SAT-TB检测支气管肺泡灌洗液对涂阴肺结核的快速临床诊断价值

目的探究结核分枝杆菌RNA恒温扩增实时荧光检测技术(SAT-TB)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)对涂阴肺结核的诊断价值。方法对本院涂阴疑似肺结核患者进行筛查,共有80例患者进入最后分析,痰涂片连续3次阴性者进入研究,行培养法(Bactec MGIT 960)及SAT-TB检测,同时进行诊断。分别以培养法(BD960)及以临床诊断作为参考标准,计算SAT-TB法诊断涂阴肺结核的敏感度、特异度、阳性预测值及阴性预测值。结果以培养法(BD960)作为参考标准,SAT-TB诊断涂阴肺结核的敏感度为53.3%(8/15),特异度为88.2%(15/17),阳性预测值80.0%(8/10),阴性预测值68.1%(15/22)。以临床诊断作为参考标准,SAT-TB诊断涂阴肺结核的敏感度31.7%(20/63)、特异度88.2%(15/17)、阳性预测值91.0%(20/22)、阴性预测值25.9%(15/58)。SAT-TB的检测时间约2 h,快于培养法(BD960)的平均阳性报告时间14.1 d。结论 SAT-TB可通过检测BALF为涂阴肺结核患者提供一项敏感度相对于快速培养法(BD960法)较有优势的实验室辅助诊断方法。

艾滋病并发菌阴肺结核诊治中支气管肺泡灌洗液检测的应用进展

结核病是人类获得性免疫缺陷综合征（简称“艾滋病”）患者最常见的机会性感染和最主要的死亡原因之一.肺结核或肺外结核并发艾滋病后症状不典型,且患者痰菌常为阴性,给诊断和治疗时机的判断带来了很大困难,从而导致病情进一步恶化,死亡率增高.对于HIV阳性患者,进行结核病的筛查在病程初期尤为重要.近年来,随着纤维支气管镜技术的不断进步,支气管镜肺泡灌洗液检查被广泛地应用于艾滋病并发痰菌阴性肺结核的临床诊断中.笔者从细菌学方法、分子生物学方法、酶联免疫方法、生物化学检查、细胞因子检测等方面将支气管肺泡灌洗液在艾滋病并发菌阴肺结核的诊断和治疗中的作用进行综述.

联合应用Xpert MTB/RIF、SAT-TB及MTB/NTM PCR方法检测支气管肺泡灌洗液对痰涂阴性肺结核的快速诊断价值

目的评估联合应用多色巢式荧光定量PCR(Xpert mycobacterium tuberculosis and rifampicin sensitivity test,Xpert MTB/RIF)、RNA恒温扩增实时荧光检测(simultaneous amplification and testing of tuberculosis,SAT‐TB)、荧光探针分枝杆菌核酸检测(mycobacterium tuberculosis/non-mycobacterium tuberculosis polymerase chain reaction,MTB/NTM PCR)3种方法检测疑诊肺结核患者的支气管肺泡灌洗液标本对痰涂阴性肺结核的快速诊断价值。方法采集2019年10月至2021年9月杭州市红十字会医院收治的痰涂片至少3次阴性的疑诊肺结核的898例患者支气管肺泡灌洗液,以MIGT960液体培养阳性为金标准,评估Xpert MTB/RIF、SAT-TB及TB/NTM PCR在检出MTB感染、耐药结核感染以及NTM感染中的快速诊断价值。结果在对MTB的检出效能方面,Xpert MTB/RIF、SAT-TB及TB/NTM PCR对MTB的检出率分别为87.24%、80.73%、88.02%,3者均达到80%以上,其中SAT-TB的检出率最低,其余两者相当,差异有统计学意义(P<0.001)。而3者组合的平行试验对MTB的检出率最高达97.14%,差异有统计学意义(P<0.001)。在对耐药结核的检出效能方面,MIGT960液体培养及Xpert MTB/RIF分别检出8.59%及10.94%的耐药结核,虽Xpert较高,但差异无统计学意义(P=0.122);而两者组合的平行试验可以检出12.24%的耐药结核,显著高于单用Xpert的效能(P=0.019)。在对NTM的检出方面,MIGT960液体培养(14.03%)高于NTM-DNA(8.24%),差异有统计学意义(P<0.001),两者组合的平行试验的检出率更高(14.48%)。结论与传统细菌学检测方法相比,联合使用Xpert MTB/RIF、SAT-TB及MTB/NTM PCR可以快速、敏感地检测出痰涂阴性疑诊肺结核患者支气管肺泡灌洗液标本中的结核核酸,同步检出耐药,还同时可以鉴别MTB与NTM,缩短了确诊时间,给疑诊肺结核患者的早期快速诊断提供了有效的实验室方案,值得临床推广应用。

