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骨形态发生蛋白-2的高效表达、纯化和复性 被引量:1
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作者 杨春瑜 杨春莉 +1 位作者 刘晓飞 赫美 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第15期190-193,共4页
从含BMP-2cDNA质粒的E.coli中获得骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的目的基因,构建质粒pET28a-BMP-2并转入BL 21(DE3)E.coli中,经酶切鉴定,证明BMP-2在BL 21(DE3)E.coli中成功诱导表达。摸索高效表达条件后,对BMP-2进行纯化和复性,得到具有较... 从含BMP-2cDNA质粒的E.coli中获得骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的目的基因,构建质粒pET28a-BMP-2并转入BL 21(DE3)E.coli中,经酶切鉴定,证明BMP-2在BL 21(DE3)E.coli中成功诱导表达。摸索高效表达条件后,对BMP-2进行纯化和复性,得到具有较高生物活性的BMP-2。采用低成本方法解决骨修复材料和BMP-2缓释研究中大量价格昂贵的BMP-2需求问题。 展开更多
关键词 BMP-2 诱导表达 pET-28a(+) 纯化 复性
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miR-1322在低氧诱导动脉平滑肌细胞增殖中的作用及其机制 被引量:2
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作者 周咏梅 王斌 +5 位作者 高瞻 张明周 李瑾 魏征华 游节根 贺斌峰 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第21期1948-1955,共8页
目的研究miR-1322对低氧诱导人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary artery smooth muscle cells,HPASMCs)增殖的调控作用并探讨其机制。方法 HPASMCs在1%O2低氧中分别暴露0、6、12、24、48 h,利用RT-qPCR检测各个时间点miR-1322的表达,We... 目的研究miR-1322对低氧诱导人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary artery smooth muscle cells,HPASMCs)增殖的调控作用并探讨其机制。方法 HPASMCs在1%O2低氧中分别暴露0、6、12、24、48 h,利用RT-qPCR检测各个时间点miR-1322的表达,Western blot检测骨形成蛋白受体2(bone morphogenetic protein receptor 2,BMPR2)、p-smad1/5/9、p21的蛋白表达,CCK-8检测细胞增殖。将miR-1322抑制物(inhibitor)和阴性对照(negative control,NC)转染HPASMCs细胞24 h后再行低氧处理48 h,采用CCK-8检测12、24、48 h时细胞的增殖水平。利用双荧光素酶报告基因检测分析miR-1322是否绑定BMPR2 3’非编码区(untranslated regions,UTR)。采用Western blot检测miR-1322对BMPR2蛋白的调控作用。转染BMPR2过表达质粒24 h后,再进行低氧处理48 h,采用CCK-8检测12、24、48 h时细胞的增殖水平,Western blot检测p-smad1/5/9和p21的蛋白表达。结果 HPASMCs低氧暴露12、24 h和48 h组miR-1322的表达均显著高于0 h组(P <0. 05)。miR-1322 inhibitor组miR-1322表达显著低于NC组(P <0. 05)。miR-1322 inhibitor/低氧组在24、48 h时细胞增殖水平显著低于相同时间点的低氧组(P <0. 05)。荧光素酶报告基因结果显示BMPR2是miR-1322的靶点。上调miR-1322的表达后,BMPR2蛋白表达较NC组有显著的下降(P <0. 05);相反地,抑制miR-1322后,BMPR2蛋白的表达显著高于NC组(P <0. 05)。低氧6、12 h和24 h时,BMPR2和p21的蛋白表达较0 h组显著降低(P <0. 05),而p-smad1/5/9的蛋白表达显著升高。低氧下BMPR2过表达组p-smad1/5/9和p21的蛋白表达较空载体显著升高(P <0. 05); CCK-8检测结果显示过表达BMPR2组的细胞增殖水平显著低于空载体组(P <0. 05)。结论低氧促进miR-1322在HPASMCs中的表达;上调miR-1322通过抑制BMPR2介导p-smad1/5/9-p21通路,促进细胞的增殖。 展开更多
关键词 miR-1322 低氧 人肺动脉平滑肌细胞 骨形成蛋白受体2 细胞增殖
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体外冲击波联合仙桃草治疗骨不连对骨痂中BMP-2和VEGF mRNA表达的影响 被引量:3
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作者 赵子星 李宏宇 +2 位作者 席立成 郁少林 刘搏宇 《中国临床新医学》 2016年第6期469-472,共4页
