酶法合成抗癌新药氟铁龙前体——5-FUR

筛选得到一株核苷磷酸化酶活力高的乙酰短杆菌 ,以该菌体为酶源酶法合成抗癌新药氟铁龙前体 5-氟尿苷 ,所用反应物为鸟苷和 5-氟尿嘧啶。在 1 50 m L的摇瓶装液 1 5m L的条件下进行研究 ,结果显示 :菌体添加量 2 0～ 30 g/L,底物浓度 1 0 0 mmol/L,磷酸盐浓度 50 mmol/L( p H8.0 ) ,60°C,摇床转速 1 60 r/min,反应 4h,5-氟尿苷的转化率可以达到 60

核苷磷酸化酶的产酶条件优化的研究

以鸟苷和 5 氟尿嘧啶为底物 ,乙酰短杆菌菌体为酶源酶法合成 5 氟尿苷。采用酵母浸膏培养基(酵母浸膏 4.0 % ,葡萄糖 0 .4% ,NaCl 0 .3 % ,pH7.0 ) ,较高的溶氧量 ,同时添加 0 .6 %的豆油 ,培养 12h ,产酶量可提高 30 %。

乙酰短杆菌酶法合成5-甲基尿苷

用乙酰短杆菌完整细胞为酶源，以鸟苷和胸腺嘧啶为底物，酶法合成５－甲基尿苷。最佳反应条件为：底物浓度１００～２００ｍｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ８．０，磷酸盐缓冲液浓度１０～５０ｍｍｏｌ／Ｌ，６０°Ｃ，摇床转速１２０ｒ／ｍｉｎ，反应１ｈ即达到平衡，５－甲基尿苷转化率达６０％以上。

应用乙酰短杆菌酶法合成2’-脱氧腺苷

胸苷和腺嘌呤在乙酰短杆菌作用下转化成胸腺嘧啶和目标产物2’-脱氧腺苷。50mL的三角瓶装液10mL,40mmol/L的底物,50mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH7)进行反应,5%游离乙酰短杆菌在55℃下,经1h转化率就可达到65.6%。

抗真菌药萘替芬的合成

抗真菌药萘替芬的合成ＳＹＮＴＨＥＳＩＳＯＦＡＮＴＩＭＹＣＯＴＩＣＡＧＥＮＴＮＡＦＴＩＦＩＮＥ左淑芳＊杨凤艳（河北省药物研究所，石家庄０５００６１）ＺＵＯＳｈｕ－Ｆａｎｇ＊，ＹＡＮＧＦｅｎｇ－Ｙａｎ（ＨｅｂｅｉＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＩｎｓｔｉｔｕ...

乙酰短杆菌酶法合成2′-脱氧鸟苷

胸苷和鸟苷酸在乙酰短杆菌的核苷磷酸化酶和磷酸单酯酶作用下转化成鸟嘌呤、胸腺嘧啶、鸟苷和产物2′-脱氧鸟苷。通过考察菌体量、反应温度、反应pH值、底物浓度和磷酸盐浓度等参数,得到反应最适条件为20 mmol/L的胸苷和鸟苷酸,30 mmol/L的磷酸盐缓冲液(pH7.0),5%游离乙酰短杆菌在60℃下进行反应,经6 h胸苷转化率就可达到最高为56.4%。反应液通过离子交换的方法进行分离,可以得到纯度90.2%的2′-脱氧鸟苷。

乙酰短杆菌中核苷磷酸化酶的性质研究

以乙酰短杆菌完整细胞为酶源,研究不同条件下核苷磷酸化酶的性质。方法:将乙酰短杆菌湿菌体置于不同保藏温度及在不同种类缓冲溶液中考察其稳定性;在有或无核保护下核苷磷酸化酶对热的稳定性;并设计核苷的磷酸解反应或合成反应,测定核苷磷酸化酶的活力及酶促反应的表观米氏常数。结果:乙酰短杆菌中的核苷磷酸化酶经低温保藏可以保持较长时间的稳定性;菌体在60℃处理1小时即失去核苷磷酸化酶的活力,但是添加胸腺嘧啶有明显的保护作用;菌体中核苷磷酸化酶的合成能力明显大于磷酸解能力;对尿苷和5-甲基尿苷的表观米氏常数和最大反应速率分别为16.7、11.4 mmol/L,0.0063、0.0041 mmol/L.min。结论:含核苷磷酸化酶的乙酰短杆菌完整细胞作为酶源,在低温下可以长时间保藏,反应中的碱基对核苷磷酸化酶的抗热性有益,该菌种可以作为工业上核苷磷酸化酶的来源。