A SENSITIVE PROTEIN ASSAY BY Co(II)-BIURET METHOD

A new and senseitive Co (II)-biuret method for determination of protein has for the first time been established. In visible wavelength region, the Co (II) -protein complexes had anabsorption peak at 360 nm. -Under the present conditions. the assay had a linear range of 0-120 μg/ml of protein with a detection limit of about 2 μg/ml, and similar calibration curves were obtained for BSA. and BγG. Compared with Cu (II) -biuret method, the present Co (II) -biuret method was more simple, sensitive, and tolerant of interferences from non-protein molecules.

我国多地区献浆者总蛋白水平调查

目的分析捐献血浆对人体总蛋白的影响以及不同采血管对总蛋白水平检测的影响。方法选取2021年3—4月来自6个省/自治区共11家单采血浆站1373名献浆者,分别用不加抗凝剂普通采血管、肝素抗凝管、枸橼酸钠抗凝管采集全血标本并分为血清组、肝素抗凝组、枸橼酸钠抗凝组。标本在分离出血清和血浆后用双缩脲法进行总蛋白检测。不同采血管之间总蛋白水平比较采用Kruskal-Wallis检验。按性别将献浆者分为男性组(n=597)、女性组(n=776)2组,不同性别之间总蛋白水平比较采用独立样本t检验。按地域将献浆者分为四川组、湖北组、甘肃组,采用Games-Howell检验,进行两两比较。结果1373名献浆者血清总蛋白水平中位数为73.1 g/L,与我国血清总蛋白参考值范围(65~85)g/L相符合。1373名献血者血清组、肝素抗凝组、枸橼酸钠抗凝组总蛋白水平的中位数分别为:73.1 g/L、73.3 g/L、63.8 g/L,3组间比较有差异(P<0.05)。枸橼酸钠抗凝组与血清组和肝素抗凝组总蛋白水平比较有差异(P<0.05),血清组与肝素抗凝组总蛋白水平比较无差异(P>0.05)。男性组与女性组血清总蛋白水平分别为:(72.41±5.40)g/L、(73.67±4.95)g/L(P<0.05)。四川组、湖北组、甘肃组血清总蛋白水平分别为(73.91±4.29)g/L、(74.17±5.11)g/L、(67.09±3.65)g/L(P<0.05),3组间两两比较,甘肃组与湖北组和四川组有差异(P<0.05),四川组与湖北组无差异(P>0.05)。结论符合献浆条件的献浆者不会由于定期捐献血浆导致体内总蛋白含量异常,但不同性别、不同地域献血者总蛋白水平均存在差异,女性总蛋白水平高于男性,湖北地区总蛋白水平最高,其次四川,最后甘肃地区。不同采血管的总蛋白水平有差异,肝素抗凝组最高,其次血清组,最后枸橼酸钠抗凝组。

自适应蒙特卡洛法测量复合肥料中缩二脲的不确定度

建立自适应蒙特卡洛法测量复合肥料中缩二脲的不确定度评定方法。依据ISO 18643:2016,使用高效液相色谱法对复合肥料中缩二脲含量进行测定,再利用计算机编程语言(Python)编写计算程序,使用自适应蒙特卡洛(MCM)法,通过建立测量模型、分解独立输入量、评估输入量概率分布、大量采样带入计算程序等步骤完成对缩二脲含量的测量不确定度评定。评定结果表明,复合肥料样品中缩二脲含量(质量分数)为(0.1054±0.0019)%(95%包含概率)。蒙特卡罗法计算过程简单直观,与传统方法JJF 1059.1—2012《测量不确定度评定与表示》(GUM)相比,避免了复杂的数学运算评定过程,无需进行多次重复测定,是GUM法的重要补充。

含聚天门冬氨酸尿素中缩二脲含量分析方法探讨

尿素中添加聚天门冬氨酸盐后,由于酸根的存在,严重干扰了缩二脲的测定,导致缩二脲结果偏差较大,影响聚天门冬氨酸类尿素产品的品质判定。主要利用聚天门冬氨酸盐的化学性质,采用氯化钡作为沉淀剂来去除聚天门冬氨酸的酸根,最终准确测定尿素中缩二脲的含量。

柴油车尾气处理液中尿素与缩二脲含量的测定

建立了高效液相色谱法同时测定柴油车尾气处理液中尿素和缩二脲含量的方法。采用流动相稀释、直接过膜的前处理技术,以甲醇:磷酸二氢钾水溶液(0.074 mol/L)=5:95为流动相进行洗脱,采用C18分析柱分离,DAD检测器检测样品的含量。实验结果表明,尿素和缩二脲在系列浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数R^(2)分别为0.9994、0.9996,检出限分别为0.0035、0.0002 mg/mL,方法回收率为100.1%~110.4%,相对标准偏差RSD为0.4%~1.4%。该方法样品前处理简单,分析简便快速,可用于柴油车尾气处理液中尿素和缩二脲含量的检测分析。

