骨髓间充质干细胞不同时期移植对心肌梗死大鼠心功能的影响

目的:探讨心肌梗死后骨髓间充质干细胞(MSCs)移植的最佳时间.方法:结扎大鼠左冠状动脉制备心肌梗死模型,将分离培养的大鼠MSCs经尾静脉分别移植到1d,1,2,4wk移植组体内(各组n=10),对照组则注入等量培养液(n=10).4wk后测定左心功能指标和心肌缺血梗死面积.结果:心肌梗死后1d移植组左心功能和心肌缺血梗死面积与对照组无明显差别(P>0.05),而1,2,4wk移植组与1d移植组对比左心功能明显改善(P<0.05),心肌缺血梗死面积显著减小(P<0.05),其中2wk移植组效果优于1wk移植组和4wk移植组(P<0.05).结论:心肌梗死后1～2wk亚急性期进行细胞移植效果最好.

野生藜篙提取物毒理安全性研究

目的:为了判定鄱阳湖野生藜篙对人体健康是否产生危害,进行了藜篙提取物安全性毒理学评价。方法:采用急性毒性实验、Ames实验、小鼠骨髓微核实验、微小鼠精子畸形实验和30d喂养实验对藜篙提取物急性毒性、致突变性及亚慢性毒性进行了研究。结果:鄱阳湖野生藜篙提取物小鼠急性毒性实验LD50>20.0g/kg.bw,属实际无毒;对基因、体细胞及生殖细胞无明显致突作用;受试物分别按5、2.5、1.25g/kg.bw的剂量喂养大鼠30d,结果显示,动物未出现异常。结论:根据实验结果,判定鄱阳湖野生藜篙为安全性食品。

自体骨髓移植(ABMT)治疗急性白血病(附18例报告)

18例急性白血病(急非淋白血病15例、急淋白血病3例)经全身照射(TBI)及环磷酰胺(CTX)预处理后回输4℃复方氯化钠液保存56—60小时的自身骨髓。ABMT 主要采用了以下的主要措施:全环境保护、预防用抗菌素、TBI 肺部剂量6.7Gy(5.8～7.2Gy),肋骨补照4Gy、强迫性利尿及碱化尿液、静脉插管、长效维生素 B2的应用等。

静脉注射大鼠骨髓MSCs缓解新生大鼠高氧肺损伤

目的:研究大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对高氧新生大鼠肺组织血管内皮生长因子(Vascular endothelial cell growth factor,VEGF)表达的影响。方法:采用贴壁选择法分离、培养、扩增大鼠骨髓来源MSC,并以5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU)进行标记;3日龄清洁级SD新生大鼠32只,随机分为高氧组(A组)、高氧干预组(B组)、正常干预组(C组)、对照组(D组)4组;A、B二组均置大鼠于95%氧环境下7天后,B组每只动物尾静脉注射5×104的MSCs,A组每只注射磷酸盐缓冲液(PBS)50μl;而C、D二组则置于正常空气环境下,同时分别给予每只大鼠尾静脉注射含5×104MSC及PBS50μl。注射后72h(13日龄)处死全部动物,肺组织病理学检测辐射状肺泡计数(radical alveolar counts,RAC),免疫组织化学检测VEGF吸光度(A)值、BrdU表达情况。结果:仅二个注射MSC组(B、C组)可见BrdU阳性表达,高氧组RAC值及均显著低于对照组,而给予MSC均可使其明显上升,近于对照组。结论:给新生大鼠静脉注射MSC对高氧肺损伤的保护作用可能与增加肺组织VEGF表达有关。

贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性

目的建立一种简便有效的体外分离纯化及培养扩增大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的方法。研究MSCs的生物学特性,为血管组织工程提供理想的种子细胞。方法贴壁培养法分离纯化大鼠MSCs体外培养和连续传代,在倒置显微镜下连续观察细胞的形态变化;利用MTT法测定MSCs的生长曲线;行免疫组化方法鉴定MSCs膜抗原;分别加成骨、成脂肪诱导剂后MSCs体外培养1到3周,分别做碱性磷酸酶(ALP)、VonKossa染色及油红O染色,观察细胞形态变化、成骨及成脂肪分化结果。结果MSCs体外培养生长状况良好,呈均一的成纤维细胞样,表达波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),不表达层粘连蛋白(Laminin)、CD34、VIII因子相关抗原(VIII)。经体外诱导后具有多向分化潜能。结论贴壁培养法能有效分离纯化大鼠MSCs,用此方法培养的细胞生长稳定,增殖能力活跃,具有MSCs的一般生物学特性,为其成为血管组织工程理想的种子细胞提供了进一步的支持。

