大鼠骨髓内皮祖细胞SPIO标记及检测

目的:研究大鼠骨髓内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCS)的分离、培养、SPIO标记,SPIO对EPCS的标记效果及其对细胞存活、增殖以及凋亡的影响,为进一步的实验研究奠定基础。方法:SD大鼠体重120～150 g,采用梯度密度离心法和贴壁法获取大鼠EPCS,采用25μg/ml SPIO对其标记,比较标记和未标记的EPCS。普鲁士蓝染色观察铁标记率,台盼蓝检测细胞活力,MTT法检测细胞增殖力,Calcein-AM/PI染色检测细胞活性及细胞膜完整性,AO/PI染色检测细胞凋亡率。结果:分离培养EPCS 7～10 d,细胞集落相互连接,呈典型的铺路石样外观。普鲁士兰染色显示SPIO(25μg/ml,24 h)对细胞的标记率接近94%;比较SPIO标记及未标记的EPCS,细胞活力分别为(94.34±0.25)%和(95.33±0.31)%;MTT法检测两组间相比差异无统计意学义(P>0.05);Calcein-AM/PI染色检测细胞的活性和膜完整性,存活率分别为96%和97%;AO/PI染色两组细胞的凋亡率均为5%。结论:采用梯度离心法从骨髓中分离单个核细胞,经诱导培养可实现内皮祖细胞的分离培养。25μg/ml浓度的SPIO细胞标记率高,对细胞毒性小,且不影响EPCS的活力、增殖及凋亡。

骨髓活检组织的免疫组织化学和核酸原位杂交研究

目的：建立既适用于常规病理检验又可进行免疫组化及核酸原位杂交研究的骨髓活组织检查方法。方法：活检标本１０例，用Ｌｏｗ ｙＦＭＡ液固定、脱钙，石蜡包埋。切片行常规染色、ＴＧＦ－β１ 和ＭＩＰ－１α免疫组化及地高辛标记ＤＮＡ探针ｍ ＲＮＡ原位杂交。结果：ＨＥ染色、鼠源性单抗和兔源性多抗的免疫组化及不同长度探针的ｍ ＲＮＡ原位杂交均取得理想的效果。结论：ＬｏｗｙＦＭＡ液固定、脱钙后石蜡包埋的骨髓活检组织不仅能满足常规病理检验需要，且适用于不同条件的免疫组化及原位杂交研究。