4种蛋白质分析方法在液态乳中的适用性研究

分别利用凯氏定氮法、三氯乙酸-双缩脲比色法、考马斯亮蓝法和福林-酚法等4种方法,对液态乳中添加尿素、甘氨酸、硝酸铵、亚硝酸钠、水解蛋白、三聚氰胺等非蛋白含氮物后的蛋白质量浓度进行了测定,并与其理论值进行了比较。结果表明:凯氏定氮法和福林-酚法测定的液态乳蛋白质量浓度与其理论值存在显著差异,而考马斯亮蓝法和三氯乙酸-双缩脲比色法则能较好地反映其真实的蛋白含量。考马斯亮蓝法灵敏度高,适合测定蛋白含量较低的样品;而三氯乙酸-双缩脲比色法的测定结果与液态乳中真实蛋白质量浓度更加接近。

发酵鱼粉中寡肽检测技术研究

用单宁酸作为发酵鱼粉中水溶性蛋白质的沉淀剂,经飞行时间质谱仪测得滤液中蛋白质分子量在2 047.98 Da以下。用双缩脲反应法可以测出发酵鱼粉中水溶性总肽的含量,用凯氏定氮法可以测出被沉淀的多肽的含量,从而可以计算出发酵鱼粉中寡肽的含量。用该技术测得2 546 Da和1 500 Da的低分子量蛋白的回收率分别为92.42%和5.91%。

高铁氰化钾法消除胆红素对测定总蛋白结果影响的研究

目的 探讨用高铁氰化钾法消除血清总胆红素对测定血清总蛋白结果的影响。方法 分别用液体和干化学法测定血清不同浓度总胆红素对血清总蛋白的影响。结果 高浓度胆红素使液体双缩脲法测定TP结果偏低,结果差异显著。结果 高浓度胆红素血清标本总蛋白结果降低,当加入40mmol／L K3Fe(CN)6时能纠正其对TP结果的影响。

双缩脲-分光光度法测定乳与乳制品中蛋白质含量

目的：建立一种测定乳与乳制品中蛋白质含量的方法。方法：利用乳制品脂肪的前处理过程中剩余的蛋白质残液作为试验材料，通过双缩脲反应，测定其蛋白质含量。结果：工作曲线在0～0．20g／100ml蛋白质浓度范围内线性关系良好，线性相关系数为0．9995，平均加标回收率为92％～108％，相对标准偏差小于5％，方法的检出限为0．03g／100ml。结论：该方法污染少、操作简便、灵敏、结果可靠。

乳品真蛋白率的提出及测定

利用三氯乙酸-双缩脲比色法对添加乳清蛋白乳粉的蛋白质量分数进行测定。结果表明,乳清蛋白的加标回收率在89.2%～99%之间,重现性在0.26%～0.98%之间,表明三氯乙酸-双缩脲比色法可以较好地检测出乳中的真蛋白。提出了真蛋白率的概念,并测定出乳粉的真蛋白率范围在78.06%～89.90%之间;液态乳的真蛋白率范围在90.03%～96.25%之间。

双缩脲法和凯氏定氮法测定饲料中蛋白质含量的比较研究

蛋白质含量是饲料质量控制的重要指标之一。本实验用凯氏定氮法和双缩脲法测定饲料中蛋白质含量作对比实验,结果表明:这两种方法所得实验结果差异较大,双缩脲法测得结果较凯氏法低约15.1%,且结果不稳定,不适于饲料蛋白质含量的测定。

血清总蛋白测定的基质效应评价

目的评价14种室间质量评价(EQA)材料和3种市售材料在4个检测系统上测定血清总蛋白的基质效应。方法参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)EP14-A2指南,以美国临床化学协会(AACC)推荐血清总蛋白双缩脲为参考方法,以4个检测系统为待评方法,评价制备物的基质效应。结果 9种制备物对各系统均无基质效应,1种制备物对所有系统均存在基质效应,其余样本对不同检测系统存在不同程度的基质效应。结论制备物样本的基质效应可影响血清总蛋白测定的准确性和可比性,在临床检测中应重视其对检验结果量值溯源的影响。

“双缩脲法测定血清总蛋白的方法学评价”综合性实验的教学实施

在临床生物化学检验实验课程教学中,开设"双缩脲法测定血清总蛋白的方法学评价"综合性实验,并对教学实施过程和教学经验进行讨论。

仪器法与化学法测定健康麋鹿血清蛋白结果比较

使用全自动生化分析仪测定了80只不同年龄段麋鹿血清总蛋白和白蛋白,与化学法(溴甲酚绿法、双缩脲法)测定结果相比较。相同检测指标不同年龄组检测结果表明,仪器法测定血清蛋白与化学法检测血清蛋白,2种方法间除幼年总蛋白测得数据存在显著差异之外,其余各年龄阶段各蛋白成分测得数据均不存在显著差异(P>0.05);且2种方法间具有良好的相关性(r> 0.80),能科学客观地体现各年龄阶段的血清蛋白各成分的变化趋势。

甘草水溶性蛋白质不同测定方法比较研究

本研究采用紫外280 nm光吸收法、紫外238 nm光吸收法、紫外A215与A225光吸收差法、考马斯亮蓝G-250法及双缩脲法分别测定甘草水溶性蛋白质的含量,比较各种测定甘草水溶性蛋白质方法的优缺点.结果显示,考马斯亮蓝G-250法测定结果偏低,而紫外法测定结果数据稳定.

