环磷酰胺所致血虚证小鼠骨髓CD34^+细胞的变化

目的 :研究环磷酰胺 (CTX)诱发的血虚证小鼠骨髓中干祖细胞的数量和骨髓细胞周期的动态变化。方法 :采用CTX大小两个剂量分别对两组小鼠进行腹腔注射制作小鼠血虚证模型。在不同时相点 ,双荧光标记测定CD34+ 细胞在骨髓有核细胞中的比例 ,骨髓细胞固定后PI染色测定细胞周期。结果 :①注射CTX后CD34+ 细胞在骨髓有核细胞中的比例下降后迅速上升 ,然后又下降。②注射CTX后骨髓细胞增殖受抑 ,然后动员骨髓细胞增殖 ,但药后 10d细胞增殖又受抑。与CD34+ 细胞在骨髓有核细胞中比例的变化规律有一致性。结论 :CTX可以动员骨髓造血干祖细胞进入细胞周期而增殖 ,增加了骨髓中造血干祖细胞的数量 ,但此过程加速了干祖细胞池的耗竭 ,从而对骨髓造成更大损伤 ,这可能是CTX诱发小鼠血虚证的机理之一。

补肾化痰活血中药对再生障碍性贫血小鼠骨髓CD_(34)^+和细胞因子表达的影响

目的:观察和比较补肾化痰活血中药对再生障碍性贫血小鼠骨髓造血生长因子SCF mRNA、GM-CSF mRNA表达和骨髓CD34+的影响。方法:建立再障小鼠模型,各组小鼠分别胃饲生理盐水、补肾化痰活血中药、康力龙和再障生血片,连续喂养14天后,采集骨髓进行单个核细胞培养,应用流式细胞术检测骨髓CD3+4抗原水平;应用RT-PCR方法检测SCFmRNA、GM-CSF mRNA表达水平。结果:①模型组骨髓CD3+4抗原检测结果显著低于正常对照组,治疗后各组小鼠骨髓CD3+4抗原水平明显提高,差异有显著性。②模型组骨髓造血生长因子SCF mRNA、GM-CSF mRNA表达水平均低于正常对照组,治疗后各组小鼠骨髓造血生长因子表达水平均明显提高,差异均有显著性。结论:补肾化痰活血方可能通过增强再障小鼠骨髓造血生长因子GM-CSFmRNA、SCFmRNA表达水平,刺激造血细胞分化成熟,达到调控骨髓造血的目的。

银屑病患者骨髓CD34^＋细胞定向分化的T细胞对角质形成细胞增殖的影响

目的:探讨家族史阳性的银屑病患者骨髓CD34+细胞体外定向分化的T细胞对表皮角质形成细胞(KC)增殖调控蛋白表达的影响。方法:将银屑病患者骨髓CD34+细胞体外定向分化的T细胞经链球菌超抗原活化后与KC共培养,分别采用免疫组化法及ELISA法检测KCC-myc、bcl-xL、p53及Ki67蛋白表达及培养上清白介素(IL)-8、干扰素(IFN)-γ水平。结果:①受银屑病患者CD34+细胞定向分化T细胞作用的KCC-myc及Ki67蛋白表达与自然增殖组及正常人CD34+细胞定向分化的T细胞作用组相比显著增强(P<0.05),而bcl-xL及p53蛋白表达3组间的差异无统计学意义(P>0.05);②受正常人CD34+细胞定向分化T细胞作用的KCC-myc、bcl-xL、p53及Ki67蛋白表达与自然增殖组比较差异亦无统计学意义(P>0.05);③银屑病CD34+细胞定向分化的T细胞作用组培养上清IL-8及IFN-γ水平显著高于正常对照组(P<0.01)。结论:银屑病患者骨髓造血细胞定向分化的T细胞可影响KC增殖状态,显示类似银屑病外周血T细胞的活性特点。

