破壁灵芝孢子粉中多种重金属元素及硒含量检测方法探讨

采用微波消解进行前处理,三重四极杆-电感耦合等离子体质谱法测定破壁灵芝孢子粉中镉、铬、镍、砷、铅、汞及硒元素含量,对方法条件进行优化和讨论,并对20批次破壁灵芝孢子粉进行测定。结果表明,镉、铬、镍、砷、铅和汞元素在氦气碰撞模式,硒元素在氧气反应模式下,采用内标校正定量,可达到良好的测定效果。在优化的条件下,各元素线性关系良好,检出限均可达μg·kg^(-1)级别;镉、铬、镍、砷、铅及硒元素的加标回收率在90.3%~105.0%,汞的加标回收率在82.1%~92.5%;方法精密度在5%以内。此方法前处理操作简便,检测灵敏度高,稳定性好,给灵芝孢子粉多元素测定提供了良好的技术支撑。

灵芝破壁孢子粉中粗多糖含量测定的不确定度评估及控制

为明确用于食用菌粗多糖含量测定的苯酚-硫酸分光光度法中对结果可靠性的影响因素,根据标准NY∕T 1676—2008中的方法对一个灵芝破壁孢子粉样品的粗多糖进行测定,分析该方法在测定过程中的不确定度来源,计算各分量的不确定度和合成不确定度,并对各分量不确定度对合成不确定度的贡献大小进行排名。结果表明:灵芝破壁孢子粉样品的粗多糖含量为2.71%±0.09%(k=2),影响不确定度的主要来源是标准品溶液配制和稀释、标准曲线拟合、样品重复性。增加标准工作溶液的配制量可有效降低苯酚-硫酸分光光度法的不确定度,并能提高其可靠性。

响应面法提取优化破壁灵芝孢子粉多糖及其分级醇沉组分的抗氧化活性研究

目的:对破壁灵芝孢子粉多糖(BGP)的最佳提取工艺、各分级醇沉多糖组分的抗氧化性进行探究。方法:以破壁灵芝孢子粉为原料,采用内部沸腾法探究提取温度、提取时间、料液比对BGP得率的影响;利用响应面法分析优化BGP的提取参数。用不同浓度的乙醇醇沉多糖,通过测定其DPPH自由基以及羟自由基的清除力,测定其抗氧化性。结果:根据回归模型分析预测结果,最佳提取工艺参数为提取温度83℃、提取时间7 min、料液比1:21。在此条件下BGP的得率为9.10%。以不同浓度的乙醇分级醇沉BGP,得到5种醇沉BGP组分。乙醇浓度为90%时,所得BGP的得率最高。抗氧化实验表明各醇沉BGP都具有一定的抗氧化活性。90%-BGP的抗氧化性稍强于其他醇沉多糖,并且随着多糖浓度的增加,各醇沉多糖的抗氧化性均有一定的增加的趋势。结论:利用最佳提取参数提取,不同乙醇浓度醇沉的BGP均具有一定的抗氧化活性。

响应面法优化破壁灵芝孢子粉中甘油三油酸酯提取工艺

目的:优化破壁灵芝孢子粉中甘油三油酸酯的提取工艺。方法:利用超声波法提取破壁灵芝孢子粉中甘油三油酸酯,以甘油三油酸酯提取率为响应值,在提取条件单因素试验的基础上,根据响应面Box-Behnken试验设计,优化壁灵芝孢子粉的提取工艺。结果:破壁灵芝孢子粉中甘油三油酸酯最佳提取参数为料液比0.1:25(g·mL-1),超声功率560W,超声时间30min。在此最优提取条件下,破壁灵芝孢子粉中甘油三油酸酯提取率为5.01%。结论:本方法利用超声波提取法可以有效提取破壁灵芝孢子粉中的甘油三油酸酯。

化学视角下破壁灵芝孢子粉工艺研究

为了研究破壁灵芝孢子粉生产的关键技术,建立灵芝孢子粉制备破壁灵芝孢子粉胶囊生产工艺,测定了其20项指标,并依据国标和中国药典对试样进行了风险评估。结果表明:精深加工后的灵芝孢子粉呈棕褐色,有细微清淡的独特香味,孢子粉比较分散疏松,无颗粒感,无结块。按照指标要求中的国标方法检测发现破壁灵芝孢子粉胶囊中的水分为3.72%<8.0%、总灰分为0.89%<3.0%、过氧化值未检出、菌落总数为2.1×10^(3) CFU/g<10000、大肠菌群为0.3 MPN/g<0.92 MPN/g、霉菌和酵母为5 CFU/g<20 CFU/g、沙门氏菌未检出、金黄色葡萄球菌未检出、As为0.6 mg/kg<1.0 mg/kg、Ni为0.11 mg/kg<1.0 mg/kg、Pb为0.154 mg/kg<2.0 mg/kg、Cd为0.034 mg/kg<0.5 mg/kg、Cr未检出、Hg为0.036 mg/kg<0.1 mg/kg,说明中药饮片破壁灵芝孢子粉胶囊理化指标符合国家标准。

