Characterization of Fusarium Oxysporum Isolates Obtained from Wax Gourd and Chieh-qua in China by Pathogenicity, RAMs and Sequence Analysis of the rDNA Internal Transcribed Spacers (ITS1 and ITS2)

Wax gourd (Benincasa hispida Thumb. Cogn) is called white gourd, winter melon, Chinese preserving melon, Chinese squash, and don kwa. It has been cultivated in China for over 2 300 years. It probably

冬瓜子性效的本草考证

我国自古便将冬瓜子作为益气养颜、美容轻身的中药使用,同时,冬瓜子是地方标准品种,全国共有17个饮片炮制规范收载,对比发现各地方标准存在较大差异。为正本清源,明确其在用药沿革中是否有功效改变等情况,系统梳理历代本草典籍中有关冬瓜子的性味归经、功效主治等进行本草考证,并结合现代药理学及临床应用研究分析异同。结果表明冬瓜子性微寒,味甘,归肺、脾、大肠经。功用为益气养颜、消痰除烦、润肺止咳、醒脾开胃,治疗脾胃不和、皮肤病、消渴、淋证、肺痈、肠痈。而冬瓜子“补肝明目、润心,治疗疟疾”等部分功效还需进一步证实。该研究对冬瓜子的质量标准建立、临床应用和功能挖掘具有重要的参考价值,为促进冬瓜子临床合理应用提供了文献依据。

内源激素对同源四倍体黑皮冬瓜自交花粉萌发生长的影响

【目的】探讨同源四倍体黑皮冬瓜Benincasa hispida(Thunb.)Cogn.花粉萌发生长与内源激素的关系,为同源四倍体黑皮冬瓜自交低稔性机理研究开拓新思路。【方法】以同源四倍体及其原二倍体黑皮冬瓜为试材,对自交花粉在雌蕊上的萌发与生长情况及花粉与雌蕊中内源激素含量进行比较研究。【结果】同源四倍体黑皮冬瓜自交花粉在柱头上的萌发率低,花粉管在花柱中生长缓慢,且花粉管在生长过程中易出现粗细不均匀、结节、先端膨大、双花粉管及扭曲、折叠等现象。同源四倍体黑皮冬瓜花粉和雌蕊中促进花粉萌发生长的内源激素玉米素核苷(ZR)和异戊烯基腺苷(IPA)含量极显著低于二倍体(P<0.01),吲哚乙酸(IAA)含量略低于二倍体(P>0.05),雌蕊中的赤霉素(GA_3)含量显著低于二倍体(P<0.05),花粉中的GA3含量略低于二倍体(P>0.05),而抑制生长类激素脱落酸(ABA)含量显著高于二倍体(P<0.05),w(IAA+GA_3+ZR+IPA)∶w(ABA)极显著低于二倍体(P<0.01)。【结论】同源四倍体黑皮冬瓜花粉和雌蕊中内源激素调控了花粉萌发生长,导致花粉管出现异常现象,是引起同源四倍体黑皮冬瓜自交低稔性的原因之一。

节瓜主要农艺性状的遗传相关与通径分析

选用8个节瓜品种研究了9个农艺性状的遗传相关和产量的通径分析。结果表明,农艺性状间的遗传相关一般大于表型相关。相关分析表明,单株节瓜产量与前期产量呈极显著正相关,遗传相关系数r=0.861**,与其它农艺性状相关不显著。通径分析表明,单瓜质量和结果数两个性状对产量形成的直接作用最大,这两个性状对产量的决定系数总和达0.9910,可以作为节瓜高产育种的主要选择性状。

遮光处理对节瓜光合作用特性的影响

在塑料大棚内设置不同光照强度处理〔自然光(对照)、遮光40%和遮光60%〕,研究遮光处理对节瓜(BenincasahispidaCogn.var.chiehquaHow.)功能叶片光合特性的影响,结果表明节瓜叶片净光合速率(Pn)日变化呈单峰曲线,各处理在11:00达到峰值。节瓜Pn峰值随光照强度的减小而降低,叶片Pn达到峰值之前随遮光程度的增大而降低,而达到峰值之后,遮光40%处理的节瓜叶片Pn比对照高。叶片Pn的日变化幅度随遮光程度的增强而减小,叶片的光饱和点随光照强度的减小而明显降低。结果说明遮光处理通过影响环境因子和节瓜叶片生理特性等内在因素而影响其光合作用。塑料大棚内中午前后用遮光强度适宜的遮阳网覆盖,可提高节瓜功能叶片的光合能力,有利于提高产量。

