喉鳞状细胞癌中STK15蛋白和BUBR1蛋白的表达及相互作用

目的探讨STK15和BUBR1蛋白的表达与喉癌发生、发展的相关性以及喉癌组织中STK15和BUBR1蛋白的相互作用。方法选取40例病理诊断为喉鳞状细胞癌组织标本及癌旁正常组织标本,应用免疫组织化学SP法检测STK15和BUBR1蛋白的表达水平,应用免疫荧光双标实验判定STK15和BUBR1蛋白的共定位。结果 STK15蛋白平均光密度值喉癌组织高于癌旁正常组织(P<0.05),BUBR1蛋白平均光密度值喉癌组织低于癌旁正常组织(P<0.05),即喉癌组织中STK15蛋白表达水平高于癌旁正常组织,而BUBR1蛋白表达水平低于癌旁正常组织。免疫荧光双标结果表明STK15蛋白和BUBR1蛋白均在细胞质及细胞核中表达,且2种蛋白标记的荧光可以重叠,提示两者可能存在相互作用。结论 STK15蛋白高表达、BUBR1蛋白表达下调可能与喉癌的发生、发展相关。STK15和BUBR1蛋白可能相互作用,共同影响喉癌的发生、发展。

5-氨基水杨酸对人结肠癌细胞株HT-29增殖、凋亡以及细胞周期的影响

背景:溃疡性结肠炎相关结直肠癌(Uc CRC)是溃疡性结肠炎(UC)最严重的并发症,5-氨基水杨酸(5-ASA)能降低Uc CRC的发生风险。目的:探讨5-ASA对人结肠癌细胞株HT-29增殖、凋亡以及细胞周期的影响,明确5-ASA对Uc CRC的抑制作用。方法:以不同浓度(0、10、20、30、40 mmol/L)5-ASA作用于HT-29细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖情况;采用TUNEL法检测细胞凋亡情况;采用流式细胞术检测细胞周期;采用免疫组化法检测细胞有丝分裂调节因子Aurora B、BubR1蛋白表达。结果:5-ASA 10、20、30、40 mmol/L组HT-29细胞增殖抑制率、凋亡率随5-ASA浓度升高而升高(P<0.05)。5-ASA 30、40 mmol/L组G0/G1期细胞比例显著低于0、10、20 mmol/L组(P<0.05);5-ASA 0、10、20、30 mmol/L组S期细胞比例均显著低于40 mmol/L组(P<0.05);5-ASA 30、40 mmol/L组G2/M期细胞比例显著高于0、10、20 mmol/L组(P<0.05)。Aurora B、BubR1平均光密度(MOD)值随5-ASA浓度升高而降低(P<0.05)。5-ASA浓度与细胞增殖抑制率、凋亡率呈正相关(P<0.05),与Aurora B、BubR1 MOD值呈负相关(P<0.05)。Aurora B、BubR1 MOD值与细胞增殖抑制率、凋亡率、G2/M期细胞比例呈负相关(P<0.05),与G0/G1期细胞比例呈正相关(P<0.05)。Aurora B与BubR1 MOD值呈正相关(P<0.05)。结论:5-ASA可抑制HT-29细胞增殖并诱导凋亡,其机制可能与5-ASA抑制Aurora B、BubR1表达,继而影响细胞周期有关。

直结肠癌BUBR1的过度表达与TP53突变及微卫星状态关系提示其过度表达与染色体不稳定表型有关(英文)