环介导等温扩增技术检测慢性阻塞性肺疾病伴下呼吸道感染病原菌397例价值研究

目的探讨环介导等温扩增技术(LAMP),即呼吸道病原菌核酸联合检测(13联)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)伴下呼吸道感染病原菌检测的临床应用价值。方法选取梅州市人民医院2018年1月至2020年12月住院病人临床诊断为COPD伴急性下呼吸道感染的病例397例,其中有入住普通病房的病例195例,需要呼吸机辅助通气而入住重症监护室的病例202例,每例病人均留取痰液/支气管肺泡灌洗液/支气管吸出物送检LAMP(13联)检测和病原菌培养,比较入住不同病房治疗的COPD伴下呼吸道感染病原菌经LAMP(13联)检测出的病原菌分布特点,计算LAMP(13联)检测的灵敏度和特异度,以及统计分析LAMP(13联)检测与传统培养方法检测结果的一致性,探讨LAMP(13联)方法对COPD伴下呼吸道感染的临床应用价值。结果LAMP检测方法对普通病房、重症监护室的COPD伴下呼吸道感染病原菌的检测阳性率分别为45.13%、47.03%,均比传统培养方法高(P<0.05);根据LAMP检测结果,入住普通病房的COPD病人感染病原菌排在前三名为流感嗜血杆菌34例(17.44%)、耐甲氧西林葡萄球菌25例(12.82%)、铜绿假单胞菌13例(6.67%)、肺炎链球菌13例(6.67%);入住重症监护室的COPD病人感染病原菌排在前三名的为耐甲氧西林葡萄球菌43例(21.29%)、流感嗜血杆菌14例(6.93%)、肺炎链球菌13例(6.44%);LAMP对普通病房和ICU病房的COPD病人感染病原菌检测的灵敏度分别为78.95%、85.29%,特异度分别为58.52%、60.71%;与传统培养方法比较,铜绿假单胞菌的Kappa值最高,为0.87。结论LAMP对普通病房及重症监护室的COPD伴下呼吸道感染病原菌的检测均具有敏感、快速、经济有效的特点,能为临床治疗选用有效抗生素提供证据,对COPD伴下呼吸道感染的临床治疗具有重要意义。

环介导等温扩增法对无痰或痰涂阴肺结核的诊断价值

目的:探讨环介导等温扩增法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测支气管肺泡灌洗液对无痰或涂阴肺结核的诊断价值。方法:采用前瞻性研究方法,纳入2021年4月至2022年4月重庆市巫山县人民医院收治且符合入组标准的无痰/痰涂片阴性疑似肺结核患者作为研究对象,均在支气管镜下刷片行荧光染色显微镜检查(简称“涂片镜检”),并取支气管肺泡灌洗液行LAMP和GeneXpert MTB/RIF(简称“Xpert”)检测结核分枝杆菌复合群DNA。以最终临床诊断为参照标准,分析3种方法在所有疑似肺结核患者中的检测效能。结果:研究共纳入232例患者,以最终临床诊断将患者分为涂阴/无痰肺结核患者(139例)和非结核肺病患者(93例)。LAMP、Xpert和涂片镜检对232例疑似肺结核患者的检测阳性率分别为43.53%(101/232)、43.97%(102/232)和8.19%(19/232)。以最终临床诊断为参照标准,LAMP、Xpert和涂片镜检对无痰/涂阴肺结核的检测敏感度分别为71.94%(100/139)、72.66%(101/139)和13.67%(19/139),特异度分别为98.92%(92/93)、98.92%(92/93)和100.00%(93/93),诊断一致率分别为82.76%(192/232)、83.19%(193/232)和48.28%(112/232),约登指数分别为0.709、0.716和0.137。结论:LAMP对无痰/涂阴肺结核患者支气管肺泡灌洗液的检测效能与Xpert基本一致,可明显提高早期诊断率;且LAMP操作简便、收费价格低廉,更适用于基层医疗机构推广应用。