同源四倍体及其原二倍体黑皮冬瓜光合光响应模型筛选

为了筛选出最适合黑皮冬瓜Benincasa hispida (Thunb.) Cogn.的光合光响应模型,为其育种提供理论依据,以同源四倍体及其原二倍体黑皮冬瓜为试验材料,对8 种经典的光合光响应模型适用性进行了比较分析。结果表明:二次多项式能够表现出光抑制情况,但在拟合过程中出现暗呼吸速率为正值、光补偿点为负值及无法解释当光强达到饱和后光合速率快速下降的问题;直角双曲线、非直角双曲线及指数函数Ⅰ、指数函数Ⅱ无法直接求取光饱和点、光补偿点,结合常用的光饱和点的计算方法得到的光饱和点与实测值均存在较大的偏差,且指数函数Ⅱ在计算光饱和点时表现出明显的人为性,也无法拟合光抑制情况,但4 种模型拟合得到的光补偿点均与实测值相差不大;指数修正模型因系数β为负值,无法求取四倍体黑皮冬瓜材料的光饱和点和最大净光合速率,且拟合得到的四倍体黑皮冬瓜的光补偿点明显低于实测值;直角双曲线修正模型计算得到的暗呼吸速率及二倍体黑皮冬瓜的光饱和点明显低于实测值,但获得的四倍体及其二倍体的最大净光合速率与实测值最接近,说明其在拟合最大净光合速率上有优势;整体上分段函数计算得到的黑皮冬瓜的各光合参数与实测值最为接近,与实测值的平均相对误差最小,也能很好的拟合发生光抑制部分的光响应曲线。分段函数拟合同源四倍体及其原二倍体黑皮冬瓜光合光响应曲线效果较其他模型效果好,分段函数模型为黑皮冬瓜最适合的光合光响应模型。

与冬瓜枯萎病抗性连锁的RAMP标记的筛选及其运用

枯萎病是制约冬瓜生产的主要因素之一,选育和种植抗病品种是控制冬瓜枯萎病的经济有效措施。本研究以冬瓜抗病材料B94与高感病材料B43的杂交F2后代分离群体为供试材料,利用RAMP技术,获得了与冬瓜枯萎病抗性连锁的RAPM分子标记CGA-6380。Mapmarker3.0软件分析CGA-6380与抗性基因的遗传距离为5.2cM。利用此标记对现有42份冬瓜种质资源的抗性进行了检测,并对17个杂交组合的抗性进行杂种优势分析和预测及对含B94抗性材料进行辅助回交育种,同时对这些材料进行了人工接种抗性鉴定。实验初步结果表明,42份材料中有12份达到抗性水平,17份与B94有亲缘关系,其中既与B94有亲缘关系,又具有抗性的材料有6份,说明CGA-6380适宜筛选携带有B94抗性基因的材料,含有CGA-6380条带的材料肯定有抗性,而没有CGA-6380条带的材料未必没有抗性。其它分子鉴定结果与人工鉴定结果基本一致。此研究结果将大大提高育种效率和进程,从而为选育冬瓜新种质和新品种提供参考。