灵芝孢子粉破壁技术、质量分析与深加工相关研究进展

破壁灵芝孢子粉为一种灵芝深加工产品,具有多种药理学活性,更易被人体吸收。灵芝孢子的破壁方法包括生物化学法、物理法和机械法等,工业生产多综合利用多种方法。破壁灵芝孢子粉的质量分析还没有统一的国家标准,灵芝孢子粉质量可以参考地方标准进行综合评价,还可以参考近期发表的一些分析方法。灵芝孢子粉提取物产品以孢子油为主,其它产品也有研发并推出市场。药理学研究表明,灵芝孢子油、灵芝孢子粉水提物和醇提物均具有抗癌活性,有良好的应用前景。

不同产地原料生产的破壁灵芝孢子粉品质比较分析

为比较不同产地原料生产的破壁灵芝孢子粉的品质差异和加工适用性,以我国四大主产地的灵芝孢子粉为研究对象,经破壁处理得到破壁灵芝孢子粉,测定了破壁灵芝孢子粉的色泽、粒径和比表面积、破壁率、松密度及堆积密度、灰分、粗多糖含量、脂肪含量、DPPH自由基清除率、-OH自由基清除率及还原能力等指标。结果表明:大别山产区、长白山产区原料生产的破壁灵芝孢子粉松密度、堆积密度较高,更适合于作为片剂、胶囊剂等产品的加工原料;大别山产区原料生产的破壁灵芝孢子粉粗多糖含量(以葡聚糖计)最高,为1.38 g/100 g,且抗氧化能力最强,其中DPPH自由基清除能力、-OH自由基清除能力、还原能力均高,分别可达72.55%、33.44%和46.4%。

破壁灵芝孢子粉的质量探讨

研究和探讨破壁灵芝孢子粉的质量标准,利用性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别和主要成分含量测定的方法,初步掌握破壁孢子粉质量特性。薄层色谱鉴别可见清晰荧光斑点,其醇溶液加入硫酸后可见棕色环。总灰分测定显示:采自岫岩灵芝孢子粉和山东一等孢子粉灰分较低,山东三等孢子粉灰分含量较高。不同来源的样品总三萜类含量各不相同,高者达2.24%,低者1.26%。综合各项检测结果,初步确定了破壁灵芝孢子粉质量评价指标,方法稳定,可操作性强。

灵芝孢子合剂的安全性毒理学及保健功能评价

灵芝孢子合剂的主要成分为原木灵芝破壁孢子粉和原木灵芝浸膏粉 ,本研究对其安全性毒理学及保健功能进行评价。结果表明 ,灵芝孢子合剂对两种性别昆明种小鼠口投LD50 均大于 10 g/kg体重 ,且无任何病变、致突变作用 ,对SD大白鼠生长发育无不良影响 ,属实际无毒物。口饲不同剂量 (3g、1g、0 .33g/kg)的孢子合剂 ,昆明种小鼠S - 180和H - 2 2瘤重均显著低于对照组 ,高剂量组抑瘤率分别为 34.8%～ 39.7%和 32 .5%～ 37.7% ;而BALB/C小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率及脾脏自然杀伤细胞活性均明显高于对照组 (P <0 .0 1,P <0 .0 5)。本研究认为灵芝孢子合剂口服安全且无毒副作用 ,具有抑制肿瘤和免疫调节作用 。

γ射线辐照结合球磨处理灵芝孢子粉破壁新工艺研究

采用γ射线辐照与球磨技术相结合处理灵芝孢子粉,期望提高其破壁率和多糖含量,以吸收剂量、球磨时间为试验因子进行双因素试验,并结合扫描电子显微镜、傅里叶红外光谱对不同处理条件下灵芝孢子的外观形态及分子结构进行表征。试验结果显示:吸收剂量大于4.892 kGy或球磨时间大于1 min时,两者均会对灵芝孢子粉破壁率和灵芝多糖含量产生显著影响,其中球磨预处理的影响程度更大;另外,辐照与球磨两种处理方式间存在交互作用,且交互作用对灵芝孢子粉的破壁率和多糖含量的影响具有显著性。试验最优工艺条件为吸收剂量15.231 kGy,结合球磨处理5 min,此时灵芝孢子粉破壁率达到97.18%,多糖含量达13.230 mg/g;灵芝孢子的完整结构几乎完全消失,破碎十分彻底。在1456 cm−1出现小尖峰,1652 cm−1处出现双峰,完全区别于未破壁孢子。