在有丝分裂过程中BUBR1监视微管与着丝点的结合,是保证染色体均等分离的重要分子机制之一。BUBIB变异家谱研究及其敲除模型的研究表明,BUBR1缺陷与染色体不稳定性及肿瘤的发生直接相关。近来在数种人类肿瘤,对BUBR1蛋白过度表达有所报道。但在直结肠癌,BUBR1的过度表达是否与染色体不稳定性的发生有关目前仍无定论。在人类结直肠癌的遗传不稳定性主要表现为两种类型,染色体不稳定性及微卫星不稳定性,它们提示了两条独立的肿瘤发生路径。一般认为不存在高频度微卫星不稳定性表型的肿瘤通过染色体不稳定途径癌变。P53蛋白通过多种机制对维护遗传稳定性起到重要的作用,TP53基因突变经常与染色体不稳定现象并存。DNA倍体情况也是染色体不稳定研究不可缺少的指标。本研究采用免疫组织化学法检测了一组93例进展期散发结直肠癌BUBRI蛋白的表达情况,直接测序法检测TP53变异,高分辨率荧光标记微卫星不稳定检测技术检测微卫星状态,固相激光扫描细胞仪技术检测DNA倍体情况。我们分析了BLIBR1表达与三种反映遗传背景的因子的关系。BUBR1蛋白过度表达在人结直肠癌较为常见。在非高频度微卫星不稳定的结直肠癌,BUBR1蛋白过度表达率明显为高(P<0.01),在TP53基因突变的病例其过度表达率亦较高(P<0.05)。BUBR1蛋白的过度表达与DNA异倍体无统计学相关,但DNA异倍体病例的BUBR1过度表达有偏高倾向。BUBR1表达情况与常用的,临床病理学指标无统计学相关。BUBR1过度表达同微卫星状态及TP53突变的关系明确的提示,在人类散发结直肠癌,BUBR1蛋白过度表达与染色体不稳定状态有关.BUBR1过度表达作为一种常见的分子异常,对于肿瘤的早诊预防提供新的标志物,并可能成为治疗的新靶点。

C-myc通过调控BubR1影响食管鳞癌细胞对紫杉醇的敏感性

探讨C-Myc与有丝分裂期检查点蛋白BubR1的表达关系和对紫杉醇药物作用的可能影响。用免疫组化方法检测23例食管鳞癌组织标本中C-Myc和BubR1的表达水平,并通过免疫印迹的方法比较3株食管鳞癌细胞株ECA-109,KYSE150和KYSE180中C-Myc和BubR1的表达高低,分析相关性;将人BUB1b基因启动子上游约2000bp片段插入pSEAP2分泌型碱性磷酸酶报告质粒中构建为pSEAP2-BubR1-P2000,分别转染至3株鳞癌细胞内,检测启动子激活效果;在ECA-109细胞内过表达C-Myc后再转染pSEAP2-BubR1-P2000后,检测启动子的激活效果;免疫印迹方法检测C-Myc抑制剂10058-F4对BubR1蛋白表达的影响;通过MTT检测10058-F4干扰C-Myc后ECA-109细胞在梯度紫杉醇浓度下的生存率变化;最后通过DAPI染色观察单用C-Myc抑制剂,单用低浓度紫杉醇(100nM)或联用10058-F4和紫杉醇组的凋亡比例。结果发现在临床食管鳞癌标本和食管鳞癌细胞株中C-Myc和BubR1的表达有相关一致性;C-Myc高表达的细胞株中BubR1启动子活性的激活程度更强,并且过表达C-Myc后能进一步上调启动子活性;C-Myc特异性抑制剂10058-F4可以有效下调BubR1表达,并减低细胞在梯度紫杉醇作用下的细胞生存率。DAPI染色结果显示联用10058-F4和低浓度紫杉醇能明显增加细胞处于有丝分裂期的比率。在食管鳞癌细胞中C-Myc能上调有丝分裂期检查点蛋白BuR1的水平,并与食管癌对紫杉醇的敏感性相关,C-Myc可能通过上调BubR1表达而减低食管鳞癌对紫杉醇的反应。

癌基因c-myc对食管癌BubR1的调控

目的探讨癌基因c-myc对食管癌有丝分裂检查点效应蛋白BubR1的调控作用。方法将Bub1b基因启动子亚克隆至载体pSEAP2-Basic中,构建重组质粒pSEAP2-Bub1b-P2000,在Lipofectamine 2000的介导下,分别转染过表达c-myc的HEK-293细胞(经Ad-c-myc感染)和ECA-109细胞;转染6 h后,经c-myc抑制剂10058-F4作用ECA-109细胞。SEAP化学发光法检测各组细胞的ALP活性;采用RT-PCR和Western blot法分别检测抑制c-myc表达的ECA-109细胞中Bub1b基因mRNA转录和BubR1蛋白的表达水平。结果重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定构建正确;重组质粒转染过表达c-myc的HEK-293细胞和抑制c-myc表达ECA-109细胞的ALP活性明显升高(P<0.000 1);抑制c-myc表达可明显下调ECA-109细胞中Bub1b基因mRNA转录和BubR1蛋白的表达水平(P<0.05)。结论癌基因c-myc对食管癌细胞中BubR1的表达有正调控作用,为进一步研究BubR1在食管癌中发挥的作用奠定了基础。