同源四倍体及原二倍体黑皮冬瓜抗逆相关指标及同工酶比较

以同源四倍体及其原二倍体黑皮冬瓜为试验材料,对其抗逆性相关指标及同工酶进行了比较研究。结果表明:同源四倍体黑皮冬瓜叶片中超氧化物歧化酶(SOD)活性在抽蔓期和开花期极显著高于原二倍体(P<0.01),果实膨大期略高于原二倍体(P>0.05);过氧化氢酶(CAT)活性在抽蔓期和果实膨大期略高于原二倍体(P>0.05),开花期略低于原二倍体(P>0.05);过氧化物酶(POD)活性在抽蔓期和果实膨大期略高于原二倍体(P>0.05),开花期则显著高于原二倍体(P<0.05);丙二醛(MDA)含量在抽蔓期略低于原二倍体(P>0.05),开花期和果实膨大期极显著低于原二倍体(P<0.01);游离脯氨酸(Pro)含量在3个生育期内均略高于原二倍体(P>0.05);可溶性蛋白质含量在抽蔓期极显著高于原二倍体(P<0.01),在开花期和果实膨大期略高于原二倍体(P>0.05)。在开花期同源四倍体黑皮冬瓜叶片过氧化物酶(POD)同工酶和酯酶(EST)同工酶均比原二倍体多1条酶带,超氧化物歧化酶(SOD)同工酶比原二倍体少2条酶带,且酶带的宽度和着色程度较原二倍体深。同源四倍体黑皮冬瓜植株潜在的抗逆能力优于原二倍体,同源四倍体黑皮冬瓜植株酶的种类与原二倍体相似,但剂量表达量与原二倍体存在明显差异。

小冬瓜(节瓜)吊蔓贮藏方式对果实品质及耐贮性的影响

以"黑仙子1号"、"黑仙子5号"为试材,研究了吊蔓贮藏方式对节瓜果实品质及耐贮性的影响。结果表明:与普通仓库贮藏相比较,吊蔓贮藏节瓜的耐贮性有较为明显的提高;果实含水量、可溶性固形物含量、维生素C含量及可溶性蛋白质含量较高,有机酸含量相对较低;节瓜采用吊蔓方式贮藏有利于减少烂瓜率,延缓果实品质的下降。

RAPD技术在冬瓜和节瓜品种鉴定中的应用

利用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术分析了２个冬瓜品种和１个节瓜品种。所用的２０个引物有１９个能扩增出ＤＮＡ谱带。其中，７个引物对３个品种扩增的ＤＮＡ谱带没有多态性；１２个引物能产生具有重现性的ＤＮＡ多态性谱带．有９个引物对２个冬瓜品种的ＤＮＡ扩增具有多态性，能分别鉴别出２个冬瓜品种；６个引物对青皮冬瓜和江心节瓜的ＤＮＡ扩增分别具有多态性；有３个引物对３个品种的ＤＮＡ扩增分别具有多态性，能够一次鉴别出３个品种。根据３个品种间相似系数比较，３个品种间相似程度很高．

外源DNA导入冬瓜条件的优化及其运用

针对冬瓜(Benincasa hispida(Thunb.)Cogn.)缺乏抗性种质资源的现状,本文开展了冬瓜抗枯萎病种质资源创新研究。采用花粉管通道法将高抗枯萎病的黒籽南瓜DNA导入优质冬瓜材料,以外源DNA剂量、pH值、注入时间、注入方法以及冬瓜品种为因素,通过正交设计,设计处理组合,筛选和优化外源DNA导入冬瓜条件。结果表明:以子房注射法、授粉后24h、导入浓度为1.2mg/mLDNA溶液(pH7.5)的处理,对冬瓜坐果率的影响最小。利用此方法将高抗冬瓜枯萎病的黑籽南瓜总DNA导入冬瓜,经病圃田间筛选和6代自交纯化已获得2份稳定的冬瓜新材料。经苗期人工接种和病圃田间自然抗病鉴定,其抗病性明显提高。所获抗病材料的品质与受体无明显差异。其中1份抗枯萎病材料已运用于育种实践,培育出了抗病、优质粉皮冬瓜"广利1号",目前该品种每年推广面积700hm2以上。

