IL-35、Beclin-1在乳腺癌患者外周血中的水平及意义

目的探讨白细胞介素(IL)-35、自噬相关蛋白Beclin-1在乳腺癌患者外周血中的水平及意义。方法选取2022年5-10月在上海市嘉定区妇幼保健院诊治的原发性乳腺癌女性患者44例(乳腺癌组)、乳腺良性肿瘤女性患者40例(乳腺良性肿瘤组)及体检的健康者40例(健康对照组)作为研究对象。采用酶联免疫吸附试验检测并比较各组外周血中IL-35和Beclin-1水平,同时检测乳腺癌患者糖类抗原15-3(CA15-3),比较不同临床病理特征的乳腺癌患者IL-35、Beclin-1、CA15-3水平;分析乳腺癌患者外周血IL-35、Beclin-1、CA15-3水平之间的相关性。结果乳腺癌组和乳腺良性肿瘤组外周血IL-35水平均高于健康对照组(P<0.05),Beclin-1水平均低于健康对照组(P<0.05)。乳腺癌组外周血IL-35水平高于乳腺良性肿瘤组(P<0.05),Beclin-1水平低于乳腺良性肿瘤组(P<0.05)。不同病理分级、淋巴结转移情况的乳腺癌患者外周血IL-35、Beclin-1水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);不同雌激素受体(ER)检测结果的乳腺癌患者外周血IL-35水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),而Beclin-1水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌患者外周血IL-35水平与Beclin-1水平呈负相关(r=-0.484,P<0.05);IL-35、Beclin-1水平与CA15-3水平均无相关性(均P>0.05)。结论乳腺癌患者外周血IL-35水平升高、Beclin-1水平降低。不同病理分级、淋巴结转移情况的乳腺癌患者外周血IL-35、Beclin-1水平有明显差异。乳腺癌患者外周血IL-35水平与Beclin-1水平呈负相关,而IL-35、Beclin-1水平与肿瘤标志物CA15-3水平均无关。

痛风性关节炎患者血清RETN、Beclin-1的表达及其临床意义

目的探讨痛风性关节炎(GA)患者血清抵抗素(RETN)、Beclin-1的表达特点,分析其与GA临床特征及临床疗效的关系。方法将2019年1月至2022年12月东莞市人民医院收治的82例GA患者(GA组)和60例健康志愿者(对照组)纳入研究。GA患者治疗前后(对照组体检当日)检测血清RETN、Beclin-1的表达,比较不同临床特征和疗效GA患者血清RETN、Beclin-1表达差异。Pearson相关性分析GA患者血清RETN、Beclin-1表达与尿酸(UA)水平的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清RETN、Beclin-1对GA的诊断价值。结果GA组血清RETN水平高于对照组,Beclin-1相对表达水平低于对照组(P<0.05)。急性期、病程≥5年、受累关节≥5个、年发作频率≥3次GA患者血清RETN水平高于慢性期和间歇期、病程<5年、受累关节<5个、年发作频率<3次GA患者(P<0.05),Beclin-1相对表达水平低于慢性期和间歇期、病程<5年、受累关节<5个、年发作频率<3次GA患者(P<0.05)。GA患者血清UA水平与RETN水平呈正相关(r=0.674,P<0.05),与Beclin-1相对表达水平呈负相关(r=-0.568,P<0.05)。有效组治疗后血清RETN水平低于无效组,Beclin-1相对表达水平高于无效组(P<0.05)。联合RETN、Beclin-1诊断GA的曲线下面积为0.921,高于单独诊断(Z=3.752、3.154,P<0.05)。结论GA患者血清RETN水平增高,Beclin-1相对表达水平降低,且与UA水平增高、GA急性期、病程延长、受累关节数量和年发作频率增加及治疗无效有关。RETN、Beclin-1可作为GA诊断的标志物。

