄生碱抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖作用与降低bcl-2mRNA表达水平有关。

川芎嗪对脑挫伤皮质Bcl-2mRNA表达的影响

目的:探讨川芎嗪对脑挫伤皮质Bcl-2 mRNA表达的影响。方法:采用Feeney法复制大鼠脑挫伤动物模型,Wistar大鼠30只,随机分成正常组、模型组和治疗组。采用原位杂交与医学图像分析技术检测Bcl-2 mRNA阳性细胞数目、平均灰度值。结果:大脑皮质Bcl-2 mRNA在模型组阳性神经元多、着色深,平均数密度值高而平均灰度值低;正常组中着色浅、阳性细胞数少,平均灰度值大,二者差异有显著性(P<0.01)。治疗组与模型组比较,Bcl-2 mRNA阳性神经元增多,平均灰度值降低(P<0.01)。结论:脑挫伤后Bcl-2 mRNA表达增强,川芎嗪可上调Bcl-2 mRNA的表达,从而抑制神经细胞凋亡,在脑挫伤中起到神经保护作用。

温胆汤含药血清对PC12细胞Bax、Bcl-2mRNA表达的影响

目的:探讨温胆汤含药血清对PC12细胞Bax/Bcl-2mRNA表达的影响。方法:(1)含药血清制备:30只SD大鼠随机分为三组:温胆汤高剂量组(A),温胆汤中剂量组(B),温胆汤低剂量组(C)。温胆汤灌胃,一天一次,8天后处死大鼠,股动脉取血,离心取血清,灭活无菌过滤备用。(2)PC12细胞分组培养:将PC12细胞分为4组,即:正常对照组(普通培养基培养)、温胆汤高剂量含药血清组、温胆汤中剂量含药血清组、温胆汤低剂量含药血清组,按照相应的分组更换含药血清进行培养16小时后,提取总mRNA,应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法,检测PC12细胞Bax/Bcl-2mRNA的表达量。结果:温胆汤各组Bax mRNA的表达量较对照组有所降低,有显著性差异(P<0.05或P<0.01);而温胆汤高剂量组和温胆汤中剂量组使Bcl-2 mRNA的表达量比对照组有所升高,有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论:温胆汤能够降低PC12细胞Bax mRNA的表达量,并且可升高Bcl-2 mRNA的表达量。

bax/bcl-2mRNA在甲状腺功能减退合并妊娠期高血压胎盘组织中的表达

妊娠期高血压疾病是妊娠期特有的疾病，是随着妊娠出现并加重的、全身小动脉痉挛导致高血压为主要临床表现的疾病．可造成多脏器功能损伤甚至衰竭。2010年1月至2011年6月，我们采用原位杂交法检测bax／bcl-2mRNA表达．

密蒙花总黄酮对去势导致干眼症雄鼠泪腺Bax mRNA、Bcl-2 mRNA表达的影响

目的观察密蒙花总黄酮对雄激素水平下降所致干眼症雄鼠的泪腺上皮细胞中Bax mRNA、Bcl-2mRNA表达的影响。方法将健康1月龄、体质量150～180gWistar雄性大鼠150只随机分为A1、B1、C1、D1、E1、A3、B3、C3、D3、E3、A5、B5、C5、D5、E5共15组,每组10只。采用去势的方法建立雄激素水平下降所致干眼症动物模型,分别观察各组SchimerI试验、泪膜破裂时间及角膜荧光素染色情况,以确定干眼症模型是否建立成功。其中,A代表正常组;B代表假手术组;C代表模型对照组;D代表雄激素对照治疗组(造模成功后,丙酸睾酮1mg.kg-1大腿肌肉注射,每3d1次);E代表密蒙花总黄酮治疗组(造模成功后,密蒙花总黄酮0.045g.kg-1灌胃,每3d1次);1代表饲养1个月;3代表饲养5个月;5代表饲养7个月。用RT-PCR法对各组泪腺组织中Bax mRNA、Bcl-2mRNA的表达进行检测,并比较。结果SchimerI试验、泪膜破裂时间及角膜荧光素染色结果显示,大鼠均在造模3个月后形成干眼症。D3组、D5组泪腺组织中的BaxmRNA相对含量较C3组、C5组降低,差异均有统计学意义(均为P<0.01);E3组、E5组较C3组、C5组亦降低,差异亦均有统计学意义(均为P<0.01);且E3组(3.787±0.165)与E5组(5.707±0.411)BaxmRNA相对含量差异有统计学意义(P<0.01);D5组(4.610±0.481)与E5组间比较差异亦有统计学意义(P<0.01)。D3组、D5组Bcl-2mRNA的相对含量较C3组、C5组增加,差异均有统计学意义(均为P<0.01);E3组、E5组较C3组、C5组亦增加,差异均有统计学意义(均为P<0.01);D5组(5.713±0.339)与E5组(3.147±0.057)间比较Bcl-2mRNA表达差异有统计学意义(P<0.01);且E3组(8.427±0.055)与E5组比较差异亦有统计学意义(P<0.01)。结论密蒙花总黄酮可使大鼠泪腺中Bcl-2mRNA表达增加,降低BaxmRNA的表达,但随病程的延长其作用弱于雄激素。密蒙花总黄酮治疗雄激素水平下降所致干眼症的机制可能与其产生拟雄激素效应后,对凋亡相关基因Bcl-2mRNA表达的上调和Bax mRNA表达的下调有关。