目的探讨体外冲击波联合中草药仙桃草疗法对兔桡骨骨不连骨痂中骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法制作120只新西兰大白兔兔桡骨骨不连模型,按随机数字表方法分为A、B、C、D四组,A组为冲击波联合仙... 目的探讨体外冲击波联合中草药仙桃草疗法对兔桡骨骨不连骨痂中骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法制作120只新西兰大白兔兔桡骨骨不连模型,按随机数字表方法分为A、B、C、D四组,A组为冲击波联合仙桃草治疗组,B组为仙桃草治疗组,C组为冲击波治疗组,D组为对照组。体外冲击波治疗方法:在骨不连两断端部位冲击,冲击量为800次/min,焦点能量0.5 mj/mm^2,频率为70-80次/min。于治疗后不同时相点(48 h、1、2、4、6、12周)取材,比较各组标本BMP-2和VEGF的免疫组化表达,并作统计分析。结果 (1)各时相点骨痂中BMP-2的表达:48 h各组相比差异无统计学意义。1、2、4、6、12周各组不同时相点比较,A、C组与D组比较差异有统计学意义(P〈0.05),B组与D组比较差异无统计学意义(P〉0.05),且A组与B、C组比较差异同样有统计学意义(P〈0.05)。(2)各时相点骨痂中VEGF的表达:A、B、C组与D组比较差异均有统计学意义(P〈0.05),且A组与B、C组比较差异也有统计学意义(P〈0.05)。结论体外冲击波联合仙桃草疗法可以同时上调BMP-2、VEGF表达,从而刺激成骨,共同促进骨不连愈合。 展开更多
关键词 体外冲击波 仙桃草 骨不连 骨形态发生蛋白-2(BMP-2) 血管内皮生长因子(VEGF)
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白藜芦醇对维生素D_3和尼古丁诱导的大鼠血管钙化的抑制作用 被引量:2
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作者 刘国栋 白静 +2 位作者 李瑞生 刘秀华 王禹 《微循环学杂志》 2014年第4期16-19,25,F0002,共6页
目的:观察白藜芦醇(RES)对维生素D3和尼古丁诱导的大鼠血管钙化的抑制作用和可能机制。方法:32只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为4组,每组各8只:对照组(CON组);血管钙化组(VDN组);RES低剂量处理组[VDN+RES(L)组];RES高剂量处理组[VDN+RE... 目的:观察白藜芦醇(RES)对维生素D3和尼古丁诱导的大鼠血管钙化的抑制作用和可能机制。方法:32只雄性Sprague Dawley大鼠随机分为4组,每组各8只:对照组(CON组);血管钙化组(VDN组);RES低剂量处理组[VDN+RES(L)组];RES高剂量处理组[VDN+RES(H)组]。实验第6周末进行各组大鼠主动脉Von Kossa染色,比色法测定碱性磷酸酶(ALP)活性及钙含量,Western Blot检测成骨细胞标志性蛋白骨桥蛋白(OPN)和骨形态发生蛋白-2(BMP-2)表达,并比较各组间差异。结果:与CON组比较,VDN组大鼠主动脉Von Kossa染色显示主动脉中膜弹力纤维排列紊乱,其间广泛分布黑色银染颗粒,主动脉ALP活性、钙含量、OPN和BMP-2水平均显著升高(P<0.01);与VDN组比较,两种剂量RES干预组大鼠主动脉中膜弹力纤维紊乱程度下降、黑色银染颗粒减少,主动脉ALP活性、钙含量、OPN和BMP-2水平均明显降低(P<0.05或P<0.01),高剂量RES干预组较低剂量RES干预组降低更明显(均P<0.05)。结论:RES能够有效抑制维生素D3和尼古丁诱导的大鼠血管钙化,其机制可能与其能降低主动脉ALP活性及抑制OPN和BMP-2表达有关。 展开更多
关键词 白藜芦醇 血管钙化 碱性磷酸酶 骨桥蛋白 骨形态发生蛋白2 大鼠
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In vitro and in vivo evaluation of bone morphogenetic protein- 2 (BMP-2) immobilized collagen-coated polyetheretherketone (PEEK) 被引量:2
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作者 Ya-Wei DU Li-Nan ZHANG +5 位作者 Xin YE He-Min NIE Zeng-Tao HOU Teng-Hui ZENG Guo-Ping YAN Peng SHANG 《Frontiers of Materials Science》 SCIE CSCD 2015年第1期38-50,共13页
Polyetheretherketone (PEEK) is regarded as one of the most potential candidates of biomaterials in spinal implant applications. However, as a bioinert material, PEEK plays a limited role in osteoconduction and osseo... Polyetheretherketone (PEEK) is regarded as one of the most potential candidates of biomaterials in spinal implant applications. However, as a bioinert material, PEEK plays a limited role in osteoconduction and osseointegration. In this study, recombinant human bone morphogenetic protein-2 (rhBMP-2) was immobilized onto the surface of collagen-coated PEEK in order to prepare a multi-functional material. After adsorbed onto the PEEK surface by hydroph(bic interaction, collagen was cross-linked with