应用BrdU-ELISA法检测化学物皮肤致敏性研究

目的研究应用BrdU-ELISA法检测化学物皮肤致敏性。方法将受试物2,4-二硝基氯苯(DNCB)、三氯乙烯(TCE)、三氯乙酸、抗菌冻胶对小鼠双耳背皮肤进行涂抹,25μl/耳,连续染毒3 d,第4天每只小鼠腹腔注射BrdU标记液(0.3ml/只)。第5天取小鼠耳部淋巴结称重,然后制成单细胞悬液,应用BrdU-ELISA法检测淋巴细胞增殖。同时应用豚鼠局部封闭涂皮法检测受试物的致敏性。结果DNCB、TCE各浓度组与AOO溶剂对照组BrdU标记值比较,差异均存在统计学意义(P<0.01),DNCB各浓度组与AOO溶剂对照组淋巴结重量比较,差异均存在统计学意义(P<0.01),而TCE各浓度组与AOO溶剂对照组淋巴结重量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。抗菌凝胶组与三氯乙酸分别与空白对照组比较,其中抗菌凝胶组、1%、5%三氯乙酸BrdU标记值差异均无统计学意义,10%三氯乙酸差异则存在统计学意义(P<0.05)。结论BrdU-ELISA法具有检测化学物皮肤致敏性的能力,但其灵敏性比标准LLNA和传统豚鼠局部封闭涂皮法差,需要进一步优化实验方法。

人肝癌细胞培养中CCK-8法与BrdU-ELISA法检测细胞增殖的比较

目的比较CCK-8法与BrdU-ELISA法检测人肝癌HepG2细胞增殖的可靠性。方法待细胞贴壁生长融合度分别达60%及80%时,以10-7mol/L浓度AngⅡ刺激细胞增殖,24小时后分别用CCK-8法和BrdU-ELISA法,以及免疫荧光方法检测细胞增殖情况。结果细胞60%汇合时CCK-8检测组和BrdU-ELISA检测组与各自的对照组比较,比值分别为1.30和1.59,检测值近似;细胞80%汇合时二者分别为1.02和1.40,免疫荧光结果显示AngⅡ刺激组的增殖细胞明显高于对照组。结论与CCK-8法相比,BrdU-ELISA更能客观地反映细胞增殖情况。

LLNA:BrdU-ELISA法与LLNA:DA法检测15种染发剂致敏性的对比研究

目的对比小鼠局部淋巴结法(local lymph node assay,LLNA)的5-溴脱氧尿嘧啶核苷-酶联免疫吸附(LLNA:BrdUELISA)和LLNA:ATP检测法(LLNA:Daicel,LLNA:DA)检测染发剂致敏性的能力。方法以2,4二硝基氯苯为阳性对照,按照OECD442(A)和OECD442(B)标准方法,对市售15种品牌染发剂进行致敏性检测。结果 15个受试物经LLNA:BrdU-ELISA检测,有3个受试物具有致敏性,经LLNA:DA法检测均具有致敏性。结论 LLNA:DA法检测染发剂致敏性的灵敏度明显高于LLNA:BrdU-ELISA法,值得深入探讨研究。

局部淋巴结试验(LLNA:BrdU-ELISA)对14种化学物刺激和致敏性的评价

目的探讨BALB/c小鼠局部淋巴结试验LLNA:BrdU-ELISA改良法在化学物/化妆品皮肤刺激性和致敏性评价中的应用。方法采用BALB/c小鼠LLNA:BrdU-ELISA改良法,对14种化学物进行评价,并将结果与国际权威机构ICCVAM结果对照分析。结果阳性对照组(25%已基肉桂醛)的耳廓重和溶剂对照组相比增加不超过25%,刺激指数SI>1.6,试验成立;刺激性试验结果显示:1%DNCB剂量组和50%已基肉桂醛组相对于溶剂对照组耳重增加超过25%,其余化学物各剂量组耳重相对于溶剂对照增加未超过25%。致敏性评估结果显示:已基肉桂醛(10%,25%,50%),2,4-二硝基氯苯(0.1、0.3和1.0%),丁子香酚(10%、25%和50%),3-氨基苯酚(1%、3%和10%),异丁香酚(5%、10%和25%),甲醛(2.7%、8.1%和27%),戊二醛(0.2%、0.6%和2.0%),二氯化钴(1%、3%和5%),硫酸镍(1%、3%和10%),重铬酸钾(0.1%、0.3%和1,0%),反式肉桂醛(1%、3%和10%)11种化学物为致敏阳性,异丙醇、间苯二甲酸二甲酯、水杨酸甲酯为致敏阴性。致敏性预测准确率为100%(14/14),阳性致敏物预测率为100%(11/11),阴性致敏物预测率为100%(3/3),致敏分级准确率为86%(12/14)。结论BALB/c小鼠LLNA:BrdU-ELISA改良法可较好地评估化学物的致敏性,用于未来化学物致敏性检测。