电针调节脑缺血再灌注大鼠大脑皮层Bcl-2和Bax mRNA的表达

目的:探讨电针是否通过干预Bax/Bcl-2 mRNA的表达,来调控缺血再灌注大鼠大脑皮层细胞凋亡,发挥电针对脑神经元保护作用。方法:将清洁级健康雄性SD大鼠19只,按随机数字表随机分成假手术组(n=5)和用于造模动物14只,采用改良Longa线栓大脑中动脉法制作局灶性脑缺血再灌注模型。在成功制作出脑缺血再灌注模型并作神经缺损综合评分为2分以上后随机分为模型组、电针组,每组各7只。取电针组大鼠"百会"及"大椎"穴,采用疏密波刺激30min,电流强度1～3mA,频率20Hz/80Hz,疏、密波交替时间各为1.5s。用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别检测大鼠大脑皮层组织Bcl-2和Bax mRNA的表达。结果:与假手术组相比,模型组Bcl-2、Bax mRNA表达均显著升高,而Bcl-2/Bax比值显著下降;与模型组相比,电针组Bax mRNA表达降低,Bcl-2 mRNA表达虽无统计学差异,但Bcl-2/Bax比值显著上升,形成以Bcl-2占优势的Bcl-2/Bax二聚体。结论:电针可以通过调控内源性凋亡途径,抑制Bax的促凋亡作用,降低缺血再灌注区的细胞凋亡,促进细胞的存活,这可能是电针拮抗局灶性脑缺血再灌注损伤后的神经细胞凋亡,保护脑神经元的分子生物学机制之一。

环境雌激素辛基酚对人MCF-7细胞凋亡调控基因bcl-2 mRNA表达的影响

目的研究具有雌激素活性的环境污染物辛基酚对雌激素受体阳性的乳腺癌细胞MCF_7凋亡调控基因bcl_2mRNA表达的影响及与雌二醇作用的异同。方法分别以不同浓度的17β_雌二醇和辛基酚刺激体外培养的MCF_7细胞12～120h ,用RT_PCR方法测定细胞bcl_2mRNA的表达量。结果17β_雌二醇和辛基酚作用MCF_7细胞24h后bcl_2mRNA表达量显著升高,持续至120h ,较宽浓度范围的辛基酚均可引起bcl_2表达增高 ,以10-6 mol/L作用最强。结论辛基酚具有类似雌二醇的刺激MCF_7细胞bcl_2表达的作用 。

茅莓总皂苷对大鼠局灶性脑缺血/再灌注后凋亡相关基因Bcl-2mRNA,BaxmRNA表达的影响

目的:探讨茅莓总皂苷对缺血性再灌注后凋亡相关基因Bcl-2mRNA,BaxmRNA表达的影响。方法:采用大鼠大脑中动脉阻塞造成局灶性脑缺血再灌注模型,以原位杂交技术观察脑缺血再灌注不同时间点茅莓总皂苷5,10,20 mg.kg-1对凋亡相关基因Bcl-2 mRNA,Bax mRNA的表达。结果:3个剂量的茅莓总皂苷治疗组增加Bcl-2 mRNA阳性细胞的表达,降低Bax mRNA阳性细胞的表达。结论:茅莓总皂苷有明显的抗凋亡作用可能与增加Bcl-2 mRNA阳性细胞的表达,降低BaxmRNA阳性细胞的表达有关。

补肾益气活血方对兔软骨细胞凋亡和bcl-2 mRNA表达的影响

目的:观察补肾益气活血方含药血清对硝普钠诱导的体外培养兔关节软骨细胞凋亡和bcl-2mRNA表达的影响。方法:取新西兰兔的关节软骨,将软骨细胞分离传代后,置入37℃、5%CO2培养箱内,各组在相应的血清培养24h后,采用TUNEL法和原位杂交法分别检测各组软骨细胞的凋亡和bcl-2mRNA表达。结果:①补肾益气活血方含药血清各组的软骨细胞凋亡率明显低于模型组(P<0.01)。②补肾益气活血方含药血清各组对软骨细胞bcl-2mRNA表达明显高于模型组(P<0.01)。结论:补肾益气活血方能通过上调bcl-2mRNA的表达,抑制软骨细胞的凋亡,达到防治膝骨关节炎的目的。

