单核细胞增生李斯特菌LIPI-4对脑及脑微血管内皮细胞炎症小体表达的影响

目的 探究单核细胞增生李斯特菌毒力岛4(LIPI-4)对小鼠脑及脑微血管内皮细胞炎症小体产生的影响。方法 小鼠腹腔注射细菌Lm928和Lm928ΔLIPI-4,采用甲酞胺一紫外分光光度法检测脑组织中伊文思蓝(EB)的含量,ELISA方法检测小鼠血清中髓鞘碱性蛋白(MBP)的水平,qRT-PCR法检测脑组织中炎症小体AIM2、NLRP3、NLRC4,炎症因子IL-1β、IL-18等的表达。qRT-PCR、Western Blot和ELISA检测Lm928、Lm928ΔLIPI-4和CLm928ΔLIPI-4侵染人脑微血管内皮细胞(HCMEC/D3)过程中炎症小体相关分子及炎症因子表达的水平。结果 小鼠感染Lm928 36 h后脑内EB显著升高,72 h后,血清中MBP含量极显著高于Lm928ΔLIPI-4组(P<0.01),qRT-PCR结果显示Lm928组小鼠脑组织NLRC4和IL-1β的mRNA表达量显著高于Lm928ΔLIPI-4组(P<0.05)。在侵染HCMEC/D3细胞中,NLRP3和IL-1β的mRNA表达量,Lm928组极显著高于Lm928ΔLIPI-4组(P<0.01);NLRP3的蛋白表达量,Lm928组极显著高于Lm928ΔLIPI-4组(P<0.01);上清液中IL-1β的分泌量,Lm928组极显著高于Lm928ΔLIPI-4组(P<0.01)。结论 单核细胞增生李斯特菌LIPI-4通过参与NLRP3/NLRC4/IL-1β通路,激活炎症小体参与炎症反应,损伤脑组织与脑微血管内皮细胞,破坏血脑屏障。

丁酸钠预处理通过减轻血脑屏障损伤改善大鼠肠缺血再灌注诱导的认知障碍

目的:探究丁酸钠对大鼠肠缺血/再灌注后血脑屏障和认知功能的影响及其可能存在的机制。方法:将SD大鼠随机分为4组,每组12只,(1)假手术组(Sham组);(2)肠缺血/再灌注组(II/R组);(3)肠缺血/再灌注+丁酸钠组(NaB组):造模前1周NaB 500 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃;(4)肠缺血/再灌注+丁酸钠+ITSA-1组(ITSA-1组):造模前1周NaB 500 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃+前5 d、3 d、1 d ITSA-10.5 mg/kg腹腔注射。HE染色评估肠黏膜损伤;Morris水迷宫测试评估大鼠认知功能;透射电镜观察血脑屏障微结构改变;ELISA检测脑组织炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α和紧密连接蛋白Claudin5、ZO-1及基质金属蛋白酶-9(matrix me-talloproteinase-9,MMP-9)含量;Western Blot检测紧密连接蛋白Claudin5、ZO-1及亲环蛋白A(cy-clophilin A,CypA)、MMP-9水平。结果:与Sham组相比,II/R组大鼠Chiu's肠黏膜损伤评分较高(P<0.001);游泳路程增加(P<0.05),非平台象限占比增加(P<0.001),潜伏期延长(P<0.05);透射电镜下血脑屏障微结构改变;脑组织炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α增加(P<0.001),CypA、MMP-9表达增加(P<0.01),紧密连接蛋白Claudin5、ZO-1表达减少(P<0.01,P<0.001);与II/R组相比,NaB组神经炎症、血脑屏障损伤减轻,认知功能改善;ITSA-1组上述损伤与II/R组相似。结论:丁酸钠可通过减轻血脑屏障损伤改善大鼠II/R诱导的神经认知功能障碍,其机制可能与抑制CypA/MMP-9通路有关。

