家蚕BmLITAF基因的克隆表达及生物信息学分析

在对家蚕蛹cDNA文库进行分析时，发现一条与脂多糖诱导肿瘤坏死因子a的转录激活因子LITAF的保守结构域同源的保守序列。基因序列全长为981bp，由97bp的5’端非翻译区序列（5’UTR）、390bp的开放读码框（ORF）和494bp的3’端非翻译区序列（3’UTR）组成。利用生物信息学方法对BmLITAF进行基因结构分析发现，此基因由3个外显子和2个内含子组成，编码129个氨基酸残基；其预测理论分子量为13．9kDa，预测等电点6．47；在90～100位氨基酸残基区域具有较高的疏水性，具有跨膜结构域；定位细胞内的可能性较大。根据BmLITAF的cDNA序列进行PCR扩增获得目的基因，将其克隆到质粒pGEX-4T-3中，测序验证克隆正确。经IPTG诱导，结果发现目的蛋白主要以包涵体的形式存在。

一个新的家蚕BmLITAF基因的电子克隆及序列分析

在对家蚕蛹cDNA文库的测序中发现了脂多糖诱导肿瘤坏死因子α的转录激活因子(lipopolysaccharide-induced tumor necrosis factor-α factor,LITAF)的EST序列(GenBank登录号AADK01016184)。经过比对发现BmLI-TAF全长为981 bp,由97 bp的5′端非翻译区序列(5′UTR)、390 bp的开放读码框(ORF)和494 bp的3′端非翻译区序列(3′UTR)组成。用电子克隆方法对BmLITAF进行基因结构分析发现,此基因由3个外显子和2个内含子组成,编码129个氨基酸。对BmLITAF蛋白进行疏水性、跨膜结构和信号肽分析的结果显示,BmLITAF具有跨膜结构域。根据BmLITAF的电子克隆序列由家蚕基因组PCR扩增获得BmLITAF基因,将其克隆到pGEM-T-easy载体中,测序验证与电子克隆结果一致。