山羊BST-2基因的表达及其亚细胞定位

将山羊的BST-2基因(Capra hircus bone marrow stromal antigen 2 gene)分别克隆至原核表达载体p GEX-4T-1和真核表达载体p3×Flag-CMV-14中,获得了重组表达质粒p GEX-BST-2和p3×Flag-BST-2。将重组质粒p GEX-BST-2转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE及Western blot结果显示,诱导表达的重组蛋白分子量约为42 ku,与预期蛋白一致。利用脂质体介导转染法将重组质粒p3×Flag-BST-2转染Vero细胞,经激光共聚焦显微镜检测,结果显示,BST-2蛋白在细胞中可以良好表达,并主要定位于细胞膜上。

STAG2基因的特点及其在膀胱癌中的研究进展

骨髓基质细胞抗原2(STAG2)是一种最早在骨髓基质细胞中发现并广泛存在于正常细胞中的基因。到目前为止,STAG2基因在膀胱癌中的突变率约为11%,且STAG2基因表达缺失在低分期、低分级的膀胱癌中更为常见,是形成染色体非整倍体的主要原因。另外,STAG2基因的表达缺失与膀胱癌预后不良也有密切关系。深入研究STAG2基因对了解膀胱癌的发生、发展有重要意义,可为临床上膀胱癌的诊断和治疗提供一种新途径。

骨髓基质细胞抗原2抑制乙肝病毒复制与释放

目的研究骨髓基质细胞抗原2(bone marrow stromal antigen 2,BST-2)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制与释放的影响。方法以不同浓度干扰素处理人肝癌细胞株Hep G2.2.15,Western blot和荧光定量PCR检测BST-2蛋白水平和RNA水平;分别用构建的BST-2真核表达质粒p CDNA3.1-BST2-FLAG和BST-2拮抗蛋白HIV Vpu真核表达质粒,转染Hep G2.2.15细胞,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养液乙肝病毒表面抗原(HBs Ag)和乙肝病毒e抗原(HBe Ag),荧光定量PCR检测HBV mRNA,Southern blot检测HBV DNA。结果转染p CDNA3.1-BST2-FLAG后,HBV mRNA降低26%,细胞内HBV DNA降低31%,细胞培养液中HBV DNA降低33%(P<0.05),细胞培养液中HBs Ag下降至82%,HBe Ag下降至77%(P<0.05);加入Vpu蛋白后,BST-2的抑制作用受到对抗,HBV mRNA恢复至92%,细胞内HBV DNA恢复至93%,细胞培养液中HBV DNA升至98%,细胞培养液中HBs Ag恢复至102%,HBe Ag恢复至99%,HBV复制与释放明显增强。结论 BST-2对HBV复制与释放具有抑制作用,该抑制作用可被HIV Vpu蛋白拮抗。

新型功能蛋白BST2研究进展

BST2是一种新发现的免疫应答因子,对囊膜病毒具有天然免疫作用。二聚体化的BST2一端固定于细胞的细胞膜上,另一端与病毒相结合,这种结构上的特点是其阻止病毒出细胞膜的关键。研究显示,病毒在与BST2的对峙中产生了抑制作用,例如Nef、Env、Vpu、nsP1和K5等蛋白都具有对BST2的拮抗功能。而近期也发现BST2还具有许多新的功能,尤其是协助人巨细胞病毒(HCMV)入侵细胞,更是引起了广泛关注。论文结合国际上最新的BST2研究进展,从结构特点、功能特点、拮抗机制和应用前景等方面进行了深入探讨。

