从油菜(Brassicanapus L.cv.Topas)裂外壁小孢子培育出胚状体与小植株

油菜 (Brassica napus L.cv.Topas)小孢子经高温 (32℃ )预培养导致外壁开裂 ,形成裂外壁小孢子。微室饲养培养技术结合定位追踪观察证实裂外壁小孢子具有胚胎发生能力。 33.3%的裂外壁小孢子能启动细胞分裂 ,其中13.3%的裂外壁小孢子能持续分裂 ,并遵循胚胎发生途径。与完整小孢子不同 ,第一次分裂既有均等分裂 ,亦有不均等分裂 ,两者均能导致胚胎发生。将已分化的胚状体转移至固体培养基上 ,可经二次胚胎发生或直接再生小植株。

甘蓝型油菜‘沪油15'中两个CBF类转录因子的克隆与分析

以拟南芥CBF家族转录因子AP2保守域的氨基酸序列为信息探针,搜索油菜UniGene数据库,得到2个UniGene:Bna. 2193和Bna.2260,序列拼接得到2个cDNA序列(BnaCBF-1和BnaCBF-2)。通过PCR和RT-PCR方法分别从甘蓝型油菜‘沪油15'的DNA和cDNA中克隆了上述基因。序列分析显示,克隆的BnaCBF-1-Hy15与BnaCBF-1基因序列完全一样,而BnaCBF-2-Hy15与BnaCBF-2的基因序列差异很小,只有4个氨基酸位点不同,且都没有内含子。从cDNA序列、氨基酸序列的相似性、组成成分、理化性质、疏水性/亲水性、序列比对、进化树、功能域、二级结构、三级结构进行了预测。结果显示,‘沪油15'来源的BnaCBF-1-Hy15和BnaCBF-2-Hy15转录因子属于AP2/ERF家族中的DREB-A1亚族,是亲水性蛋白,在蛋白质的三级结构上与atCBF1相似。

βGlcY影响油菜小孢子胚胎发生起始分裂

以油菜小孢子为材料,研究不同浓度的βGlcY对小孢子胚胎发生起始分裂的影响,结果表明,βGlcY对油菜小孢子胚胎发育起始细胞分裂的抑制作用是浓度依赖的行为.βGlcY浓度为50μmol/L时,小孢子的分裂完全受到抑制.细胞学研究发现,βGlcY与AGPs结合后影响了小孢子的活性,推测βGlcY可能诱导了小孢子的程序化死亡.