甘露醇暂时渗透性开放血脑屏障的研究

目的 研究静脉注射甘露醇对血脑屏障的影响。方法 长耳白兔 ,随机分组 ,戊巴比妥钠静脉麻醉。不同时间顺序给予伊文思蓝和甘露醇注射液。10 %的甲醛局部灌注固定 ,取脑。定性、定量判定伊文思兰渗透情况。结果 甘露醇组的脑切片有明显的伊文思蓝脑组织中渗透。不同时间点伊文思蓝的渗透情况显示静脉推注甘露醇后 10 m in,伊文思蓝渗透明显 ,30 min渗透减弱 ,6 0 min后几乎没有渗透。

开窍药对血脑屏障影响的实验研究进展

开窍药的主要功效为芳香开窍,醒神回苏,临床用以治疗脑卒中、神志昏迷等证。近年来研究发现开窍药能通过影响血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)发挥其治疗脑部疾患的作用,有些开窍药或药物单体能迅速通过BBB,有些开窍药则可以促进其它药物通透,是其发挥开窍醒神回苏的主要作用机制,推测其也许是该类药归心经的理论基础。

S100B、AQP4和CX43表达紊乱对糖尿病并发抑郁症大鼠海马血脑屏障功能的影响

目的探讨S100B、AQP4和CX43表达紊乱对糖尿病并发抑郁症大鼠海马血脑屏障功能的影响。方法将大鼠分为糖尿病组[高脂乳灌胃2周+尾静脉注射链脲佐菌素(STZ,38 mg/kg)]、抑郁症组(慢性不可预知性应激28 d)、糖尿病并发抑郁症组(联合以上两种方法建立)、对照组。造模结束后,旷场实验和Morris水迷宫实验观察大鼠行为学,ELISA检测血清S100B含量,免疫组化法检测海马血脑屏障AQP4和CX43的表达。结果与对照组比较,糖尿病组和抑郁症组大鼠自主活动次数和空间探索时间显著减少,逃避潜伏期延长(P<0.05,P<0.01);血清S100B含量明显增多(P<0.01);海马血脑屏障功能性蛋白AQP4、CX43积分吸光度明显减少(P<0.01)。与糖尿病组比较,糖尿病并发抑郁症组大鼠自主活动次数和空间探索时间减少,逃避潜伏期延长(P<0.05,P<0.01);血清S100B含量明显增多(P<0.05);海马血脑屏障功能性蛋白AQP4、CX43积分吸光度明显减少(P<0.05,P<0.01)。结论 S100B、AQP4和CX43表达紊乱所致海马血脑屏障功能障碍可能是糖尿病并发抑郁症发生机制之一。

PPARγ激活剂对实验性大鼠缺血脑组织血脑屏障的保护作用及机制分析

目的探讨过氧化小体增殖剂激活型受体γ（peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPAEγ）激活剂对实验性大鼠缺血脑组织血脑屏障的保护作用，结合其对基质金属蛋白酶9（Matrix metalloproteinase-9，MMP-9）的信使核糖核酸（Messenger ribonucleic acid，mENA）表达的影响分析其可能机制。 方法健康成年雄性SD大鼠，分为假手术组、生理盐水干预组、小剂量PPARY激活剂干预组、大剂量PPAEY激活剂干预组。线栓法制备大脑中动脉闭塞动物模型。术前5d分别给予盐酸吡咯列酮（PPARγ激活剂），每日1次灌胃给药，小剂量组为10mg·kg·d，大剂量组为15mg·kg·d。以缺血后24h作为观察时间点，逆转录多聚酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）测定缺血脑组织PPAEγ的mENA表达，分光光度法测定缺血脑组织伊文氏蓝含量。 结果小剂量吡格列酮干预组脑组织伊文氏蓝含量和大剂量吡格列酮干预组伊文氏蓝含量均较生理盐水干预组低（0．062±0．014A／g vs 0．081±0．015A／g，P〈0．05；0．045±0．011A／g vs 0．081士0．015A／g，P〈0．05）；小剂量吡格列酮干预组脑组织MMP9的mRNA表达和大剂量吡格列酮干预组脑组织MMP-9的mENA表达均较生理盐水干预组显著性降低（0．268±0．021vs0．571±0．019，P〈0．05；0．194±0．017vs 0．571±0．019，P〈0．05），小剂量干预组和大剂量干预组间比较无统计学差异。 结论PPAPγ激活剂通过下调缺血脑组织区MMP-9的表达而改善血脑屏障的功能可能是PPARγ激活后发挥抗脑缺血再灌注损伤的机制之一。