BST-2在pSS患者唇腺、外周血淋巴细胞中的表达及增殖作用

目的探讨原发性舍格伦综合征(pSS)患者唇腺及外周血B淋巴细胞中骨髓基质细胞抗原2(BST-2)的表达情况及其在pSS中的作用。方法将2017年9月至2018年3月在内蒙古自治区人民医院接受治疗的40例pSS患者作为pSS组;将同期体检的30例健康者作为对照组。采用实时荧光定量PCR检测纳入研究者的唇腺组织及外周血B淋巴细胞中BST-2的表达水平。免疫组织化学法检测唇腺组织内BST-2的表达情况,并分析BST-2对淋巴细胞增殖的影响。结果pSS组的外周血B淋巴细胞和唇腺组织中BST-2的表达水平明显高于对照组(P<0.05);pSS患者唇腺组织中浸润的局灶性淋巴细胞和少数周围导管上皮内BST-2表达量较高,而在对照组中仅在导管上皮细胞内存在散在性少量表达。连续切片的pSS患者唇腺组织染色显示,pSS患者的唇腺组织内CD19染色阳性细胞和BST-2阳性细胞基本一致。结论pSS患者唇腺组织和外周血B淋巴细胞BST-2水平明显增高;BST-2通过对腺体内B淋巴细胞的浸润及增殖,参与pSS的发病及进展。

骨髓基质抗原蛋白2靶向微泡的制备及小鼠肿瘤新生血管超声分子成像研究

目的研究制备针对骨髓基质抗原蛋白2（BST2）的TMBs造影剂（BST2-TMBs），通过超声分子成像技术对小鼠肿瘤血管内皮细胞进行检测，为肿瘤的发生、发展及早期诊断提供实验依据。方法将抗BST2的抗体通过生物素一亲和素桥接的方式连接于微泡（MBs）表面，获得BST2-TMBs，在光学显微镜下观察TMBs的形态，用粒径分析仪测定其粒径及其分布；通过体外细胞黏附实验研究TMBs与血管内皮细胞的结合性能，并对小鼠前列腺癌肿瘤血管内皮细胞行超声分子成像，用免疫组织化学染色分析BST2在肿瘤血管内皮细胞的表达。采用SPSS19．0软件行统计学分析，对独立样本行t检验。结果制备的BST2-TMBs的平均粒径为1．61μm，其中95％的微泡在1-5μm之间。BST2-TMBs能够与血管内皮细胞结合，平均每个视野有（165±25）个TMBs结合在内皮细胞表面，远高于非靶向微泡（IgG-MBs）对照组的（10±3）个微泡（t=10．662，P〈0．01）。黏附的TMBs能够明显增强内皮细胞的超声信号强度，TMBs为27．93±5．14（灰度值），非靶向微泡为3．61±1．67（灰度值）（t=7．239，P〈0．01）。小鼠在体肿瘤超声分子成像表明：BST2-TMBs处理组在微泡注射7min时信号强度（扣除微泡击碎后的信号强度）为38．79±0．29（灰度值），能保持47．65％的微泡注射30s时的信号强度（灰度值81．40±0．37），而IgG-MBs处理组在微泡注射7min时的信号强度（扣除微泡击碎后的信号强度）是9．46±0．17（灰度值），仅能保持11．39％的微泡注射30S时的信号强度（灰度值83．01±0．60）。相比之下，TMBs在肿瘤部位的超声信号强度较非靶向微泡提高4．27倍（t=65．587，P〈0．01）。免疫组织化学证实BST2蛋白在小鼠前列腺癌肿瘤血管内皮细胞上有表达。结论BST2-TMBs可以用于小鼠前列腺癌血管内皮细胞的超声分子成像，这为肿瘤的发生发展以及早期诊断提供了实验依据。

RNA聚合酶2延长因子相关因子2通过调节骨髓基质抗原2的表达调控前列腺癌细胞的增殖与迁移

目的 观察雄激素应答基因RNA聚合酶2延长因子相关因子2（EAF2）对骨髓基质抗原2（BST2）的调节能力，以及EAF2通过BST2调节前列腺癌细胞增殖和迁移的能力。方法 以Lipofectamine 2000试剂转染针对EAF2和非特异性对照组的小干扰RNA（siRNA，分别为100 pmol），干扰前列腺癌细胞C4-2中EAF2的表达，采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）和Western blot检测细胞内BST2的mRNA和蛋白水平表达变化；采用质粒转染的方法在293T细胞中过表达EAF2后检测BST2蛋白水平的变化，明确EAF2对BST2表达的影响；采用溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记法和Transwell小室法计算并检测干扰BST2表达后对前列腺癌细胞C4-2增殖能力和迁移能力的影响，明确BST2对前列腺癌细胞增殖和迁移的调节能力。结果 干扰EAF2表达后细胞内BST2 mRNA的表达明显升高，说明EAF2可以调节BST2的转录水平，进一步检测干扰EAF2表达后，BST2的蛋白水平表达明显升高，进一步干扰BST2表达后，检测到前列腺癌细胞的增殖比例由（22.09±1.08）%下降至（12.25±1.32）%（P＝0.001）。同时，迁移细胞的数量从（50.50±3.80）%下降至（24.25±1.42）%（P＝0.001）。结论 在前列腺癌细胞中，EAF2可以在转录和蛋白水平调节BST2的表达，BST2具有调节前列腺癌细胞增殖和迁移的能力。