Beclin-1联合Cx43对甲状腺癌的诊断价值及与甲状腺细针穿刺诊断准确率对比

目的 探讨自噬相关基因Beclin-1联合细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)对甲状腺癌的诊断价值,并分析两者联合与甲状腺细针穿刺诊断对甲状腺癌准确率差异。方法 选取医院2020年10月至2023年10月收治的80例甲状腺癌患者作为观察组,另取同期收治的80例甲状腺结节患者作为对照组,取所有患者术后病理组织进行免疫组化染色,qRT-PCR仪进行检测与扩增,采用2-△△α法计算Beclin-1、Cx43的相对表达量,并将两组患者Beclin-1、Cx43水平进行对比。采用Spearman相关分析法分析Beclin-1、Cx43和甲状腺癌的相关性,并使用受试者工作特征(ROC)曲线分析Beclin-1联合Cx43诊断甲状腺癌的效果,并对比两者联合与甲状腺细针穿刺对甲状腺癌的诊断价值。结果 经免疫组化结果显示,两组细胞质内均检测到Beclin-1、Cx43,且观察组的Beclin-1、Cx43相对表达量比对照组更少(P<0.05),而Beclin-1、Cx43阳性率也同样小于对照组(P<0.05);Spearman相关分析结果显示,Beclin-1、Cx43和甲状腺癌呈现负相关(P<0.05);Beclin-1对甲状腺癌的诊断曲线下面积为0.822,最佳阈值为13.52;Cx43诊断甲状腺癌的曲线下面积为0.875,最佳阈值为18.67,两者联合的曲线下面积为0.932;Beclin-1联合Cx43对甲状腺癌的诊断灵敏度与特异度明显高于单一指标(P<0.05);Beclin-1联合Cx43对甲状腺癌的诊断准确率为93.75%,甲状腺细针穿刺对甲状腺癌的诊断准确率为98.75%,两者对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论Beclin-1联合Cx43对甲状腺癌的诊断灵敏度与特异度较高,且两者联合与甲状腺细针穿刺诊断甲状腺癌准确率对比并无显著差异,可考虑将Beclin-1、Cx43两者作为甲状腺癌诊断及预后判断的重要标志物。

艾灸对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响

目的观察艾灸对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)大鼠炎症因子白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)及滑膜细胞中自噬相关因子Beclin-1、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule-associated protein1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)表达的影响,探索艾灸治疗RA的作用机制。方法将36只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组、甲氨蝶呤组、艾灸组,每组9只。采用弗氏完全佐剂造模法制备RA大鼠模型。造模成功后艾灸组予艾灸足三里、关元,每次20 min,每天1次;甲氨蝶呤组予甲氨蝶呤0.35 mg/kg灌胃,每周2次。空白组、模型组、甲氨蝶呤组每天给予艾灸组大鼠同样时长及强度的捆绑。每组均干预3周。观察大鼠一般情况,采用足趾容积测量仪检测大鼠左后肢足趾容积,ELISA法检测血清中IL-2含量,Western blot检测大鼠踝关节滑膜组织中Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白相对表达量。结果与模型组比较,甲氨蝶呤组及艾灸组精神一般,反应尚可,体质量恢复,较活跃,摄食、饮水尚可,足部肿胀、红肿缓解,其局部炎症及全身多发性关节炎情况均轻于模型组。与空白组比较,模型组大鼠于造模后第3、10、17、24天足趾容积明显增大(P<0.01),结合一般情况,提示模型制备成功;甲氨蝶呤组、艾灸组足趾容积于第24天增大(P<0.05)。与模型组比较,甲氨蝶呤组造模后第17、24天足趾容积降低(P<0.05,P<0.01),艾灸组第10、17、24天足趾容积明显降低(P<0.01)。干预3周后,与空白组比较,模型组血清中IL-2含量明显升高(P<0.01),滑膜组织Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达量明显上升(P<0.01);与模型组比较,甲氨蝶呤组、艾灸组血清中IL-2含量降低(P<0.05),艾灸组滑膜组织Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达量下降(P<0.05)。结论艾灸能改善RA大鼠关节肿胀,降低IL-2含量,其作用机制可能是通过调节自噬因子Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达量有关。