破壁灵芝孢子粉对ConA诱导免疫性肝损伤模型小鼠血清ALT、AST水平及肝组织炎症程度的影响

目的探讨破壁灵芝孢子粉对Con A诱导免疫性肝损伤模型小鼠血清谷丙氨酸转氨酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平及肝组织炎症程度的影响。方法雄性Balb/c小鼠随机分成正常组10只,模型组、低剂量破壁灵芝孢子粉组(低灵组)、高剂量破壁灵芝孢子粉组(高灵组),各12只。除正常组外,其余各组用Con A 5mg/kg尾静脉注射,隔天1次,共2周,建立免疫性肝损伤小鼠模型。正常组和模型组小鼠分别用等容量生理盐水灌胃,低灵组及高灵组小鼠分别给予破壁灵芝孢子粉1.0g/kg、2.0g/kg灌胃。4周后检测各组小鼠血清ALT、AST水平及观察肝组织炎症程度。结果低灵组、高灵组小鼠血清ALT、AST水平明显低于模型组[ALT:(129.62±44.65)U/L、(92.76±33.78)U/L比(201.78±62.47)U/L,P<0.05;AST:(134.38±42.67)U/L、(101.76±34.56)U/L比(223.63±77.31)U/L,P<0.05];高灵组小鼠血清ALT、AST水平及肝组织炎症程度明显低于低灵组(P<0.05);低灵组及高灵组小鼠肝细胞变性、坏死及炎症细胞浸润程度比模型组明显减轻(P<0.05);结论破壁灵芝孢子粉能改善Con A诱导免疫性肝损伤模型小鼠血清ALT、AST水平及肝组织炎症程度。

化疗联合中药对人乳腺癌裸鼠移植瘤生长及TMSG-1表达的影响

目的探讨磷酰胺(CTX)与破壁灵芝孢子粉联合用药、CTX与健脾益肾颗粒联合用药对人乳腺癌裸鼠移植瘤生长及TMSC-1蛋白表达的影响,为转移性乳腺癌的分子诊断和临床用药治疗提供实验理论依据。方法将乳腺癌细胞株MCF-7注入裸鼠体内,建立移植瘤模型。将24只移植瘤接种成功的裸鼠分为CTX模型组、CTX与破壁灵芝孢子粉联合用药组、CTX与健脾益肾颗粒联合用药组和生理盐水对照组,每组6只。观察各组裸鼠的一般情况、体重及移植瘤体积、重量,用免疫组化检测各组移植瘤细胞TMSG-1蛋白的表达水平,用流式细胞仪检测各组移植瘤癌细胞凋亡情况。结果 CTX与破壁灵芝孢子粉联合用药组、CTX与健脾益肾颗粒联合用药组能有效抑制裸鼠皮下移植瘤体积及重量,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);CTX与破壁灵芝孢子粉联合用药组、CTX与健脾益肾颗粒联合用药组的抑瘤率高于模型组(P<0.01);CTX与破壁灵芝孢子粉联合用药组、CTX与健脾益肾颗粒联合用药组移植瘤的TMSG-1蛋白表达明显高于对照组和模型组(P<0.05);流式细胞仪定量分析显示模型组、CTX与破壁灵芝孢子粉联合用药组、CTX与健脾益肾颗粒联合用药组的细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.05)。结论破壁灵芝孢子粉与CTX联合用药、CTX与健脾益肾颗粒联合用药对人乳腺癌裸鼠移植瘤生长有显著抑制增殖和促凋亡作用,同时还可以上调TMSG-1蛋白的表达起到抗肿瘤转移作用。