Beagle犬和正常成人的骨髓像比较

目的探讨Beagle犬骨髓像各个细胞系正常值的参数范围及其细胞形态学特征,并和正常成人的骨髓像进行了比较,为了给新药临床前研究中受试物作用的靶器官是造血系统的临床前药物安全评价研究实验提供诊断依据。方法对30只实验对照用Beagle犬（雌雄各半）和正常成人的骨髓涂片用瑞-姬氏混合染色液染色后进行形态学观察,油镜下,分类计数粒细胞系统,红细胞系统,淋巴细胞系统,单核细胞系统,浆细胞系统及其他细胞,总计500个有核细胞,以百分率表示。高倍镜下计数全片巨核细胞数并计算其粒红比值。用SPSS19.0进行配对比较,计算t值和P值。结果 Beagle犬正常骨髓像中骨髓细胞名称,骨髓增生变化的分级,骨髓细胞各系统、各阶段的细胞形态学的划分基本是参见人的骨髓细胞学分类标准进行,Beagle犬和正常成人在粒细胞系统,红细胞系统,巨核细胞系统等六大系统细胞存在显著性差异（P〈0.01或〈0.05）。正常情况下,Beagle犬同系同阶段的骨髓细胞胞体均比人的略小,犬粒细胞系统可见环核,核染色质比人粗糙,胞质量没有人的粒细胞胞质丰富;Beagle犬成熟淋巴细胞一般〈10%,正常成人成熟淋巴细胞20%-30%;Beagle犬骨髓像中颗粒型巨核细胞明显比人多,并常见破骨细胞。Beagle犬的粒红比可简记为2-2.2倍。人的粒红比值2-4倍。结论 Beagle犬和正常成人在骨髓有核细胞增生程度,有核细胞（粒系,红系,巨核系）,淋巴细胞,非造血细胞的数量和形态学特征等方面存在显著差异。通过犬和正常成人骨髓像的比较,给深入研究药物对造血系统的改变提供了参考数值。

骨髓间质干细胞移植治疗大鼠实验性肺动脉高压

目的探讨骨髓间质干细胞（MMSC）移植治疗肺动脉高压（PAH）的疗效和机制。方法体外分离培养SD大鼠骨髓MMSC，以Hoechst 33342荧光染料标记。80只SD大鼠随机分为PAH组（30只）、PAH＋MMSC移植组（移植组，30只）和正常对照组（对照组，20只）。采用一次性注射野百合碱50mg／kg的方法制备PAH模型。移植组于建模第22天舌下静脉注射5×10^6／ml的MMSC细胞悬液1ml，其他2组同时间注射等量细胞培养液。饲养4周，观察各组大鼠一般情况计算生存率。实验第21天每组各处死4只大鼠，实验第49天处死所有存活大鼠，测定肺动脉平均压（mPAP）、右心室肥大指数，并取肺组织做肺小动脉形态计量学指标检测、血管Ⅷ因子相关抗原免疫组织化学染色和微血管密度分析。结果实验结束时PAH组和移植组大鼠生存率分别为50％（15／30）和90％（27／30，P〈0．01）。第21天PAH组和移植组mPAP分别为（39．1±2．5）和（38．5±2．1）mmHg（1mmHg=0．133kPa）；右心室肥大指数分别为（34．0±3．1）％和（33．8±2．6）％，均明显高于对照组[（15．2±1．7）mtnHg，（22．7±1．5）％，均P〈0．01）]。第49天，PAH组和移植组mPAP分别为（42．7±2．3）和（24．7±2．1）mmHg，右心室肥大指数分别为（45．1±3．4）％和（38．8±3．2）％，移植组均明显低于PAH组（均P〈0．01）；与PAH组比较，移植组肺小动脉形态计量学指标明显改善。荧光显微镜观察显示荧光标记MMSC在肺内定植且分化成大量新生血管并形成侧支循环，肺动脉重构得到有效逆转。免疫组组织化学染色观察证实移植组大鼠肺组织中有大量新生血管形成，微血管密度明显高于PAH组[（5．2±0．8）比（1．4±0．5）个／高倍视野，P〈0．01]。结论MMSC移植可通过分化形成新生血管和修复损伤肺小动脉，逆转肺血管重构，降低肺动脉压，有效减轻甚至是逆转野百合碱诱导的PAH进程。