针刺调控自噬蛋白Beclin-1对脑缺血再灌注损伤大鼠海马区Caspase-9的影响

目的 探讨针刺调控细胞自噬对脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI)大鼠海马区细胞凋亡的影响及机制。方法 110只SD大鼠随机分为正常组22只、假手术组22只和造模组66只,造模组使用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型,成功后随机均分为模型组、针刺组、药物组,每组各22只。针刺组捆绑并针刺“大椎”“百会”“人中”,药物组注射依达拉奉。Garcia神经功能评分评定大鼠神经功能,TTC染色观察脑梗死情况,透射电镜观察海马区自噬小体,TUNEL检测患侧脑组织细胞凋亡率,免疫组化检测海马区半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达,Western blot检测海马区苄氯素-1 (Beclin-1)、Caspase-9表达。结果 干预前后与正常组比较,假手术组各项指标差异均无统计学意义(P>0.05)。干预前,与假手术组比较,造模组神经功能评分下降(P<0.01)。针刺72 h后,与假手术组比较,模型组神经功能评分下降(P<0.01)、脑梗死面积比上升(P<0.01)、缺血侧脑组织细胞凋亡率、海马区Caspase-9、Caspase-3表达量增加(P<0.01)、Beclin-1表达量下降(P<0.05);与模型组比较,药物组、针刺组神经功能评分显著上升(P<0.01)、梗死面积比缩小(P<0.01)、患侧脑组织细胞凋亡率及海马区Caspase-9、Caspase-3下降(P<0.01)、Beclin-1表达量上升(P<0.05)。透射电镜下模型组细胞器肿胀,大多数线粒体变大,见少量溶酶体;针刺组、药物组神经细胞轻度水肿,线粒体轻度肿胀,可见初级溶酶体、自噬小体、自噬溶酶体存在。结论 针刺可调控大鼠自噬关键蛋白抑制CIRI后细胞凋亡,其机制可能与调整自噬影响Caspase-9表达相关。

美洲大蠊研粉干预脊髓半横断大鼠运动功能和自噬蛋白Beclin-1的表达

背景:脊髓损伤有氧化应激、炎症、凋亡、自噬等机制参与其中,激活自噬可改善脊髓损伤后的神经运动功能,对脊髓起保护作用。目的:探讨美洲大蠊研粉对脊髓半横断损伤大鼠后肢运动功能和损伤区域自噬蛋白Beclin-1的影响。方法:取30只6-8周龄SD大鼠,采用随机数字表法分为3组,每组10只:假手术组仅打开椎板,暴露脊髓后缝合;生理盐水组与美洲大蠊组均建立左侧脊髓半横断损伤模型,术后第1天开始分别灌胃给予生理盐水与美洲大蠊研粉,连续给药14 d。术后6 h及1,3,7,14 d行BBB评分,观察后肢运动功能的情况;给药14 d后处死大鼠,采用免疫组化染色、Western Blot检测、免疫荧光染色检测脊髓半横断损伤区域自噬蛋白Beclin-1的表达情况。结果与结论:①随着术后时间的延长,生理盐水组、美洲大蠊组大鼠BBB评分逐渐升高;与假手术组比较,生理盐水组、美洲大蠊组术后6 h及1,3,7,14 d的BBB评分均降低(P<0.05);美洲大蠊组术后7,14 d的BBB评分高于生理盐水组(P<0.05);②免疫组化染色显示,假手术组Beclin-1呈弱阳性表达,主要位于胞浆;生理盐水组Beclin-1主要位于胞浆,可见部分核膜表达;美洲大蠊组Beclin-1主要位于胞浆,可见部分核膜表达;生理盐水组、美洲大蠊组Beclin-1阳性细胞比例多于假手术组(P<0.05),美洲大蠊组Beclin-1阳性细胞比例多于生理盐水组(P<0.05);③Western Blot检测与免疫荧光染色显示,生理盐水组、美洲大蠊组Beclin-1蛋白表达高于假手术组(P<0.05),美洲大蠊组Beclin-1蛋白表达高于生理盐水组(P<0.05);④结果表明,美洲大蠊研粉能够改善脊髓半横断损伤大鼠的后肢运动功能,机制可能是美洲大蠊研粉中的多糖类物质增加了自噬蛋白Beclin-1的表达。

Beclin-1与P62在骨质疏松症中的研究进展

骨质疏松症(OP)是一种以全身性骨量丢失、骨微结构破坏为特征的骨骼疾病,根本病因在于由成骨细胞和破骨细胞介导的骨形成与骨吸收动态平衡失调,骨吸收大于骨形成。而自噬对OP的发生、发展起着重要作用,自噬水平的变化是影响骨平衡的关键因素。研究证实,自噬相关分子Beclin-1、P62通过不同层面直接调控自噬小体的形成,从而影响OP的发生与发展。该文对Beclin-1、P62在OP中的表达机制、作用特点及靶向治疗作一概述,为今后OP的防治以及进一步研究提供理论基础。