银屑病患者骨髓CD34^+细胞RUNX1及其靶基因SLC9A3R1的研究

目的:研究转录调节因子RUNX1及其靶基因SLC9A3R1在银屑病患者骨髓CD34+细胞中的表达及SLC9A3R1与NAT9之间RUNX1的连接位点,以揭示银屑病患者造血干细胞的活性,为深入阐明银屑病患者免疫异常的根源及造血细胞在其中的作用提供理论依据。方法:采用免疫磁珠法分离CD34+细胞,RT-PCR法分别检测RUNX1和SLC9A3R1的mRNA表达,直接测序法检测PCR产物中SLC9A3R1与NAT9之间RUNX1连接位点DNA序列。结果:银屑病患者骨髓CD34+细胞RUNX1表达阳性率低于正常对照组(P<0.05);银屑病患者骨髓CD34+细胞SLC9A3R1表达水平明显高于正常对照组(P<0.05),且与PASI评分正相关(r=0.48,P<0.05);在SLC9A3R1与NAT9之间未发现RUNX1连接位点的突变。结论:决定银屑病患者骨髓CD34+细胞分化的关键基因RUNX1存在异常;银屑病患者骨髓RUNX1和SLC9A3R1可能通过对骨髓造血微环镜和造血干细胞的异常调节参与银屑病的发病。

G-CSF对不同人群CD34^+细胞及T细胞亚群影响的动态变化研究

目的 探讨应用G CSF动员外周血干细胞时,异体 自体造血干细胞移植供 受者的骨髓及外周血CD3 4+ 细胞和T细胞亚群的动态变化特点及最佳外周血干细胞采集时间。方法 对12例健康供者和16例化疗7d后的恶性血液病患者,以G CSF 15 0 μg 12h ,皮下注射,连用5d。应用流式细胞仪测定骨髓及外周血CD3 4+ 细胞和T细胞亚群。结果 ①应用G CSF前,两者骨髓CD3 4+ 细胞有显著差异(P <0 0 1)。应用48h后,两者的骨髓CD3 4+ 细胞均较前有明显增加(P <0 0 1) ,两者之间仍存在明显差异(P <0 0 1)。两者的骨髓CD3 4+ 细胞高峰值出现在96h后,较应用前差异显著(P <0 0 1) ,两者之间无差异(P >0 0 5 )。②应用G CSF前,两者的外周血CD3 4+ 细胞无明显差异(P >0 0 5 )。应用72h后,两者外周血中CD3 4+ 细胞均较前有明显增加(P <0 0 1) ,两者之间无明显差异(P >0 0 5 )。96h后,两者的CD3 4+ 细胞达高峰,较应用前差异显著(P <0 0 1)。两者之间无明显差异(P >0 0 5 )。③应用G CSF对两者的T淋巴细胞亚群无明显影响。结论 应用G CSF动员外周血干细胞96h后,异体 自体造血干细胞移植供 受者的骨髓及外周血CD3 4+ 细胞均达到高峰,可适时采集外周血干细胞。

搭桥术中从胸骨和肋骨骨髓中富集CD34^+干细胞的方法

目的为便于进行心肌干细胞移植的临床研究,探索一种搭桥术中从胸骨和肋骨骨髓中快速富集CD34+干细胞的方法。方法搭桥手术患者11例,男6例,女5例,平均年龄(65.4±8.9)岁,平均体重(60.8±14.6)kg。术中从胸骨和肋股骨髓中多点抽取骨髓,MiniMACS分选系统分离纯化骨髓CD34+干细胞,流式细胞术检测富集的CD34+细胞纯度,镜检细胞活力,计数富集干细胞的时间。结果本方法抽取的骨髓液20～30ml,可富集(1.7±0.8)×107个CD34+干细胞,纯度(95.8±1.6)%,活力(95.3±1.6)%;从抽取骨髓到富集到可用的CD34+细胞用时3.5～4h。结论搭桥术中从胸骨和肋骨骨髓中可快速富集理想的CD34+干细胞,获取细胞隐蔽,患者无痛苦,分选时间短,可在搭桥手术结束前提供心肌注射使用,为心肌干细胞移植的临床试验提供依据。

CD34^+细胞含量对自体骨髓干细胞移植治疗肝硬化疗效的影响

目的研究分离骨髓干细胞后CD34+细胞含量对自体骨髓干细胞移植治疗肝硬化疗效的影响。方法回顾性分析自体骨髓干细胞移植治疗肝硬化病例41例,其中CD34+细胞含量不足5%的27例,CD34+细胞含量超过5%(含5%)的14例。分析上述病例术后2～4周的实验室检测指标。结果在CD34+细胞含量不足5%的病例中,患者术后的血清总蛋白、白蛋白(Alb)、碱性磷酸酶(ALP)和血小板(PLT)均较术前明显增高(P<0.05)。在CD34+细胞含量超过5%的病例中,患者术后的血清总蛋白、Alb较术前明显增高(P<0.05)。术前CD34+细胞含量超过5%病例组的PLT平均值[(88.357±38.454)×109/L]明显低于CD34+细胞含量不足5%的病例组[(132.590±127.260)×109/L]。结论自体骨髓干细胞移植可以有效的提升肝硬化患者血清总蛋白和Alb水平,本组病例中CD34+细胞含量的不同并未明显影响术后患者血清总蛋白、Alb的恢复水平。自体骨髓干细胞移植可能影响胆汁的排泌。两组病例脾功能亢进程度不同可能是导致患者CD34+细胞含量差异的原因。