PTD-BDNF融合基因克隆、表达和纯化

构建含蛋白转导结构域(PTD)与脑源性神经营养因子(BDNF)融合基因的质粒,并在大肠肝菌中表达。用PCR扩增PTD-BDNF融合基因,经DNA测序无误后插入表达质粒pJW2构建质粒pJPB,转化大肠杆菌并进行PTD-BDNF蛋白的诱导表达和纯化。结果DNA序列分析表明构建含有PTD-BDTF融合基因的质粒与设计相同,PTD-BDNF融合蛋白在大肠杆菌中获得表达并进一步纯化。

老龄和低龄大鼠脑出血后脑水肿的研究

目的对比研究老龄和低龄大鼠尾状核出血后血肿周围组织血-脑脊液屏障(BBB)破坏的时机和脑水肿的严重程度。方法将50μl自体动脉血注入老龄(16个月龄,n=28)和低龄(2个月龄,n=28)Wistar大鼠尾状核,30min和24h后进行MRI(T_2*WI、T_2WI、DWI)观察,同时对发病后6h、12h、24h血肿周围和对侧皮质脑组织对伊文氏蓝的通透性、脑组织含水量、神经功能障碍程度进行对比观察。结果发病6h后老龄和低龄大鼠均出现BBB的破坏,12h和24h时老龄纽破坏较低龄组更为严重;24h时老龄组脑组织含水量、神经功能缺损、T_2WI显示的病灶体积(包括血肿和水肿)均明显大干低龄组。结论老龄大鼠脑出血后神经功能损害、血肿周围组织水肿、BBB破坏均较低龄大鼠严重。

Elisa试剂盒法测定抗体修饰纳米粒表面OX26浓度

脑血管疾病是发病率较高的一种疾病,严重危害人类健康。为提高药物血脑屏障透过率可将药物进行抗体修饰,本文针对这种新剂型,应用Elisa试剂盒检测制剂表面是否连接有转铁蛋白受体的单克隆抗体OX26,并测定OX26浓度。

虾青素对脑出血大鼠的神经保护作用及机制

目的观察虾青素对脑出血大鼠的神经保护作用,并探讨其作用机制。方法将168只SD大鼠随机分为假手术组、模型对照组、低剂量虾青素组、高剂量虾青素组各42只。模型对照组和低、高剂量虾青素组通过尾状核注入尾静脉自体血建立脑出血模型,假手术组注射等量生理盐水。将每组根据灌胃时间不同分为1、3、7 d 3个亚组各14只,低剂量虾青素组、高剂量虾青素组分别给予虾青素20、40 mg/(kg·d)灌胃,假手术组、模型对照组分别给予等体积花生油溶剂灌胃。于灌胃1、3、7 d行神经功能评分后,采用ELISA法检测血清炎症因子TNF-α、IL-1β水平;用干湿重法测定脑组织含水量,伊文思蓝(EB)染色法检测血脑屏障通透性,免疫组化法检测脑组织ROCK2、Claudin5蛋白表达。结果与假手术组比较,模型对照组各时间点神经功能评分降低,血清TNF-α、IL-1β水平升高,脑组织含水量、EB含量增加,ROCK2蛋白表达增加,Claudin5蛋白表达降低(P均<0.05);与模型对照组比较,低剂量虾青素组、高剂量虾青素组大鼠各时间点神经功能评分均升高,血清TNF-α、IL-1β水平降低,脑组织含水量、EB含量降低,ROCK2蛋白表达降低,Claudin5蛋白表达增加(P均<0.05),高剂量虾青素组上述指标改善程度较低剂量组更为明显(P均<0.05)。结论虾青素可降低脑出血大鼠的血清炎症因子水平,改善血脑屏障通透性,减轻脑水肿,具有一定的神经保护作用,这可能通过抑制ROCK2表达、上调Claudin5蛋白表达来实现的。