N-(3-dimethylaminopropyl)-N'-ethyl carbodiimide hydrochloride (EDC) and N-hydro xysuccinimide (NHS). EDCINHS system also contributed to the immobilization of rhBMP- 2. Water contact angle tests, XPS and SEM clearly demonstrated the surface changes. ELISA tests quantified the amount of rhBMP-2 immobilized and the release over a period of 30 d. In vitro evaluation proved that the osteogenesis differentiation rate was higher when cells were cultured on modified PEEK discs than on regular ones. In vivo tests were conducted and positive changes of major parameters were presented. This report demonstrates that the rhBMP-2 immobilized method for PEEK modification increase bioactivity in vitro and in vivo, suggesting its practicability in orthopedic and spinal clinical applications. 展开更多
关键词 polyetheretherketone (PEEK) spinal implantation bone morphogeneticprotein-2 (BMP-2 collagen surface modification
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个体化钛支架复合珊瑚羟基磷灰石和重组人骨形成蛋白2修复兔下颌骨缺损 被引量:5
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作者 王忠东 陈俊兰 +5 位作者 陈觉尧 胡文 龚振宇 刘亚雄 林少珍 吴纪楠 《中华口腔医学研究杂志(电子版)》 CAS 2012年第4期19-22,共4页
目的通过观察个体化钛支架复合珊瑚羟基磷灰石(CHA)和重组人骨形成蛋白2(rhBMP-2)修复兔下颌骨缺损的实验效果,探讨下颌骨个体化修复再生的途径。方法以9只新西兰大白兔为实验对象,采用磨骨术建立兔下颌骨单侧缺损模型,利用计算机辅助设... 目的通过观察个体化钛支架复合珊瑚羟基磷灰石(CHA)和重组人骨形成蛋白2(rhBMP-2)修复兔下颌骨缺损的实验效果,探讨下颌骨个体化修复再生的途径。方法以9只新西兰大白兔为实验对象,采用磨骨术建立兔下颌骨单侧缺损模型,利用计算机辅助设计/制作、快速成型技术等设计制作兔下颌骨个体化钛修复体,再将其与CHA和rhBMP-2复合应用于兔下颌骨标准化缺损修复,通过大体标本观察、骨密度检测、生物力学测试和组织学染色对下颌骨缺损的个体化再生修复效果进行研究。结果兔下颌骨解剖形态恢复理想,生物力学测试、骨密度检测及组织学观察均显示随时间点延长成骨效果呈明显上升趋势(P<0.05),钛支架内具有大量新骨形成,新生骨组织在24周时已明显成熟。结论采用快速成型技术制作的个体化钛支架复合CHA和rhBMP-2,可望通过骨再生途径实现下颌骨缺损的个体化修复重建。 展开更多
关键词 下颌骨缺损 珊瑚羟基磷灰石 人骨形成蛋白2 个体化钛支架
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携pAd—EGFP/SDF1α和pAd—RFP/BMP2双基因微泡的制备及其特性检测 被引量:2
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作者 杨灵洁 刘丽云 穆玉明 《中华超声影像学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第11期1002-1007,共6页
目的制备携基质细胞衍生因子1(SDF-1α)和骨形态发生蛋白2(BMP2)重组腺病毒(pAd)的超声微泡,检测微泡最大载基因率并探讨双基因与微泡结合的最佳配比。方法采用“生物素-亲和素”桥接法将Targestar—SA微泡分别与共表达绿色荧光... 目的制备携基质细胞衍生因子1(SDF-1α)和骨形态发生蛋白2(BMP2)重组腺病毒(pAd)的超声微泡,检测微泡最大载基因率并探讨双基因与微泡结合的最佳配比。方法采用“生物素-亲和素”桥接法将Targestar—SA微泡分别与共表达绿色荧光蛋白(EGFP)和SDF-1α的重组腺病毒(pAd—EGFP/SDF1a)以及共表达红色荧光蛋白(RFP)和BMP2的重组腺病毒(pAd—RFPjBMP2)相结合,检测微泡最大载基因率;依据结果将两种pAd按不同配比加入微泡制备成三组携双基因微泡,并从物理特性、荧光显微镜下观察、流式细胞仪测定及载基因率等方面评价携双基因微泡。结果携基因微泡PH值、平均粒径和浓度与裸微泡差异无统计学意义(P〉0.05)。微泡载基因效率随病毒投入量增加而增大,达到饱和后继续增大病毒量导致负载率降低。双基因与做泡结合的配比为1:1时,微泡携SDF1a与BMP-2的负载率大致相当,流式散点图示双阳性荧光微泡为(65.6±0.5)%;2:1组双阳性荧光微泡为(59.0±2.3)%,显著低于其他两组(P〈0.05);荧光显微镜可见携基因微泡表面均匀分布绿色或红色荧光。结论成功制备携EGFPjsDF-1α和RFPjBMP2的双基因超声微泡,双基因与微泡结合的最佳配比为1:1,此时微泡双基因负载率均达到较大水平。 展开更多
关键词 微气泡 腺病毒载体 基质细胞衍生因子-1 骨形态发生蛋白-2
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