RNA恒温扩增实时荧光检测技术对涂阴肺结核患者支气管肺泡灌洗液检测的价值

临床上无痰或涂阴疑似肺结核患者占肺结核患者的绝大多数，因结核分枝杆菌抗酸染色涂片镜检（简称“涂片法”）阳性率低、培养法耗时较长，均不能满足临床对肺结核快速诊断的需求。本研究收集2014年1月至2016年5月在江苏省南通市第六人民医院入院的223例疑似涂阴肺结核患者的支气管肺泡灌洗液（bronchial alveolar lavage fluid，BALF），分别进行涂片法、BACTEC MGIT 960快速液体培养（简称“MGIT960”）及RNA恒温扩增实时荧光（simultaneous amplification and testing for Mycobacterium tuberclosis，SAT-TB）检测。结果显示，MGIT960培养法和SAT-TB检测的阳性率分别为27．04％（43／159）和32．70％（52／159），均明显高于痰涂片的2．52％（4／159），差异均有统计学意义（χ^2值分别为37．97和49．94，P值均〈0．001）。SAT-TB与MGIT960培养法阳性率比较差异无统计学意义（χ^2=1．22，P=0．270）。若以MGIT960培养法阳性为诊断标准，SAT-TB诊断涂阴肺结核的敏感度为86．05％（37／43），特异度为98．15％（53／54）；阳性预测值为97．37％（37／38），阴性预测值89．83％（53／59）。但SAT-TB检测完成时间（1-2h）明显短于MGIT960培养法（2-6周）。因此，对疑似涂阴肺结核患者的BALF采用SAT-TB检测有较大的早期快速诊断价值。

支气管肺泡灌洗液RNA恒温扩增检测涂阴肺结核的诊断价值

目的：评价支气管肺泡灌洗液结核分枝杆菌RNA恒温扩增检测（ simultaneous amplification and testing for Mycobacterium tuberculosis, SAT-TB）对涂阴肺结核的诊断价值。方法选取涂阴肺结核组（观察组）95例和非结核病组（对照组）67例共计162例,两组患者均行纤维支气管镜检查,留取支气管肺泡灌洗液行荧光定量PCR（ FQ-PCR）,RNA恒温扩增检测（ SAT-TB）,结核菌快速培养,计算BALF 的SAT-TB对涂阴肺结核诊断的敏感度,特异度,阳性预测值,阴性预测值。结果 SAT-TB检测BALF对诊断涂阴肺结核的敏感度为53．7%,特异度为98．5%,阳性预测值为98．1%,阴性预测值为60．0%,BALF的SAT-TB检测在敏感度,特异度,阳性预测值,阴性预测值与FQ-PCR法相比较均无显著性差异（χ2值分别为3．572,0．341,0．679,1．603,P值均〉0．05）。结论 BALF中SAT-TB检测在涂阴肺结核中的敏感度,特异度均较高,且检测快速,对涂阴肺结核的快速诊断具有较大的应用价值。