羚羊角粉对创伤性脑水肿影响的实验研究

目的研究羚羊角粉对大鼠脑创伤后脑水肿的影响。方法 SD大鼠100只,随机分成模型组与治疗组,每组再按创伤前1 d,创伤后1、3、5、7 d分为5个亚组。各组大鼠复制自由落体大鼠脑外伤模型,治疗组大鼠造模后给予羚羊角粉300 mg/(kg·d)灌胃。各组大鼠分别在创伤前1 d,创伤后1、3、5、7 d处死,分别测量脑含水量;血脑屏障的功能,观察各组脑组织的病理结构以及水通道蛋白-4(AQP4)的表达。结果治疗组较模型组相比脑水肿明显减轻(P<0.05),血脑屏障损伤较少(P<0.05)。创伤后大鼠脑组织AQP4的表达升高(P<0.05),第3日达最高水平(P<0.05),治疗组AQP4的表达较创伤组有显著下调(P<0.05)。结论羚羊角粉对大鼠创伤性脑水肿有治疗作用,可能是通过抑制创伤后脑组织周围的AQP4的表达来实现的。

吉兰-巴雷综合征患者血脑屏障通透性与临床预后的相关性

目的 探讨吉兰-巴雷综合征（GBS）患者血脑屏障通透性与临床预后的相关性及临床意义.方法 随访2013年1月~2016年6月第二军医大学附属长海医院收治的78例GBS患者,根据出院后第6个月时Hughes评分分为预后较好组（Hughes＜3分）和预后不良组（Hughes≥3分）,比较两组间临床、脑脊液生化资料及免疫治疗方式.结果 临床预后较好组与不良组之间患者性别、年龄、发病季节、前驱症状、肺部感染、机械通气、脑脊液蛋白、免疫球蛋白G（IgG）、IgG指数、24 h鞘内IgG合成率、神经轴索损伤、免疫治疗等比较差异均无统计学意义（P＞0.05）,入院时肌力评分、脑脊液白蛋白/血清白蛋白比值比较差异有统计学意义（χ2分别为11.73,8.01;P＜0.05）.血脑屏障损伤与患者临床预后不良呈正相关（r=0.32,P＜0.01）.结论 GBS患者入院时血脑屏障损伤其临床预后较差,血脑屏障通透性可作为评估GBS患者临床预后的生化指标.