富硒酵母破壁灵芝孢子粉的功能及安全性研究

目的:通过免疫动物试验和动物毒理试验来评价富硒酵母破壁灵芝孢子粉的功能性和安全性。方法:功能试验中,将小鼠分为4个免疫大组,每免疫大组小鼠分为对照组及3个试验组(孢子粉剂量分别为0.42 g/kg.BW、0.83 g/kg.BW、2.50 g/kg.BW),免疫一组(雌)用于迟发型变态反应(DTH)实验、血清溶血素的测定、抗体生成细胞数的测定;免疫二组(雌)用于小鼠碳廓清实验;免疫三组(雄)用于小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验;免疫四组(雄)用于小鼠淋巴细胞转化实验和小鼠自然杀伤细胞(NK细胞)活性测定。结果:经口给予小鼠不同剂量的受试物30 d,对小鼠体重增长无不良影响,对小鼠脾脏体重比值和胸腺体重比值无影响,小鼠的体液免疫功能、细胞免疫功能测定结果均为阳性,单核-巨噬细胞吞噬功能、NK细胞活性测定结果为阴性。结果表明,受试物具有增强免疫力的作用。毒理试验中,通过急性毒性试验和大鼠30 d喂养试验,证明本品是安全无毒的。结论:由富硒酵母破壁灵芝孢子粉二者原料组方,制得的复方制剂产品能增强机体免疫力,且具有安全性。

破壁与去壁灵芝孢子粉的化学成分与抗氧化活性比较

本研究以去壁灵芝孢子粉与破壁灵芝孢子粉为原料,探究不同孢子壁加工工艺对灵芝孢子粉化学成分及抗氧化活性的影响。实验对比了两种灵芝孢子粉的水分、灰分、膳食纤维、蛋白质、总三萜、总多糖、微量元素、氨基酸等主要指标及其体外抗氧化活性。结果表明,去壁灵芝孢子粉在灰分、水溶性膳食纤维、蛋白质、总多糖、总三萜和水解氨基酸的含量分别是2.227%、8.810%、15.922%、12.129%、2.556%、6.744%,均高于破壁灵芝孢子粉,其中总多糖含量较破壁提高了近12倍。三萜的色谱图显示,去壁孢子粉中含有更丰富的萜类物质。对比两种孢子粉醇提相与水提相的抗氧化活性,去壁灵芝孢子粉醇提相显示出最强的抗氧化活性,在2 mg/mL的浓度下,总还原力和DPPH自由基清除率分别为1.114和89.860%;在0.5 mg/mL的浓度下,其ABTS^+自由基清除率为99.714%,与同浓度下V_C阳性对照组结果相当;在10 mg/mL浓度时,羟基自由基清除率达到84.301%。因此,去壁技术提高了灵芝孢子粉中关键物质含量,增强了其抗氧化能力。

两类破壁灵芝孢子粉三萜的提取工艺优化及其含量测定

[目的]优化CO2超临界萃取孢子油后的破壁灵芝孢子粉残渣和破壁灵芝孢子粉中三萜类成分提取工艺以及CO2超临界萃取孢子油前后三萜类成分的含量差异。[方法]通过设计正交试验,采用紫外-可见分光光度法测量提取液的吸光度,计算提取率,根据正交数据分析,确定最佳提取方案以及含量差异。[结果]对于CO2超临界萃取灵芝孢子油后的破壁灵芝孢子粉来说,最佳提取工艺为以无水乙醇作为提取溶剂,料液比为1∶30(g∶mL),提取时间为2 h,提取温度为70℃,提取次数为4次时提取率最高;对于破壁灵芝孢子粉来说,最佳提取工艺为以无水乙醇为提取溶剂,料液比为1∶20,提取时间为1.5 h,提取温度为50℃,提取次数2次时提取率最高;且二者三萜类成分含量存在于有明显差异。[结论]该研究为进一步分析破壁灵芝孢子粉在CO2超临界萃取孢子油前后三萜类成分含量差异提供理论依据和参考。

HPLC-ELSD法分析破壁灵芝孢子粉的多糖组成

目的建立HPLC-ELSD法对破壁灵芝孢子粉中多糖的单糖组成进行分析。方法采用Shodex Asahipak NH2P-50 4E色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）;流动相为乙腈-水（83∶17）;体积流量1.0 m L/min;进样量10μL;柱温30℃;ELSD检测条件为漂移管温度85℃,载气体积流量2.0 m L/min。结果岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、果糖、氨基半乳糖、氨基葡萄糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖的进样量对数与峰面积对数在一定范围内均呈现出较好的线性关系,回收率均在87.5%~97.4%之间,而且RSD（n=6）均小于2%。结论该方法准确可靠,分离效果好,可用于破壁灵芝孢子粉多糖的单糖组成分析。