自噬相关分子mTOR、Beclin-1及LC3在胸腔积液中的表达及临床意义

目的:探讨自噬相关分子mTOR、Beclin-1及LC3在良恶性胸腔积液中的表达,分析其临床意义。方法:通过液基薄层细胞学检查及免疫组化检查并结合患者临床资料纳入300例胸腔积液标本作为研究对象,分为group165例(漏出性胸腔积液组)、group2142例(非肿瘤炎性胸腔积液组)及group393例(非小细胞肺癌性胸腔积液组),通过RT-PCR方法及Western blot方法分别检测各组胸腔积液中mTOR、Beclin-1及LC3在基因及蛋白水平的表达。结果:在基因和蛋白表达水平,group1及group2相较于group3在Beclin-1和LC3的表达水平均升高,而mTOR的表达则显著减低,差异均有统计学意义;同时,group2较group1在Beclin-1和LC3表达中均降低,mTOR的表达则升高,差异均有统计学意义;此外在良、恶性胸腔积液相关性分析中发现,在蛋白水平Beclin-1相对表达值与LC3表达值呈正相关,而mTOR相对表达值与Beclin-1、LC3表达值呈负相关。结论:自噬相关分子mTOR、Beclin-1及LC3在不同性质胸腔积液中表达存在差异,可能与炎性及非小细胞肺癌引起的肿瘤性胸腔积液的发病机制有关,可为胸腔积液性质鉴定提供新的分子学依据。

怡肾丸对单侧输尿管结扎模型大鼠LC3及Beclin-1表达的影响

目的:探讨怡肾丸对单侧输尿管结扎模型大鼠肾脏LC3及Beclin-1表达的影响。方法:将64只雄性SD大鼠随机分为假手术组(16只)、UUO模型组(16只)、UUO模型+怡肾丸组(16只)、UUO模型+依那普利组(16只)。手术组大鼠游离并结扎左侧输尿管制备肾纤维化模型,假手术组只游离不结扎左侧输尿管。各给药组于造模当日开始给予相应药物,假手术组和模型组灌胃等体积蒸馏水,连续灌胃3周。于术后第3、7、21天分批处死各组大鼠,取血清及左肾标本,检测血清肌酐、尿素氮,HE染色、Masson染色观察其病理形态学改变,免疫组织化学法及qRT-PCR法分别检测肾组织LC3及Beclin-1的蛋白及mRNA表达水平。结果:与假手术组相比,模型组血肌酐、尿素水平均升高(P<0.01);与模型组相比,治疗组肾功能上升速度缓慢(P<0.05);假手术组大鼠肾脏未见明显病理改变。模型组大鼠肾小球硬化,肾小管高度扩张萎缩,小管基底膜变薄,间质区细胞大量增生及纤维化,并随梗阻时间延长而加重,治疗组病理损伤明显减轻,胶原纤维沉积减少(P<0.05);与假手术组相比,模型组的LC3、Beclin1水平升高(P<0.05);与模型组相比,治疗组的LC3、Beclin1表达水平显著上升(P<0.05)。结论:UUO大鼠肾损害过程中自噬被激活,而怡肾丸增强了LC3、Beclin-1自噬相关蛋白的表达水平,并减轻肾纤维化以保护肾脏。