醒脑静注射液对全脑缺血-再灌注大鼠脑内Caveolin-1表达的影响

目的 探讨醒脑静注射液对大鼠全脑缺血-再灌注后血脑屏障通透性及血脑屏障质膜微囊（Caveolae）中的标志性蛋白Caveolin-1的影响.方法 采用改良Pulsinelli四血管闭塞法建立大鼠全脑缺血-再灌注模型.将162只雄性Wistar大鼠随机（随机数字法）分为3组,即假手术组（Sham组）、全脑缺血-再灌注模型组（Model组）和醒脑静组（XNJ组）.每组又分别于缺血-再灌注后24、48和72 h三个时间点观察.用于湿重法测定脑组织中水含量,分光光度计法检测脑组织伊文氏蓝含量,Western blot检测大脑皮层的Caveolin-1蛋白含量.结果 缺血-再灌注后24h,Model组和XNJ组的脑组织含水量均显著高于Sham组（P＜0.05）,但在缺血-再灌注后48 h和72h,Model组的脑组织含水量显著高于XNJ组和Sham组（P＜0.05）.缺血-再灌注后24 h,Model组和XNJ组大鼠脑组织内伊文氏蓝（EB）含量均高于Sham组（P＜0.05）,缺血-再灌注后48 h和72 h,Sham组和XNJ组的EB含量显著低于Model组（P＜0.05）.缺血-再灌注后24、48和72 h,Model组和XNJ组脑皮层中的Caveolin-1蛋白表达水平显著低于Sham组,差异有统计学意义（P＜0.05）;但是XNJ组在缺血-再灌注后三个时间点,Caveolin-1蛋白表达水平显著高于Model组（P＜0.05）.结论 在脑缺血-再灌注后,醒脑静注射液对血脑屏障具有保护作用,可能与醒脑静注射液调节血脑屏障质膜微囊（Caveolae）中的标志性蛋白Caveolin-1的表达有关.

冰片配伍黄芪甲苷与三七总皂苷对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障转运蛋白的影响

目的 从血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)转运蛋白角度探讨冰片配伍黄芪甲苷(astragalosides IV,AST IV)和三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)在脑缺血再灌注状态下促进药物成分入脑的作用。方法 采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,ig给予冰片、AST IV、PNS及其配伍药物,2,3,5-氯化三苯四氮唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride,TTC)染色法测定脑组织损伤,Western blotting法检测脑组织外排蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)和多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance protein-1,MRP-1)、MRP-2、MRP-4、MRP-5及摄取蛋白有机阳离子转运体3(organic cation transporter3,OCT3)、有机阴离子转运多肽-2(organicaniontransportingpolypeptides-2,OATP-2)蛋白的表达,real-timePCR法检测脑组织多药耐药(multidrug resistance,mdr)基因mdr1a、mdr1b和mrp-1、mrp-2、mrp-4、mrp-5 mRNA表达。结果 TTC染色结果显示,脑缺血再灌注后,大鼠脑组织出现明显梗死灶。各药物能显著减少脑梗死体积,ASTIV+PNS的效应强于AST IV与PNS单用,冰片+AST IV+PNS的效应强于各药物单用及AST IV+PNS。外排蛋白和基因检测显示,脑缺血再灌注后,大鼠脑组织P-gp、MRP-1、MRP-2、MRP-4、MRP-5蛋白表达均显著增多。与模型组比较,冰片能显著下调大鼠脑组织P-gp、MRP-2、MRP-4蛋白表达水平,PNS能显著下调MRP-4、MRP-5蛋白表达水平,AST IV、AST IV+PNS与冰片+AST IV+PNS能显著下调P-gp、MRP-2、MRP-4、MRP-5蛋白表达水平,且冰片+AST IV+PNS的效应显著强于各药物单用及AST IV+PNS,AST IV+PNS的效应显著强于AST IV或PNS单用。基因表达结果与蛋白表达结果类似。摄取蛋白检测结果显示,与对照组比较,脑缺血再灌注后大鼠脑组织OCT-3蛋白表达在模型组及各给药组变化均不明显,而模型组OATP-2蛋白表达水平显著降低。PNS、AST IV+PNS及冰片+AST IV+PNS能显著上调OATP-2蛋白表达水平,且AST IV+PNS的效应显著强于AST IV、PNS单用,冰片+ASTIV+PNS的效应显著强于各药物单用及ASTIV+PNS。结论 脑缺血再灌注后,脑组织损伤,BBB的主要外排蛋白和基因表达均显著增强,而摄取蛋白OATP-2表达显著降低。冰片配伍AST IV及PNS后,能增强抗缺血性脑损伤的作用,其作用可能与下调BBB中外排蛋白P-gp、MRP-2、MRP-4、MRP-5和相应基因表达,同时上调摄取蛋白OATP-2表达,促使脑组织中冰片、AST IV及PNS有效成分的吸收与富集而发挥药理作用有关。