肺泡灌洗液SAT-TB联合结核菌Xpert检测对诊断涂阴肺结核的价值

目的探讨肺泡灌洗液SAT-TB联合结核菌Xpert检测在诊断涂阴肺结核中的应用价值。方法选择68例涂阴肺结核患者为研究对象,取肺泡灌洗液分别进行SAT-TB、结核菌Xpert检测,比较这两种检查方法单独检测和联合检测的结果。结果在灌洗液结核菌培养阳性患者中,23例SAT-TB阳性、3例SAT-TB阴性,21例结核菌Xpert检测阳性、5例结核菌Xpert检测阴性。在灌洗液结核菌培养阴性患者中,13例SAT-TB阳性、29例SAT-TB阴性,20例结核菌Xpert检测阳性、22例结核菌Xpert检测阴性。SAT-TB、结核菌Xpert检测诊断的灵敏度分别为88.46%、80.77%,特异度分别为69.05%、52.38%,准确性分别为76.47%、63.23%;联合检测诊断的灵敏度为92.30%,特异度为78.57%,准确性为83.82%。联合检测诊断涂阴肺结核的灵敏度、特异度及准确性较单独检测均有显著提高(P<0.05)。结论肺泡灌洗液SAT-TB联合结核菌Xpert检测对诊断涂阴肺结核有一定应用价值,是一种简便、快速、高效的检查方法。

气管肺泡灌洗液行Xpert MTB/RIF检测对菌阴肺结核的研究价值

目的探究气管肺泡灌洗液行利福平耐药实时荧光定量核酸扩增技术(Xpert MTB/RIF)检测对菌阴肺结核的诊断效能。方法选取衡水市第三人民医院2017年2月至2018年4月期间收治的疑诊肺结核患者80例,均具有疑似肺结核的临床表现,支气管肺泡灌洗前3次痰涂片抗酸染色阴性或无痰。均取得气管肺泡灌洗液,接受Xpert MTB/RIF检测;同时行涂片法、培养法进行菌种鉴定及药物敏感试验(DST)。以肺泡灌洗液罗氏培养诊断标准、临床诊断标准为肺结核阳性标准,统计Xpert MTB/RIF检测对菌阴肺结核的诊断效能。结果80例疑诊肺结核患者中,培养确诊病例36例、临床诊断病例22例,即肺结核病组58例;余22例为非肺结核病组。肺结核病组中,36例确诊病例中Xpert MTB/RIF检测均为阳性,22例临床诊断病例中18例Xpert MTB/RIF检测为阳性。Xpert MTB/RIF检测诊断菌阴肺结核的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及准确性分别为93.10%、90.91%、96.43%、83.33%、92.50%,均高于80%,其诊断效能明显优于培养法、涂片法。以DST结果为金标准,Xpert MTB/RIF检测利福平耐药的敏感度、特异度为62.50%、89.29%,Xpert MTB/RIF检测利福平耐药与DST结果一致率为83.33%,Kappa检验一致性好。结论气管肺泡灌洗液行Xpert MTB/RIF检测诊断菌阴肺结核的临床价值高,并可快速判断是否利福平耐药。

RNA恒温扩增实时检测技术与荧光定量PCR联合检测肺泡灌洗液对痰涂阴性肺结核的快速诊断价值

目的通过采用RNA恒温扩增实时检测技术(FQ-PCR)两种不同类型靶标核酸检测方法联合检测支气管肺泡灌洗液(BALF)标本,评估联合应用对痰涂阴性肺结核的诊断价值。方法采集2014年11月-2016年5月医院收治的疑诊为肺结核并且痰涂片至少3次阴性的1 155例患者灌洗液标本,剔除295例未明确诊断病例,肺结核确诊患者672例纳入肺结核组,其他肺部疾病188例(包括43例非结核分枝杆菌疾病)纳入对照组,以临床诊断为金标准,计算SAT-TB与FQ-PCR联合检测的各类评价指标,并与单一SAT-TB、FQ-PCR、结核分枝杆菌快速培养(Bactec MGIT 960)、抗酸杆菌染色进行比较,绘制受试者工作特征曲线(ROC)进行分析比较。结果以临床诊断为"金标准",分别以AFS、MIGT960、SAT-TB、FQ-PCR、SAT-TB与FQ-PCR联合检测平行试验(单阳)、系列试验(双阳)为检验变量时,ROC曲线下面积(AUC)依次为0.507、0.501、0.670、0.660、0.734、0.658,准确性依次为29.45%、33.64%、58.67%、58.32%、67.40%、49.82%,SAT-TB和FQ-PCR单独检测或者联合检测其诊断价值均有统计学意义(P<0.001);对痰涂阴性肺结核病诊断价值比较,平行试验>SAT-TB>FQ-PCR>系列试验>涂片>MIGT960。结论与细菌学检测方法比较,SAT-TB与FQ-PCR联合检测痰涂阴性肺结核病诊断具有快速、敏感、鉴别结核分枝杆菌(MTB)与非结核分枝杆菌(NTM)等优势,缩短了确诊时间,提高准确率,给痰涂阴性肺结核患者提供一种有效辅助手段,值得临床推广应用。