EPO对糖尿病肾病大鼠NK细胞活化性受体及HMGB1/Beclin-1信号通路的影响

目的:基于HMGB1/Beclin-1信号通路探究EPO对糖尿病肾病大鼠NK细胞活化性受体的作用机制。方法:40只SPF级SD雄性大鼠随机分为正常(A)组、模型(B)组、二甲双胍(C)组、EPO(D)组,每组10只,对B、C、D组采用高脂饲料及链脲佐菌素进行糖尿病肾病建模。建模成功后,对C组灌胃100 mg/kg二甲双胍,对D组腹腔内注射100 U/kg EPO,A组、B组同期灌胃等体积生理盐水;另取20只大鼠建模,建模成功后,随机分为E组、F组,E组灌胃给予30 mg/kg HMGB1抑制剂,F组灌胃给予30 mg/kg HMGB1抑制剂和腹腔内注射100 U/kg EPO;取HK-2细胞,分为高糖+HK-2细胞(HH)组、EPO+高糖+HK-2细胞(EH)组、甘草酸苷L+高糖+HK-2细胞(LH)组,葡萄糖培养后进行细胞实验。血糖仪检测大鼠血糖,全自动生化分析仪检测大鼠生化指标,PAS染色法检测大鼠肾组织病理形态,免疫印迹法检测HMGB1/Beclin-1蛋白表达,RT-PCR及免疫组化法检测NK细胞活化性受体表达。结果:与A组比较,B组血糖及血糖曲线、血液及尿液中BUN、Scr、UAlb含量、NKp30、NKp44、NKp46的mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05),体质量明显降低(P<0.05);与B组比较,C组、D组血糖及24 h尿量、血糖曲线、血液及尿液中BUN、Scr、UAlb含量、NKp30、NKp44、NKp46 mRNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05),体质量明显升高(P<0.05),肾脏病理学明显改善,且D组较C组变化显著(P<0.05);与A组比较,B组大鼠肾组织中HMGB1/Beclin-1蛋白表达显著升高(P<0.05),与B组相比,C、D、E、F组大鼠肾组织中HMGB1/Beclin-1蛋白表达均显著降低(P<0.05),且D组HMGB1/Beclin-1蛋白表达与C组相比降低明显(P<0.05),E组与D组无明显差异,F组较E组降低明显;HMGB1/Beclin-1蛋白表达与NKp30、NKp44、NKp46mRNA均呈正相关(P<0.05);与HH组相比,EH、LH组细胞增殖率显著升高(P<0.05),凋亡率及HMGB1/Beclin-1蛋白表达均显著降低(P<0.05),而LH组与EH组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:EPO可有效降低糖尿病肾病大鼠NK细胞活化性受体表达,抑制HMGB1/Beclin-1信号通路,提示EPO可能通过调控NK细胞活化性受体及HMGB1/Beclin-1信号通路发挥作用,而NK细胞活化性受体表达与HMGB1/Beclin-1信号通路呈正相关。

非小细胞肺癌患者CPNE 1蛋白、Beclin-1蛋白变化及与临床分期、预后的关系

目的探讨CPNE1蛋白和Beclin-1蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的表达变化及其与临床分期、预后的关系。方法我院收治的98例NSCLC患者,穿刺取NSCLC患者肺癌组织作为NSCLC组,取距肺癌组织≥5cm的癌旁组织作为对照组。比较不同组织CPNE1蛋白、Beclin-1蛋白变化,比较NSCLC组不同临床分期CPNE1蛋白、Beclin-1蛋白变化。分析NSCLC组PFS、OS与CPNE1蛋白、Beclin-1蛋白的关系;采用Cox比例风险模型分析NSCLC患者预后的影响因素。结果NSCLC组CPNE1蛋白高表达占比高于对照组,Beclin-1蛋白高表达占比低于对照组(P<0.05);Ⅲ~Ⅳ期CPNE1蛋白高表达占比高于Ⅰ~Ⅱ期,Beclin-1蛋白高表达占比低于Ⅰ~Ⅱ期(P<0.05)。随访结束,98例NSCLC患者中位PFS为9.26个月,中位OS为12.55个月。NSCLC组CPNE1蛋白低表达者PFS、OS趋势优于高表达者;Beclin-1蛋白高表达者PFS、OS趋势优于低表达者(P<0.05)。经Cox比例风险模型单因素分析,肿瘤临床分期、CPNE1蛋白高表达、Beclin-1蛋白低表达是影响NSCLC患者预后的单因素(P<0.05);多因素分析显示临床分期、CPNE1蛋白、Beclin-1蛋白是影响NSCLC患者OS的预后危险因素(P<0.05)。结论在NSCLC患者组织中CPNE 1蛋白、Beclin-1蛋白分别呈高、低表达,CPNE 1蛋白、Beclin-1蛋白在NSCLC中的表达变化与其临床分期、预后存在一定的关联,为NSCLC的诊断和治疗提供了新的依据和思路。