G-CSF对健康人骨髓和外周血CD_(34)^+细胞和T细胞亚群影响的动态观察

目的 :探讨G -CSF对健康人骨髓及外周血CD3 4 + 细胞和T细胞亚群的影响。方法 :对 12例健康人 ,以G -CSF15 0 μg/ 12h ,皮下注射 ,连用 6d。应用流式细胞仪测定CD3 4 + 和T细胞亚群。结果 :应用G -CSF4 8h后 ,骨髓CD3 4 + 细胞开始明显增加 ,72h后外周血CD3 4 + 细胞开始明显增加 ,96h后两者达峰值 ,均较应用前差异显著 (P <0 .0 1)。T淋巴细胞亚群变化不明显 (P>0 .0 5 )。结论 :健康人应用G -CSF后骨髓及外周血CD3 4 + 细胞逐渐增加并于 96h后达到高峰 ,T细胞亚群则无明显变化。

银屑病患者骨髓CD34^+细胞Hes-1基因的表达研究

目的:观察银屑病患者骨髓CD34^+细胞Hes-1基因的表达。方法:以β-肌动蛋白为内参照,采用反转录(RT)-PCR法半定量检测24例银屑病患者及18名正常人骨髓CD34^+细胞Hes-1 mRNA的表达水平。结果:与正常对照组相比,银屑病患者组Hes-1mRNA表达水平明显升高,二者差别有统计学意义。结论:造血细胞发育过程中重要的转录因子Hes-1的高表达可能与银屑病患者骨髓造血细胞的增殖活性异常有关。

CD34^+细胞在原发性骨髓纤维化症和原发性血小板增多症骨髓组织中的表达

目的:探讨CD34+细胞在原发性骨髓纤维化症及原发性血小板增多症骨髓组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组织化学染色法,检测原发性骨髓纤维化症和原发性血小板增多症实验组及对照组骨髓组织中CD34+细胞表达情况。结果:CD34+细胞在实验组骨髓组织中表达高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);CD34+细胞在原发性骨髓纤维化症及原发性血小板增多症骨髓组织中表达的差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CD34+细胞在原发性骨髓纤维化症和原发性血小板增多症的发生中有一定关系,CD34+细胞与两者之间的转化无必然联系。

CD34^+细胞在哮喘小鼠中的表达及布地奈德干预的实验研究

目的研究CD34+细胞在卵白蛋白(OVA)致敏小鼠、哮喘小鼠中的表达及布地奈德(BUD)吸入对哮喘小鼠CD34+细胞表达的影响。方法将雄性昆明小鼠随机分成致敏组、哮喘组、BUD干预组、正常对照组。用OVA进行致敏和激发,建立哮喘模型。常规检测骨髓、外周血中有核细胞总数,流式细胞仪检测CD34+细胞。结果致敏小鼠骨髓中CD34+细胞比例为(3.99±1.37)%,较正常小鼠[(2.33±1.27)%]明显增加;外周血中CD34+细胞比例为(1.58±0.63)%,与正常小鼠[(1.50±1.04)%]相比,未见明显变化。哮喘小鼠骨髓中CD34+细胞比例为(5.64±1.87)%,与致敏小鼠相比进一步升高;外周血中CD34+细胞比例为(2.91±1.27)%,与正常小鼠相比亦有明显增加;布地奈德吸入后,骨髓、外周血中CD34+细胞表达分别为(3.77±1.81)%和(1.76±1.06)%,均有明显下降。结论小鼠在OVA致敏状态下骨髓中CD34+细胞表达明显增强,OVA激发后哮喘状态下其表达进一步增强,同时,外周血中CD34+细胞比例也明显增高。布地奈德可以抑制哮喘小鼠骨髓、外周血中CD34+细胞的增殖表达。