氮钾营养对节瓜生长、产量和品质的影响

在秋季条件下以节瓜七星仔为材料，设置低氮低钾（N_(12)K_9）、低氮中钾（N_(12)K_(18)）、低氮高钾（N_(12)K_(36)）、高氮低钾（N_(18)K_9）、高氮中钾（N_(18)K_(18)）和高氮高钾（N_(18)K_(36)）等6个处理，研究了氮钾营养对节瓜生长、果实产量和品质的影响．结果表明，提高氮、钾水平，节瓜植株干重和果实产量都呈增加的趋势，增钾比增氮的效果更明显；果实的总糖和Vc含量有下降的趋势，还原糖含量无明显的规律性变化;果实的氮、磷和钾含量呈增加的趋势，但有个别处理例外．

高效诱导冬瓜再生植株的研究

将台湾冬瓜的种子接种于ｐＨ值为７．２的１／２ＭＳ培养基上预培养，５ｄ左右种子即可萌发，萌发率为１００％，幼苗生长正常。切取预培养１５－２０ｄ的无菌幼苗的茎尖和带腋芽的茎段接种于ＭＳ＋１ｍｇ／ＬＮＡＡ＋４ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ培养基上，１０ｄ左右在茎尖和茎段（带腋芽）切口处长出愈伤组织，３０ｄ左右在愈伤组织处分化出丛生芽，丛生芽的诱导频率接近９５％，繁殖系数２５．６。将小芽切下转入不加任何生长调节剂ＭＳ培养基上，培养几天后芽逐渐长大，并在芽的基部长出白色根系。选取生长健壮的试管苗经过炼苗后移栽到大田中。

山楂、冬瓜、荷叶天然复合保健饮料的工艺研究

以山楂(Crataegus pinnatifida)、冬瓜[Benincasa hispida(Thunb.)Cogn.]、荷(Nelumbo nucifera)叶为原料制作天然复合保健饮料,添加蔗糖、柠檬酸、CMC-Na、蜂蜜为辅料,通过单因素试验和正交试验优化其工艺。结果表明,制作天然复合保健饮料的优化工艺为饮料原汁100 m L、蜂蜜4%、蔗糖2%、柠檬酸0.05%、CMC-Na 0.08%,在此工艺条件下制得的天然复合保健饮料色、香、味俱佳。

同源四倍体及其原二倍体黑皮冬瓜光合参数比较

为明确同源四倍体黑皮冬瓜的光合特性参数与倍性的关系,以同源四倍体及其原二倍体为试验材料,比较研究不同生育期内叶片总叶绿素含量、叶片净光合速率、气孔导度、胞间CO_2浓度及蒸腾速率等光合参数。结果表明:同源四倍体黑皮冬瓜的叶片总叶绿素含量、气孔导度在3个生育期内均极显著高于原二倍体(P<0.01);净光合速率在抽蔓期略高于原二倍体(P>0.05),在开花期及果实膨大期则极显著高于原二倍体(P<0.01);胞间CO_2浓度在抽蔓期略高于原二倍体(P>0.05),在开花期及果实膨大期则显著高于原二倍体(P<0.05);蒸腾速率在3个生育期均显著高于原二倍体(P<0.05)。同源四倍体黑皮冬瓜较原二倍体具有更强的光合能力。

节瓜生育过程RubisCO活性与氮钾营养的关系

研究了节瓜生育过程中叶片核酮糖－１，５－二磷酸羧化酶／加氧酶（ＲｕｂｉｓＣＯ）活性的变化及其与氮钾营养的关系氮钾营养设置低氮低钾（Ｎ１２Ｋ９）、低氮中钾（Ｎ１２Ｋ１８）、低氮高钾（Ｎ１２Ｋ３６）、高氮低钾（Ｎ１８Ｋ９）、高氮中钾（Ｎ１８Ｋ１８）和高氮高钾（Ｎ１８Ｋ３６）等６个处理结果表明：在节瓜的生育过程，叶片的ＲｕｂｉｓＣＯ羧化活性和羧化／加氧活性比不断提高，加氧活性则不断降低盛收期植株第１１－２０节的低节位叶片的ＲｕｂｉｓＣＯ羧化活性和加氧活性都最高，羧化／加氧活性比较高；第２１－３０节的中节位叶片的羧化活性较高，加氧活性最低，羧化／加氧活性比最高；第３１－３５节的高节位叶片的羧化活性最低，加氧活性较高，羧化／加氧活性比最低无论氮水平高低，中钾比低钾和高钾都提高ＲｕｂｉｓＣＯ羧化活性和羧化／加氧活性比在３种钾水平下，高氮比低氮降低ＲｕｂｉｓＣＯ羧化活性和羧化／加氧活性比。