猪骨髓基质抗原2基因的克隆、表达及生物学活性研究

研究目的是克隆猪骨髓基质抗原2(Bone marrow stromal antigen-2,BST-2)基因并进行真核表达,获得具有抗病毒活性的重组BST-2蛋白。研究通过RT-PCR从猪瘟弱毒疫苗和聚肌胞(Poly I:C)刺激的猪肾细胞(PK-15)中扩增出猪BST-2cDNA,克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His,构建重组表达质粒pcDNA-BST-2,转染HEK293T细胞,纯化BST-2蛋白并经Bradford法定量,Western blot检测,研究BST-2抗病毒生物学活性。酶切鉴定和核酸序列测定证实pcDNA-BST-2真核表达质粒构建成功,转染HEK293T细胞后,经间接免疫荧光能够检测到绿色荧光。生物学活性测定重组BST-2蛋白具有一定的抗水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)、H9禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)及猪繁殖与呼吸综合症病毒(Porcine reproductive and respiratory syn-drome virus,PRRSV)的活性。结果表明,重组BST-2具有一定抗病毒生物功能,为进一步研究重组BST-2蛋白的活性以及BST-2抗病毒药物研究奠定了基础。

骨髓基质细胞抗原2敲低促进创伤性颅脑损伤大鼠神经功能的恢复

【目的】探索骨髓基质细胞抗原2(bone marrow stromal cell antigen 2,Bst2)对颅脑创伤的影响。【方法】将大鼠随机分为假手术组,创伤性颅脑损伤(Traumatic brain injury,TBI)组,TBI+Bst2 siRNA组。其中TBI+Bst2 siRNA组在损伤后同时原位注射Bst2 siRNA。通过改良大鼠神经功能缺损评分,伊文思蓝通透性,脑干湿比重比较Bst2敲低对TBI损伤大鼠的影响。通过免疫印迹检测水通道蛋白-4(aquaporin 4,AQP4),基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein,MMP9),组织型纤溶酶原激活物(tissue plasminogen activator,tPA),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,Tnf-α),表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,Egfr)表达水平的变化。【结果】Bst2 siRNA降低了TBI大鼠神经功能损伤评分,降低了伊文思蓝通透性,降低了脑水肿;免疫印迹结果显示Bst2敲低后Aqp4,Mmp9,tPA,Tnf-α和Egfr的表达水平降低。【结论】Bst2敲低通过降低Aqp4,Mmp9,tPA,Tnf-α和Egfr的蛋白水平减轻了脑水肿,改善了血脑屏障通透性和神经功能。

miR-133a-3p负调控NG2参与肌成纤维细胞活化的机制研究

该文旨在探讨在肌成纤维细胞(myofibroblasts,MFs)活化的过程中,微小RNA(microRNA,miRNA)对神经胶质抗原2(neuron-glial antigen 2,NG2;基因名:Cspg4)表达的调控及其分子机制。小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stromal cells,BMSCs)经miRNA mimics转染和转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGFβ1)诱导后,采用qRT-PCR方法检测Cspg4以及MFs活化标志物的表达;通过双荧光素酶报告基因实验检测Cspg4与miRNA的结合情况。结果显示,MFs活化后,Cspg4的表达以时间和剂量依赖性方式上调,且与MFs的活化标志物呈正相关。敲减Cspg4后,MFs的活化标志物表达下调。在肝损伤模型中,miR-133a-3p表达下调,且与Cspg4呈显著负相关。miR-133a-3p通过与Cspg43ʹ非翻译区(3ʹuntranslated region,3ʹUTR)的特定位点结合,对Cspg4进行转录后调控。miR133a-3p可以抑制TGFβ1诱导的Cspg4和MFs活化标志物的水平升高。总之,miR-133a-3p通过负调控NG2的表达参与了MFs的活化。