几种儿童牛奶酪蛋白含量的测定与比较

测定儿童牛奶A、儿童牛奶B、儿童牛奶C、儿童牛奶D中酪蛋白含量并比较其蛋白质含量的性价比。采用等电沉淀法从牛奶中分离出酪蛋白,得到较纯的酪蛋白,再采用双缩脲法测定样品中酪蛋白的纯度,并计算出样品中酪蛋白的性价比。儿童牛奶A、儿童牛奶B、儿童牛奶C、儿童牛奶D中酪蛋白含量分别为:1.84、2.55、2.79、2.63 g/100 m L;提取的酪蛋白样品纯度依次为:99.78%,95.05%,97.55%,96.16%;计算得出的酪蛋白性价比依次为:0.977、1.515、1.567、1.456 g/元。等电沉淀法能有效的提取牛奶中的酪蛋白,纯度较高。各品种牛奶中酪蛋白的性价比大小为:儿童牛奶C>儿童牛奶B>儿童牛奶D>儿童牛奶A。

三种方法测定血浆纤维蛋白原的方法学评价

作者对血浆纤维蛋白原测定的三种方法进行了方法学评价和对照试验，结果表明：双缩脲法各项指标均较好，可做为参考方法；考马斯亮蓝微量比色法呈色稳定，线性好，准确度较高，与双缩脲法比较Ｙ＝０．９４８ｘ＋０．０８２，ｒ＝０．９７８４，Ｓ＿（ｙｘ）＝０．５８ｇ·Ｌ￣－，此法可作为临床常规测定血浆纤维蛋白原较好的方法；相比之下热沉淀法各项指标均不如以上两法。

黑豆、黄豆、红豆、绿豆中的蛋白质含量比较

目的:测定并比较黑豆、黄豆、红豆、绿豆四种豆中的蛋白质含量。方法:豆子加水匀浆后,离心收集上清,用双缩脲法测定蛋白质含量。结果:黑豆组蛋白质含量为(176.52±3.04)mg/g、黄豆组蛋白质含量为(127.27±1.39)mg/g、红豆组蛋白质含量为(74.90±1.53)mg/g;绿豆组蛋白质含量为(123.03±4.86)mg/g。结论:四种豆中蛋白质含量差异显著,黑豆中最高,黄豆与绿豆相近,红豆中最低。

低浓度小分子多肽含量测定方法的比较研究

采用考马斯亮蓝法、双缩脲法及紫外分光光度法对还原型谷胱甘肽含量测定进行比较研究,结果表明,紫外分光光度法对还原型谷胱甘肽的测定结果较考马斯亮蓝法和双缩脲法均要好。通过紫外分光光度法进行稳定性、精密度、重现性及回收率试验,结果显示,4个验证试验的相对标准偏差均小于5%。通过乙酸、乙醇和Na Cl 3种干扰物试验分析,研究发现:乙酸对还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量测定结果影响较大,其次是乙醇,而Na Cl对还原型GSH含量无影响,表明酸和醇类物质均会影响紫外分光光度计法对低浓度小分子多肽含量测定结果。

双缩脲法测定罗非鱼源胶原蛋白肽含量的改良及应用评价

为探究罗非鱼源胶原蛋白肽含量的快速测定方法,以罗非鱼皮胶原蛋白肽为对照品,改良双缩脲比色法测定肽含量的操作方法,考察显色络合物最大吸收波长、线性拟合度高的肽和三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)用量范围、pH值;在优化条件下对标准曲线进行重复性、精密度评价以及加样回收率实验;研究本方法对不同分子质量罗非鱼皮及鱼鳞胶原蛋白肽体系检测的适用性.结果显示,当胶原蛋白肽(标称分子质量3 kDa)质量浓度在0.3~1.5 mg/mL范围内,使用13%TCA溶液,调整体系pH 12.5,在波长545 nm处检测,吸光度与肽质量浓度线性拟合好(R2=0.999),标准曲线方程为y=0.1449x+0.0015;重复性和精密度实验得到相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)分别为1.86%和1.84%,加样回收率分别为113.9%、109.7%,RSD分别为1.39%、1.00%;线性范围宽、重复性好、准确度高.将本法应用于不同种类罗非鱼肽产品体系的检测,加样回收率相差不大,偏差均较小,说明本法简便、快捷,适用于罗非鱼源肽含量的检测.