灵芝孢子粉破壁前后质量对比研究

旨在探究灵芝孢子粉破壁前后水分、总灰分、浸出物、多糖及总三萜含量的变化,为市售灵芝孢子粉产品的质量评价及临床应用提供理论依据。参照2015版《中国药典》四部通则方法分别测定灵芝孢子粉的水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物及重金属含量等;采用显微和薄层色谱法对灵芝孢子粉进行性状鉴别;采用紫外-分光光度法对灵芝孢子粉中粗多糖、总三萜含量进行测定。结果显示,在显微镜下,未破壁灵芝孢子粉呈完整卵形,破壁孢子粉呈不规则碎片;10批破壁与未破壁孢子粉水分平均含量分别为8.16%、10.77%;总灰分平均含量分别为0.87%、0.64%;酸不溶性灰分平均含量分别为0.31%、0.16%;浸出物平均含量分别为5.86%、7.48%;多糖平均含量分别为1.54%、0.99%;总三萜平均含量分别为4.22%、2.32%。说明灵芝孢子粉破壁前后化学成分含量有差异,破壁孢子粉主要成分多糖与总三萜含量均高于未破壁孢子粉,因此认为破壁的灵芝孢子粉质量优于未破壁的灵芝孢子粉。

破壁灵芝孢子粉联合他莫昔芬对人乳腺癌MCF-7细胞皮下移植瘤生长增殖的影响

目的观察破壁灵芝孢子粉联合他莫昔芬对人乳腺癌MCF-7细胞皮下移植瘤生长增殖的影响。方法建立人乳腺癌MCF-7细胞裸鼠移植模型,把44只成瘤裸鼠随机分成4组,分别为生理盐水组(对照组)、破壁灵芝孢子粉组、他莫昔芬组和联合组(破壁灵芝孢子粉+他莫昔芬)。用药21d,记录用药后第3、6、10、13、17、21d瘤体体积并计算其抑制率。将瘤体剥离后,分别进行HE染色对比分析及ER-α、ER-β、P53及Ki-67四种免疫组化分析。结果与对照组相比,破壁灵芝孢子粉组、他莫昔芬组及联合组的移植瘤重量体积均显著减少(P<0.05),他莫昔芬组、破壁灵芝孢子粉组及联合组的抑瘤率分别为57.3%、56.4%及69.3%。从免疫组化分析来看,P53蛋白表达在联合组下调明显,低于其他三组,且具有统计学差异(P<0.05),而ER-α、ER-β及Ki-67三种免疫组化指标表达率在对照组、破壁灵芝孢子粉组、他莫昔芬组及联合组内的差异不大,无统计学差异(P>0.05)。结论破壁灵芝孢子粉联合他莫昔芬能够抑制肿瘤细胞增长及繁殖的作用,并显著降低肿瘤P53的表达达到潜在的抗肿瘤转移作用。

新媒体时代灵芝破壁孢子粉广告传播与视觉设计

在新媒体时代背景下,对灵芝破壁孢子粉广告传播的视觉设计进行了研究,详细讨论了广告传播中的文字视觉设计、色彩视觉设计和图形视觉设计。新媒体时代的广告传播和视觉设计,对促进灵芝孢子粉的品牌传播和品牌形象推广、提升广告的视觉效果具有重要的作用和意义。

酵母β-葡聚糖破壁灵芝孢子粉胶囊对小鼠免疫功能的影响

目的 探讨酵母β-葡聚糖破壁灵芝孢子粉胶囊在小鼠免疫方面的作用。方法 通过经口灌胃小鼠酵母β-葡聚糖破壁灵芝孢子粉胶囊,以小鼠体重、脏器/体重比值、细胞免疫、体液免疫、非特异性免疫功能指标综合评价酵母β-葡聚糖破壁灵芝孢子粉胶囊对小鼠免疫功能的影响。结果 与阴性对照组比较,酵母β-葡聚糖破壁灵芝孢子粉胶囊对小鼠体重及脏器/体重比值无显著影响(P>0.05),但酵母β-葡聚糖破壁灵芝孢子粉胶囊中剂量组能显著增加小鼠抗体生成细胞数和单核-巨噬细胞吞噬能力(P<0.05);高剂量组能显著增加小鼠迟发型变态反应(delayed type hypersensitivity, DTH)、淋巴细胞转化、抗体生成细胞数、血清溶血素水平、单核-巨噬细胞吞噬能力及NK细胞活性(P<0.05)。结论 酵母β-葡聚糖破壁灵芝孢子粉胶囊可增强小鼠机体免疫力。