血管平滑肌细胞增殖及其代谢活性的测定

本文首先报道培养的新西兰大白兔的血管平滑肌细胞(SMC)能对WST-1进行还原代谢,并联合应用WST-1和BrdU ELISA测定同一标本的SMC的增殖及其代谢活性。结果表明:随着胎牛血清浓度的增加,SMC活细胞数目、WST-1和BrdU的OD值逐渐增多。说明WST-1和同一标本的WST-1和BrdU ELISA联合测定方法是检测SMC增殖的指标,能客观地反映SMC的DNA合成和代谢活性。

两种方法测定羊外周血淋巴细胞增殖的研究

本试验比较3H胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法和BrdU-ELISA方法测定羊外周血淋巴细胞增殖.分离健康羊外周血淋巴细胞,与不同浓度的非特异刺激因子刀豆素A(concanavalinA,1.0,0.5,0.25,0.125,0.0625,0.0313,0.0156,0.0078,0.0039 μg/孔)培养,分别用3H胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)和5-溴-2′-脱氧尿苷(BrdU)标记细胞,测定刺激细胞和对照细胞的每分钟脉冲数cpm或光吸收值OD,计算刺激指数SI和光吸收值差ΔOD,统计学方法分析SI和ΔOD的相关程度.同样的方法测定羊试验感染肝片吸虫(Fasciola hepatica)后,在感染早期阶段(PIW0-PIW4)其外周血淋巴细胞在特异性抗原-片形吸虫分泌排泄产物(ESP,5 μg/孔)刺激下的增殖.结果表明,刺激指数SI和光吸收值差ΔOD在两个试验中的相关系数分别为0.946和0.924,SI和*OD均呈强正线性相关.BrdU-ELISA方法无同位素放射物,且敏感、快速、方便,和3H-TdR渗入法一样可以用于测定淋巴细胞增殖.

两种细胞活性检测实验对羊胎盘免疫调节因子活性的评价

运用两种不同细胞活性检测实验评价羊胎盘免疫调节因子(Goat placenta immune-regulatingfactor,GPIF)活性效果,发现E玫瑰花环实验和5-溴-2’脱氧尿苷掺入酶联免疫吸附实验—BrdU-ELISA均能反映GPIF、阳性药物PHA活性效果,两种评价方法评价结果具有相关性,但传统的E玫瑰花环实验具有灵敏度低、重现性差、影响因素复杂、实验环节多、周期长的缺点,BrdU-ELISA实验则与此相反具有灵敏、易操作、重现性好的特点;实验室研制的GPIF具有增强T细胞活性作用,可能是一种免疫调节剂。鉴于两种实验评价GPIF活性效果的对比分析,推荐对具有细胞免疫调节活性作用的药物活性检测采用BrdU-ELISA法。

血清浓度对TGF-β1刺激成纤维细胞增殖的影响

目的比较低血清浓度(0.4%)和正常血清浓度(10%)培养条件对TGF-β1刺激成纤维细胞增殖的影响。方法原代大鼠皮肤成纤维细胞分别采用0.4%和10%血清浓度培养,加TGF-β1刺激细胞后,分别用BrdU ELISA法检测细胞增殖情况,噻唑蓝(MTT)比色法制作细胞生长曲线。结果0.4%和10%血清浓度下,250pg/ml TGF-β1均促进成纤维细胞增殖(P<0.01),并促使生长曲线的峰值提前和增加。而25ng/ml TGF-β1均抑制成纤维细胞增殖(P<0.05),并导致生长曲线峰值的滞后和降低。结论血清浓度对大小剂量TGF-β1刺激成纤维细胞增殖变化无明显影响。