温州盘菜地方品种鉴定与指纹图谱的分子标记分析

利用基因组DNA的RAPD、ISSR与SRAP等3种分子标记技术,以日本芜菁品种作为外类群,对来自于温州不同地区具有代表性的10个盘菜品种进行品种鉴定与遗传多样性分析。10个RAPD引物共产生多态性条带70条,多态率为71.7%;12个ISSR引物共产生142条清晰带,其中多态性条带70条,多态率为49.3%;8个SRAP引物组合共产生105条谱带,其中多态性谱带78条,多态性比率为74.3%,表明品种间存在较高的多态性。用单个引物NAURP299、NAUISR43以及SRAP引物组合me1/em2,都可以将11个品种完全区分开来。基于3种标记的聚类分析结果表明,11个材料可以分为3大类,一定程度上能够揭示品种之间园艺学性状的相似性及亲缘关系远近。

温州盘菜离体培养植株再生体系的建立

以温州盘菜子叶-子叶柄为外植体,研究不同激素配比、AgNO3浓度、琼脂浓度和苗龄对不定芽再生的影响。结果表明：0.8-1.0 mg/L NAA效果较好,2,4-D浓度大于0.2 mg/L就会抑制不定芽再生,AgNO3浓度以6.0 mg/L最佳,苗龄以5 d为宜,提高琼脂浓度对盘菜不定芽再生有抑制作用。最佳激素配比6-BA 3.0 mg/L＋NAA 1.0 mg/L＋AgNO36.0 mg/L,不定芽再生率可达68.3%。

津田芜菁BrEGL3 cDNA的克隆及表达分析

EGL3(Enhancer of Glabra3)蛋白是一种bHLH类蛋白,是一类重要的转录调节因子。为阐释BrEGL3在‘津田’芜菁(Brassica campestris L.ssp.rapifera‘Tsuda’)花青素生物合成中的调控作用,根据拟南芥EGL3基因序列信息设计兼并引物,克隆获得了'津田'芜菁EGL3基因的全长cDNA序列,命名为BrEGL3,其GenBank登录号为HM208589。序列分析结果显示,BrEGL3全长1794bp,包含编码597个氨基酸的开放阅读框,分子量约为66.8kD。氨基酸结构分析显示该蛋白含有DNA结合域,该结合属于螺旋-环-螺旋家族。氨基酸对比分析表明,BrEGL3与萝卜EGL3蛋白相似性最高,其次为拟南芥中的EGL3。荧光定量PCR检测BrEGL3在芜菁不同组织中的表达结果表明,该基因在有花青素合成的红色芜菁根皮中表达量最高。

芜菁NAC转录因子BcNAC2基因的分离及其表达

根据拟南芥NAC2的全长序列设计引物,从芜菁中成功分离了NAC转录因子BcNAC2基因,该基因最大开放阅读框为1683bp,编码560个氨基酸,共包含6个外显子和5个内含子。将BcNAC2与其他30个NACs蛋白进行序列比对以及重构系统进化树分析发现,BcNAC2与十字花科的拟南芥的同源性最高,芜菁BcNAC2与拟南芥NAC2蛋白功能结构域内的特征序列有显著的差异。半定量RT-PCR的结果表明,BcNAC2呈部分组成型表达特征,在授粉8d的嫩角果中表达丰度最高,而且组织原位杂交结果显示,BcNAC2在胚囊中有较高的表达,由此推测,BcNAC2与芜菁的种子或胚的发育相关。