LC-3、Beclin-1和P62表达与非小细胞肺癌临床病理特征的相关性

目的 探讨微管相关蛋白1轻链3(LC-3)、自噬调控因子Beclin-1和P62表达与非小细胞肺癌(NSCLC)临床病理特征的相关性。方法 回顾性分析93例NSCLC患者资料,比较癌组织和癌旁组织LC-3、Beclin-1和P62表达情况;比较LC-3、Beclin-1和P62不同表达情况患者临床病理特征差异。结果 癌组织LC-3、Beclin-1阳性率低于癌旁组织,P62表达阳性率高于癌旁组织(P<0.05)。LC-3、Beclin-1和P62不同表达情况患者肺癌病理类型、TNM分期以及分化程度差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 LC-3、Beclin-1和P62表达情况与NSCLC患者病理类型、TNM分期以及分化程度有密切联系。LC-3、Beclin-1表达降低及P62表达升高与肺癌的发生发展相关,可作为NSCLC患者早期评估的辅助指标。

自噬相关蛋白ATG5/BECLIN-1调控细胞自噬和凋亡的分子机理研究进展

ATG5和BECLIN-1(酵母ATG6同源物)是自噬体形成过程中所必需的两种自噬相关蛋白质,它们除了促进自噬体的形成,还能诱导细胞凋亡的发生,被认为是调控细胞自噬和凋亡的分子开关蛋白。前期研究揭示ATG5通过组成泛素化系统ATG5-ATG12-ATG16L介导自噬体的形成,而BECLIN-1通过组成磷脂酰肌醇3-激酶(PtdIns3KC3)复合体诱导细胞自噬,现在认为ATG5的氨基端截短分子tATG5-N和BECLIN-1的羧基端截短分子BECLIN-1-C能诱导细胞凋亡。本研究对近年来ATG5和BECLIN-1调控细胞自噬和凋亡的研究进展作一综述,为研究ATG5/BECLIN-1调控细胞自噬和凋亡的分子机理奠定基础。

电针对脑缺血再灌注模型大鼠脑组织Beclin-1蛋白及基因表达的影响

目的:观察电针(EA)对脑缺血再灌注认知障碍模型大鼠脑组织中Beclin-1的影响,探讨脑卒中后认知障碍的康复机制。方法:健康SD雄性大鼠105只,随机分为3组:电针组、模型组和假手术组,每组35只;大鼠缺血再灌注模型采用改良线栓法栓塞左侧大脑中动脉制备。电针"神庭穴"、"百会穴"各30min,1次/日,从术后第1天至第10天动物处死。采用Morris水迷宫实验观测模型大鼠的学习、记忆能力;采用Western blot和荧光定量PCR法检测大鼠脑组织Beclin-1蛋白和基因的表达。结果:造模后的第4到第8天,模型组大鼠的逃避潜伏期较假手术组长(P<0.05),EA组大鼠的逃避潜伏期较模型组缩短(P<0.05)。电针组大鼠海马及左侧大脑皮质中Beclin-1蛋白的电泳条带与假手术组相比,电针组条带灰度值较假手术组高(P<0.05),与模型组相比,电针组Beclin-1蛋白电泳条带灰度较模型组高(P<0.05)。模型组和电针组的Beclin-1基因表达的2^(-△△)Ct与假手术组相比差异明显,均升高(P<0.05)。但电针组Beclin-1基因表达的2^(-△△)Ct明显较模型组高(P<0.05)结论:(1)电针神庭、百会可以促进脑缺血再灌注后认知障碍模型大鼠的认知功能的恢复;(2)电针可以提高缺血再灌注模型大鼠脑组织中的Beclin-1表达。Beclin-1是一种自噬相关蛋白,直接执行自噬的过程,被作为自噬发生的标志物。对自噬网络系统的调控可能是电针能够改善脑卒中后认知障碍的生物学机制之一。