花生根结线虫对节瓜苗期植株生长及主要生理特性的影响

对感染花生根结线虫的节瓜植株主要生理指标和生长量的变化进行了测定－ 结果表明：花生根结线虫的侵染明显降低节瓜根系的活力，引起节瓜苗期植株的Ｎ、Ｐ、Ｋ 和Ｍｇ 含量显著下降，但对Ｃａ 的吸收则有所增加；植株的叶绿素含量和光合强度均显著降低，但呼吸强度在线虫接种量为３ ０００ 和５ ０００ 条时则明显提高；

镰刀菌酸胁迫下节瓜实时荧光定量PCR分析内参基因的选择

针对不同试验材料及条件选择合适的内参基因是正确利用实时荧光定量PCR分析目的基因表达模式的前提条件。以4个常用看家基因(GAPDH、Actin、UBQ、CYP)和2个新内参基因(CACS、F-box)作为候选内参基因,运用实时荧光定量PCR技术,分析它们在节瓜不同组织(根、茎、叶)及镰刀菌酸(fusaric acid,FA)胁迫下的表达稳定性。经RefFinder在线软件综合分析,结果表明,节瓜经枯萎病毒素FA胁迫后Actin和F-box表达稳定;而在节瓜不同组织中F-box基因表达稳定性最高;另外,传统常用看家基因GAPDH和CYP因在不同试验条件下总体表达水平都比较差而不适合作为相应条件下的内参基因。研究结果为节瓜抗枯萎病相关基因的表达分析奠定了基础。

节瓜耐热性指标的筛选与资源耐热性评价

通过对其苗期相对电导率、疫病、病毒病、叶片萎蔫指数、发芽率及胚根生长速度测定的实验方法对35份节瓜自交系材料的耐热性鉴定和评价。实验结果表明:叶片萎蔫指数、苗期相对电导率、发芽率以及胚根生长速度、45℃处理存活率可以综合评价节瓜的耐热性,并且利用这几个指标评价了35份材料的耐热性。

不同砧木材料嫁接冬瓜苗期氮营养特性综合评价

评价冬瓜砧木的氮素营养效率,解决冬瓜氮肥施用过量的问题。以‘铁柱168’为接穗,获得11种嫁接苗,以自根苗为对照,分别在低氮(0.5 mmol/L)和正常氮(14.0 mmol/L)水平下进行水培试验,测定11种砧木材料的嫁接冬瓜苗期的植株干物量、氮含量和氮素累积量等指标。通过主成分分析计算嫁接苗与自根苗在正常氮和低氮水平下的氮效率综合值,并由聚类分析将砧木材料进行氮素营养效率的划分。结果表明,除正常氮水平下的根干物量小于低氮水平外,植株氮含量、氮积累量、茎干物量、叶干物量、地上部干物量和整株干物量均大于低氮水平;氮积累量和干物量为氮效率评价的最主要指标,其中正常氮水平下主要与茎、叶的干物量和氮积累量有关,低氮水平下主要与根、茎、叶干物量及其氮积累量有关;正常氮水平下,黑杆为氮高效型,‘京欣砧1号’和‘301’为氮低效型,‘海砧1号’‘冬砧1号’‘黄砧1号’‘雪藤木’‘铠甲’‘果砧2号’‘京欣砧2号’和‘京欣砧5号’为氮中效型;低氮水平下,‘京欣砧1号’为氮高效型,‘黄砧1号’和‘铠甲’为氮低效型,‘海砧1号’‘冬砧1号’‘雪藤木’‘301’‘黑杆’‘果砧2号’‘京欣砧2号’和‘京欣砧5号’为氮中效型。当前“一控两减三基本”的背景下,推荐选用‘京欣砧1号’作为冬瓜的嫁接砧木。