胶质母细胞瘤骨髓基质细胞抗原2基因的表达及其与非CpG岛DNA甲基化和预后的关系

目的探讨骨髓基质细胞抗原2(BST2)基因在胶质母细胞瘤(GBM)中的表达水平及其与DNA甲基化水平和患者预后的关系。方法共纳入3组GBM样本[美国癌症基因组图谱(TCGA)数据库(35例)、基因表达综合(GEO)数据库中GSE22891队列(50例)、中国脑胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库(105例)]及非肿瘤对照脑组织(NTB)(TCGA数据库10例、GSE22891队列6例、CGGA数据库5例用于基因表达水平比较,GSE63347队列25例、GSE22891队列4例以及CGGA数据库8例用于甲基化数据比较)。利用公共数据库中GBM基因表达芯片和DNA甲基化芯片数据,通过GBM与NTB间BST2基因表达水平比较、生存分析、生物信息学分析等,获得BST2基因在GBM中的表达状态以及其与非CpG岛DNA甲基化、GBM分子亚型[CpG岛甲基化表型(G-CIMP),非G-CIMP的前神经元型、神经元型、经典型和间质型]、患者总生存(OS)时间以及功能基因表达谱之间的关系。结果与NTB样本比较,BST2 mRNA在GBM中呈高表达状态(mRNA表达数据采用Z-score标准化)(TCGA数据库比GSE63347队列:-0.97±1.14比-2.32±0.21,t=3.74,P<0.05;GSE22891队列:9.03±1.28比7.18±0.22,t=3.42,P<0.05;CGGA数据库:-0.43±1.11比-0.62±0.35,t=2.09,P<0.05)。TCGA数据库中,BST2 mRNA在不同肿瘤分子亚型中均高表达(G-CIMP为-1.96±0.94,非G-CIMP的前神经元型为-1.74±0.88,神经元型为-0.83±0.98,经典型为-0.71±1.18,间质型为-0.55±1.01),与NTB样本(-2.32±0.21)比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);BST2 mRNA在神经元型、经典型及间质型肿瘤之间表达差异均无统计学意义(均P>0.05),但均高于G-CIMP和非G-CIMP的前神经元型(均P<0.05)。BST2非CpG岛DNA甲基化水平与其mRNA表达负相关(TCGA数据库:r=-0.30,P<0.05;GSE22891队列:r=-0.54,P<0.05;CGGA数据库:r=-0.29,P>0.05)。生存分析表明,非G-CIMP且非前神经元型患者的BST2 mRNA表达水平与OS呈负相关(HR=1.18,95%CI 1.00~1.39,P<0.05),而在G-CIMP及前神经元型的亚组中,BST2 mRNA表达与患者OS无相关性(HR=1.08,95%CI 0.84~1.40,P>0.05)。生物信息学分析表明,在TCGA数据库非G-CIMP且非前神经元型的样本中,高表达BST2的GBM样本显著富集于与免疫反应负性调控和核因子κB(NF-κB)通路激活相关的功能基因簇。结论BST2基因在GBM中表达上调,可能与非CpG岛DNA低甲基化改变有关;该基因可能成为评估非G-CIMP且非前神经元型GBM亚型临床预后的潜在生物标志物。

束缚蛋白抗HIV机制

束缚蛋白(tetherin)是一种具有特殊功能的蛋白质,它可抑制包膜病毒从感染细胞中释放。研究发现,人的束缚蛋白可将新生的HIV-1病毒颗粒固定在细胞表面,同时,它还可以减小HIV-1子代病毒的传染性。本文将主要从分子结构、抗HIV-1病毒的作用机制和在HIV传播中的作用三方面来阐述束缚蛋白抗病毒作用的最新研究进展。