五味温通除痹胶囊对佐剂性关节炎大鼠自噬蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响

目的明确五味温通除痹胶囊(桂枝、茯苓、淫羊藿,等)对佐剂性关节炎大鼠自噬蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的影响,探讨其防治类风湿关节炎的可能机制。方法雄性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、五味温通除痹胶囊(0.80、1.60、3.20 g/kg)组、阳性药雷公藤多苷片(40 mg/kg)组,每组10只。除正常组外,采用弗氏完全佐剂诱导佐剂性关节炎大鼠模型。致炎后第12天灌胃给药,连续12 d。实验结束后,取非致炎侧踝关节,HE染色观察病理学改变,实时定量荧光PCR测定滑膜组织中Beclin-1、LC3-ⅡmRNA的表达,免疫荧光组织化学染色和Western blot法检测滑膜组织中Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白的表达。结果与模型组相比,五味温通除痹胶囊(1.60、3.20 g/kg)不仅可减轻佐剂性关节炎大鼠关节病理损伤程度,还可显著升高Beclin-1、LC3-ⅡmRNA和蛋白的表达水平。结论五味温通除痹胶囊对佐剂性关节炎大鼠具有一定的治疗作用,其机制可能与促进细胞自噬,减少滑膜细胞的过度增殖,从而减轻关节软骨损伤有关。

加味丹参饮预处理调控自噬相关基因Beclin-1和Atg5表达抗大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的探讨加味丹参饮预处理是否通过调节Beclin-1和Atg5表达调控自噬抗缺血再灌注损伤大鼠心肌。方法将60只健康SD大鼠随机分为空白对照(control group,C)组、假手术(sham,S)组、缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)组、IRI+加味丹参饮(Jiawei Danshen Yin,JDY)组、IRI+JDY+自噬抑制剂(inhibitor,I)组,每组12只。通过结扎-放松大鼠左冠状动脉前降支制备心肌IRI模型。通过氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察心肌梗死面积率;在透射电镜下观察自噬泡;采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法检测心肌Beclin-1和Atg5 m RNA表达;采用蛋白质印迹(western blot)法检测心肌Beclin-1蛋白表达变化。结果 IRI+JDY组心肌梗死面积率显著低于IRI组及IRI+JDY+I组(P<0.01)。电镜结果显示,IRI+JDY组适度调节大鼠缺血再灌注损伤心肌细胞的自噬,改善心肌细胞结构。IRI组大鼠心肌细胞中Beclin-1和Atg5 m RNA表达水平及Beclin-1蛋白表达较SG组显著升高(P<0.01);IRI+JDY组、IRI+JDY+I组大鼠心肌细胞中Beclin-1和Atg5 m RNA表达水平及Beclin-1蛋白表达较IRI组显著降低(P<0.01);IRI+JDY组大鼠心肌细胞中Beclin-1和Atg5 m RNA表达水平及Beclin-1蛋白表达较IRI+JDY+I组显著升高(P<0.01)。结论加味丹参饮通过调节缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞自噬相关基因Beclin-1和Atg5表达适度,调控缺血再灌注心肌细胞发生适度自噬,从而发挥细胞保护作用。

阿尔茨海默病大鼠自噬相关蛋白Beclin-1和凋亡相关蛋白p53表达变化及电针的调控作用

目的观察电针对大鼠海马自噬相关蛋白Beclin-1和凋亡相关蛋白p53表达的影响,探讨电针治疗阿尔茨海默病(AD)的作用机制。方法将大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和电针组。电针组取"百会"和"涌泉"进行电针治疗,每日1次,7 d为1个疗程,共治疗4个疗程。疗程结束后尼氏染色观察各组海马CA1区组织形态的变化并计数尼氏体阳性细胞,Western blot检测Beclin-1和p53蛋白的表达。结果模型组CA1区尼氏体阳性的细胞数目较正常组显著减少(P<0.01),电针组锥体细胞和尼氏体表达较模型组明显增多(P<0.05)。与正常组比较,模型组海马组织中Beclin-1蛋白表达降低、p53蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,电针组Beclin-1蛋白表达明显升高(P<0.01),p53蛋白表达降低(P<0.05)。结论电针治疗可对抗β-淀粉样蛋白诱导的神经元凋亡,改善AD海马组织形态变化。