儿童肺泡灌洗液中肺炎支原体RNA恒温扩增技术检测及临床应用

目的通过采用RNA恒温扩增（SAT）技术，对肺炎患儿的肺泡灌洗液标本进行检测，并结合体外培养实验，评估该技术检测活菌的能力，为SAT技术在肺炎支原体（MP）肺炎诊疗中的应用提供理论支持。方法收集天津市儿童医院2015年10月至2017年12月临床确诊为社区获得性肺炎的572例患儿的肺泡灌洗液，利用MP核酸定量和SAT技术检测MP感染情况，并对161份肺泡灌洗液进行分离培养，培养阳性菌液中持续加入高浓度抗生素，同时进行MP核酸定量和SAT技术检测。结果MP核酸定量和SAT技术的MP阳性检出率分别为74.7%（427/572）和71.9%（411/572），两种检测方法具有很高的一致性（χ2＝1.142，P＝0.285）。根据SAT技术的检测结果，572例肺炎患儿中男性患儿阳性率为72.7%（224/308），女性患儿阳性率为70.8%（187/264），不同性别患儿阳性率差异无统计学意义（χ2＝0.252，P＝0.616）。不同年龄患儿MP检出阳性率不同，婴幼儿（≤3岁）阳性率为56.6%（94/166），学龄前期和学龄期儿童（4～14岁）阳性率为78.1%（317/406），学龄前期和学龄期儿童的阳性率明显高于婴幼儿，差异有统计学意义（χ2＝26.811，P＝0.000）。通过SAT技术检测活菌的能力的实验发现，MP阳性培养液中连续5 d加入5 MIC阿奇霉素后，MP核酸定量检测阳性，SAT技术检测则为阴性。结论SAT技术具有高灵敏度和高特异性，并且可以鉴别＂死菌＂＂活菌＂，可以快速准确检测MP感染情况，并能有效评估临床治疗效果。

SAT在肺炎支原体肺炎诊断中应用价值分析

目的难治性肺炎支原体肺炎及重症肺炎病情重,并发症多,严重影响患儿健康及日后生活,需尽早明确诊断及治疗。本研究采用实时荧光核酸恒温扩增检测技术(simultaneous amplification and testing,SAT)对社区获得性肺炎患儿咽拭子及肺炎支原体肺炎患儿肺泡灌洗液标本进行检测,评估其在儿童肺炎支原体肺炎中应用价值。方法选取2017-09-01-2018-12-31郑州大学附属儿童医院住院的社区获得性肺炎患儿300例,并采用颗粒凝集法检测肺炎支原体血清抗体(pneumonia mycoplasma serum antibody,MP-Ab)、SAT检测肺炎支原体RNA;评估SAT在肺炎支原体肺炎临床诊断中的实用价值。结果SAT检测阳性共128例,其中肺炎支原体肺炎患儿120例,非肺炎支原体肺炎患儿8例;单份肺炎支原体血清抗体阳性125例,其中肺炎支原体肺炎91例,非肺炎支原体肺炎34例。SAT用于诊断肺炎支原体肺炎的真实性(约登指数=0.83)高于单份肺炎支原体血清抗体(约登指数=0.46);SAT用于诊断肺炎支原体肺炎时,与临床的一致性(Kappa值=0.84,P<0.001)高于单份肺炎支原体血清抗体(Kappa值=0.47,P<0.001)。56例肺炎支原体肺炎患儿进行肺泡灌洗检测,灌洗液阳性53例,咽拭子阳性51例,两种标本阳性检出率差异无统计学意义,χ2=2.322,P=0.128。结论SAT在肺炎支原体肺炎的诊断中应用价值高;SAT在不同类型标本中的肺炎支原体检出一致性好。