曲美他嗪对大鼠局灶性脑缺血再灌注Bcl-2 mRNA、Caspase-3 mRNA表达的影响

目的观察曲美他嗪(TMZ)对大鼠局灶性脑缺血后神经细胞Caspase-3 mRNA、Bcl-2 mRNA表达的影响。方法成年健康Wistar大鼠45只,随机分为假手术对照组(n=5)、脑缺血再灌注组(n=20)、TMZ预处理组(n=20)。应用线栓法建立大脑中动脉闭塞再灌注模型。采用原位杂交方法检测脑组织Caspase-3 mRNA、Bcl-2m RNA表达的变化。结果Bcl-2 mRNA在缺血再灌注3h表达增强(P<0.05),6h显著增强(P<0.01),24h减弱(P<0.05),48h消失(P>0.05)。TMZ组的Bcl-2 mRNA表达量多于缺血再灌注组,差异有统计学意义(P<0.05)。Caspase-3 mRNA在再灌注3h表达增强(P<0.05),6h显著增强(P<0.01),24h更加明显(P<0.01),48h减弱(P<0.05)。TMZ组的Caspase-3 mRNA表达量显著少于缺血再灌注组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论TMZ可能通过诱导Bcl-2的表达和抑制Caspase-3的生成而发挥抗凋亡作用。

大豆异黄酮对去卵巢大鼠阴道上皮Bcl-2mRNA影响

目的探讨大豆异黄酮对去卵巢大鼠阴道上皮细胞凋亡及Bcl-2 mRNA表达的影响。方法Wistar大鼠50只,随机分为假手术组、模型组、雌二醇组、大豆异黄酮高剂量组及低剂量组。采用原位末端标记法及原位杂交方法检测阴道上皮细胞凋亡及Bcl-2 mRNA,并应用图像分析系统进行测定。结果雌二醇组、大豆异黄酮高、低剂量组均可使去卵巢大鼠阴道重量增加,分别为(0.125±0.024),(0.123±0.020),(0.109±0.022)g,与模型组(0.074±0.046)g比较,差异均有统计学意义(P<0.01);假手术组未见凋亡细胞,其余各组均可见凋亡细胞,大豆异黄酮高、低剂量组凋亡细胞数与雌二醇组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);雌二醇组、大豆异黄酮高、低剂量组的Bcl-2 mRNA平均灰度值与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.05),但大豆异黄酮高、低剂量组的Bcl-2 mRNA平均灰度值与雌二醇组比较,差异均无统计学意义。结论大豆异黄酮可以抑制阴道上皮细胞的凋亡,通过上调Bcl-2 mRNA的表达是其作用途径之一。

反义bcl-2 mRNA对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y生长和凋亡的作用

目的 研究反义bcl-2 mRNA对人神经母细胞瘤（NB）细胞株SH-SY5Y的生长和凋亡的作用。方法采用定向克隆构建携带反义bcl-2 cDNA片段的逆转录病毒载体PBabe-puro/Asbcl-2；应用脂质体Lipofectamine转染SH-SY5Y，经嘌呤霉素筛选，应用RT-PCR证实外源性反义bcl-2 mRNA的表达，建立细胞株SH-SY5Y/Asbcl-2；应用免疫组化和Western印迹分析Bcl-2蛋白的表达变化；MTT法做细胞的生长曲线观察细胞的生长情况；通过提取基因组DNA检测顺式氯铂（CP）诱导的细胞凋亡所形成的DNA 梯带。结果RT-PCR证实转染细胞SH-SY5Y/Asbcl-2中有外源性反义bcl-2 mRNA的表达；免疫组化及Western印迹分析显示SH-SY5Y/Asbcl-2细胞的Bcl-2蛋白表达明显降低；生长曲线显示SH-SY5Y/Asbcl-2细胞生长缓慢;加入CP相同时间后，SH-SY5Y/Asbcl-2细胞凋亡形成的DNA 梯带更明显。结论脂质体方法转染携带反义bcl-2 cDNA片段的逆转录病毒载体能够获得稳定转染和表达反义bcl-2 mRNA的细胞；反义bcl-2 mRNA可抑制内源性Bcl-2蛋白的表达，抑制SH-SY5Y细胞的生长，增加SH-SY5Y细胞对CP的敏感性，促进细胞凋亡。

大肠癌bcl-2基因蛋白及mRNA的表达

为了探讨大肠癌组织中ｂｃｌ－２基因蛋白及ｍＲＮＡ的表达情况，应用免疫组织化学和原位杂交技术检测６０ 例大肠癌组织中不同分化程度的ｂｃｌ－２基因蛋白及 ｍＲＮＡ的表达程度。结果显示，６０例大肠癌ｂｃｌ－２蛋白 阳性表达率为９０％，６０例大肠癌ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ阳性表达率为８３ ３％，两者的表达水平呈正相关（ｒｓ＝０.９９９， Ｐ＜０.０１），并均显示高分化组低于低分化组。提示大肠癌ｂｃｌ－２基因高表达可抑制细胞凋亡，由此引起的细 胞过度增殖在大肠癌的发生发展中起着重要作用。