rhG-CSF动员的骨髓和外周血干细胞混合移植物首次采集时供者外周血单核细胞计数反映混合采集物中CD34^＋细胞含量

本研究探讨人重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员的骨髓和外周血干细胞混合移植健康供者首次干细胞采集时供者外周血单核细胞数量与骨髓/外周血混合采集物中CD34+细胞数量的关系。对70名亲缘健康供者均皮下注射rhG-CSF 5μg/(kg.d),连续5天。第4天和第5天分别采集骨髓和外周血干细胞。首次干细胞采集时用EX2100血细胞分析仪检测供者外周血细胞计数,同时应用流式细胞仪测定骨髓和外周血混合采集物中的CD34+细胞数量。结果表明:rhG-CSF动员的70例供者首次干细胞采集时外周血单核细胞的数量为(1.15±0.60)×109/L;骨髓和外周血采集物中的CD34+细胞总量分别是(5.85±2.93)×107和(1.33±0.77)×108;骨髓和外周血混合采集物的CD34+细胞总量是(1.92±0.86)×108。Pearson和Spearman分析显示首次干细胞采集时供者外周血单核细胞计数(×109/L)与骨髓采集物中CD34+细胞的总量(相关系数:r=0.265,p=0.027)、外周血采集物中CD34+细胞总量(r=0.340,p=0.004)以及混合移植物中CD34+细胞的总量(r=0.398,p=0.001)均存在显著的相关性;多因素分析表明,首次干细胞采集时供者外周血单核细胞计数与骨髓采集物、外周血采集物以及混合移植物中CD34+细胞的总量均呈正相关关系(p值分别为0.027、0.004和0.001)。首次干细胞采集时供者外周血单核细胞数量对混合移植物中CD34+细胞总量预测的敏感性是71%,特异性是70%(p=0.007)。结论:rhG-CSF动员的骨髓和外周血混合移植健康供者首次干细胞采集时外周血单核细胞计数可有效预测输注给受者的CD34+细胞总量即采集效果。

G-CSF动员的外周血与骨髓CD34^+细胞黏附分子的表达

目的 :研究黏附分子在外周血干细胞动员机制中的作用。方法 :应用流式细胞仪检测粒细胞集落刺激因子 G- CSF动员的外周血细胞与骨髓 CD34+细胞表达的黏附分子非常延迟抗原 4 (VL A- 4 )、淋巴细胞功能相关抗原 1(L FA- 1)和 L-选择素 (CD6 2 L)。结果 :G- CSF动员后的外周血 CD34+细胞表达的 VL A- 4、 L FA- 1与骨髓 CD34+细胞相比明显减少 ,CD6 2 L 无明显改变。结论 :黏附分子 VL A- 4及 L FA- 1降低可能是 G- CSF动员造血干细胞进入外周血过程中的一个重要环节。

应用外周血CD34^+细胞与骨髓间充质干细胞共培养细胞膜片修复兔颅骨缺损

目的:评价外周血CD34+细胞(PB-CD34+Cs)与骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)共培养所得细胞修复兔颅骨极限缺损的能力。方法:分离PB-CD34+Cs及BM-MSCs,建立2种细胞的共培养体系。将共培养细胞诱导为膜片,复合羟基磷灰石支架材料修复兔颅骨直径15 mm的圆形缺损(n=10),并设置单纯BM-MSCs组(n=10)及空白对照(n=5)。术后4、6、8周行CT扫描,术后8周取材,行组织学检查,评价骨修复效果。结果:成膜诱导14 d后获得细胞膜片,膜片具有良好的韧性和可操作性。影像学及组织学定量检测结果显示,共培养细胞组颅骨缺损的修复效果最佳,明显优于单纯BM-MSCs对照组及空白对照组。结论:共培养细胞有效地修复了兔颅骨极限缺损,其效果优于BM-MSCs。

银屑病患者骨髓CD34^+细胞HLA-C和PDCD1表达的研究

目的:研究HLA-C(histocompatibility complex class C)和PDCD1(programmed cell death 1)在银屑病患者骨髓CD34^+细胞中的表达,以揭示银屑病患者造血干细胞的活性。方法:采用免疫磁珠法分离CD34^+细胞,RT-PCR法分别检测HLA-C、PDCD1的mRNA表达。结果:银屑病患者骨髓CD34^+细胞HLA-CmRNA表达水平高于正常对照组(P<0.05),PDCD1 mRNA表达在银屑病组与正常对照组间比较无统计学意义(P>0.05),未发现HLA-C mRNA表达水平与银屑病皮损面积和疾病活动性指数(PASI)评分有直线相关性。结论:影响CD34^+细胞发育分化的某些基因在银屑病患者骨髓CD34^+细胞中表达异常,这些基因表达水平的异常可能引起骨髓造血干细胞活性异常,并参与银屑病的发病。