Beclin-1、LC3-Ⅱ在缺血后处理大鼠再灌注中的表达及意义

目的研究自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ在缺血后处理大鼠脑缺血再灌注海马中的表达及意义。方法根据Zea-Longa线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,将实验动物随机分为3组:假手术组、缺血再灌注组、缺血后处理组,缺血后处理组再按不同缺血后处理时间分为15 s、30 s、1 min 3个亚组。缺血2 h再灌注24h后用免疫组织化学法检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达情况,透射电镜观察神经细胞中自噬和溶酶体的激活以及细胞超微结构的变化。结果与缺血再灌注组相比,缺血后处理组神经行为学评分明显降低(P<0.05),脑梗死体积明显减小(P<0.01),Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达细胞数明显增加(P<0.01),自噬体形成和溶酶体激活量增加;缺血30 s亚组相比较15 s和1 min亚组上述指标(神经行为学评分除外)(P>0.05),差异亦有显著性(P<0.01)。结论脑缺血后处理的抗缺血再灌注损伤作用可能与上调自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达有关。

基于Bcl-2/Beclin-1复合体探讨黄连素对脑缺血再灌注损伤大鼠模型的保护作用

目的基于B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)/Beclin-1复合体研究黄连素对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。方法 SPF级SD大鼠108只,按照随机数字表法分为假手术组(sham组)、模型组(I/R)、黄连素低、中、高剂量组(BBR-L、BBR-M、BBR-H),尼莫地平预处理组(NMDP组),造模后对大鼠进行神经功能评分;TTC染色观察大鼠脑梗死面积;HE染色观察大鼠脑组织病理学变化;RT-PCR法检测脑组织中Bcl-2、caspase-3、Bax mRNA的表达;Western blot检测脑皮质中Bcl-2、caspase-3、Bax、Beclin-1蛋白表达水平。结果 I/R组 6、24、48 h3个时间点的神经功能评分均显著高于Sham组,24 h的神经功能评分最高;与模型组比较,BBR处理组和NMDP组24、48 h的神经功能缺损评分显著降低( P<0.05);与Sham组比较,I/R组梗死面积百分比、细胞坏死比例显著升高,与I/R组比较,BBR治疗组和NMDP组显著减少( P<0.05);与Sham组比较,I/R组Bcl-2、caspase-3、Bax mRNA和蛋白水平均显著升高;与I/R组比较,BBR治疗组和NMDP组Bcl-2 mRNA和蛋白水平均显著升高,caspase-3、Bax mRNA和蛋白水平均显著降低;与Sham组比较,I/R组Bcl-2/Bax比值显著降低;与I/R组比较,各治疗组Bcl-2/Bax比值均显著上升,且呈剂量依赖性升高;与Sham组比较,I/R组Beclin-1蛋白水平及Bcl-2/Beclin-1比值升高( P<0.05);与I/R组比较,BBR组和NMDP组Beclin-1蛋白水平显著升高( P<0.05),Bcl-2/Beclin-1比值均降低,且BBR-M组、BBR-H组、NMDP组Bcl-2/Beclin-1无显著差异。结论黄连素对大鼠脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用,其可通过调节自噬蛋白与凋亡蛋白的水平,使自噬达到合适水平,发挥神经保护作用。

电针神庭、百会对脑缺血再灌注大鼠认知功能及Beclin-1表达的影响

目的观察电针神庭、百会对脑缺血再灌注大鼠认知功能的影响,并探讨其可能机制。方法雄性Sprague-Dawley大鼠45只随机分为假手术组(n=15)、模型组(n=15)和电针组(n=15)。模型组和电针组采用线栓法制备脑缺血2 h再灌注模型。电针组术后2 h起电针百会、神庭共7 d。各组术后1 d、3 d、5d、7 d行Longa评分;干预后4 d起,行Morris水迷宫测试,共4 d。干预后7 d,TTC染色检测脑梗死体积,Western blotting检测缺血侧Beclin-1蛋白表达。结果干预后3 d起,与模型组相比,电针组大鼠Longa评分降低(P<0.05)。各时间点,与模型组相比,电针组逃避潜伏期缩短(P<0.05),穿越平台次数提高(P<0.05)。与模型组相比,电针组脑梗死体积显著减小(F=7.651,P<0.001),Beclin-1表达增强(P<0.05)。结论电针百会、神庭穴可以改善脑缺血再灌注大鼠学习记忆能力,可能与调控自噬网络有关。