银屑病患者骨髓CD34^+细胞转录调节因子RUNX1的表达研究

目的:研究转录调节因子RUNX1在银屑病患者骨髓CD34+细胞中的表达,以揭示银屑病患者造血干细胞的活性。方法:采用免疫磁珠法分离CD34^+细胞,流式细胞术鉴定细胞纯度,反转录PCR和蛋白免疫印迹法分别检测RUNX1的mRNA和蛋白表达。结果:银屑病患者骨髓CD34^+细胞RUNX1 mRNA及蛋白表达水平均高于正常对照组(P<0.05)。结论:决定CD34^+细胞发育分化的关键转录因子RUNX1在银屑病患者骨髓CD34^+细胞中表达异常,RUNX1表达水平的增高可能引起骨髓造血干细胞和造血微环境的异常,并可能参与银屑病的发病。

原子力显微镜对骨髓CD34^+细胞的膜表面超微结构研究

本研究目的是利用原子力显微镜 (atomicforcemicroscope ,AFM)观察骨髓CD3 4 +造血细胞的膜表面超微结构 ,对比正常人与白血病患者CD3 4 +造血细胞膜表面超微结构的形态学差异。将免疫磁珠分离仪富集的CD3 4 +细胞滴至新鲜剥离的云母片上 ,在空气中干燥后用AFM进行观察。结果表明 :利用AFM附带软件IP2 .1的线分析及面分析功能 ,得到正常人与白血病患者CD3 4 +造血细胞膜表面结构的几何参数 ,经比较 ,白血病患者CD3 4 +造血细胞的高低差Rp v、均方根粗糙度Rrms、平均粗糙度Ra、平均高度 Z 4个几何参数值均明显大于正常人。结论 :AFM能准确直观地观察到CD3 4 +造血细胞的膜表面超微结构 ,并同时获得其膜表面特征几何参数 ,可为临床白血病的快速诊断、HSPCT移植物筛选和预后提供重要参考。

大鼠骨髓细胞CD34^+β_2m^-CD90^+亚群肝内移植的研究

目的观察骨髓CD34+β2m-CD90+细胞在受体大鼠纤维化肝内的定居、生长以及对受体肝的影响。方法将雄性肝纤维化大鼠的骨髓CD34+β2m-CD90+细胞用PKH26-GL标记后,从门静脉注射到预先经放疗的同种模型雌性大鼠肝内;PCR检测雌鼠血清Y染色体的表达,荧光显微镜检测PKH26-GL标记的骨髓CD34+β2m-CD90+细胞在受体肝内的分布;病理学检查移植骨髓CD34+β2m-CD90+细胞后大鼠肝纤维化组织形态学改变;免疫组化检测肝内白蛋白、α-SMA的表达,放免法测定受体血清层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)的水平,斑点杂交检测肝脏Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达。结果在移植后2周内,雌性受体血清一直能检测到Y染色体特异的Sry基因表达,肝内有PKH26-GL红色荧光分布并有聚集成团趋势;受体肝纤维化减轻,间隔和胞周性纤维化较对照组改善;受体血清层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)的水平下降(P<0.05),肝组织α-SMA、Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达下降(P<0.05),白蛋白的表达升高(P<0.05)。结论大鼠骨髓CD34+β2m-CD90+细胞自体移植入纤维化肝后,可能定居并有一定程度的增殖;大鼠移植CD34+β2m-CD90+细胞后,受体肝纤维化程度有减轻的趋势。

脐血CD34^+细胞体外扩增时HOXB4基因表达的变化

同源盒基因家族成员HOXB4反映原始造血干/祖细胞(PHSC/PHPC)的自我更新和增殖能力。本研究采用实时定量RT-PCR的方法在mRNA水平上检测HOXB4基因的表达,以观察体外扩增脐血CD34+细胞自我更新的水平。结果显示:随着体外培养时间的延长,虽然CD34+细胞数增加,但HOXB4表达下降;周后,HOXB4几乎检测不到,与成熟外周血淋巴细胞表达HOXB4的水平相同;CD34+细胞与骨髓间充质干细胞(BM-MSC)共培养可以减缓CD34+细胞HOXB4表达的下降。结论:脐血CD34+细胞体外扩增过程中自我更新能力逐渐下降。CD34+与BM-MSC共培养有助于减缓体外扩增的CD34+细胞自我更新能力的丧失。