基于miR-34a/Notch信号通路研究补肺益肾方对慢性阻塞性肺疾病大鼠模型免疫失衡和炎症反应的影响

目的:观察补肺益肾方(BYF)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠免疫功能及炎症反应的影响,并探讨微小RNA-34a(miR-34a)/果蝇双翅边缘缺刻同源基因(Notch)信号轴在其中的调控作用。方法:取SD大鼠72只,分为正常对照组、模型组、BYF组(3.7 g/kg)、miR-34a低表达组(miR-34a antagomir,4 nmol/kg)、miR-34a阴性对照组(antagomir-NC)、BYF^(+)miR-34a antagomir组(3.7 g/kg^(+)4 nmol/kg),每组12只;除正常对照组外,其余各组均用香烟暴露^(+)肺炎克雷伯杆菌感染法制备COPD模型。于造模成功后开始给药。观察大鼠一般行为;检测大鼠肺功能指标:用力肺活量(FVC)、第0.3秒用力呼气容积(FEV_(0.3))、肺阻力(R)、肺顺应性(Cdyn);血液分析系统检测肺泡灌洗液中炎症细胞数量;流式细胞仪检测外周血CD4^(+)/CD8^(+)、辅助性T细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)水平;qRT-PCR检测肺组织miR-34a、Notch mRNA表达;HE染色检测肺组织病理变化;Western blot检测肺组织Notch、IL-17、IL-6、Th17转录因子RoRγt和Treg转录因子Foxp3水平。结果:与正常对照组相比,模型组大鼠死亡、喘促、肺泡结构破坏严重,肺功能指标R、肺泡灌洗液白细胞、淋巴细胞和巨噬细胞数量、血清CD8^(+)/CD4^(+)、Th17/Treg、肺组织Notch mRNA及蛋白、IL-17、IL-6、RoRγt、Foxp3、RoRγt/Foxp3蛋白表达升高(P<0.05),FVC、FEV_(0.3)、Cdyn水平和miR-34a表达降低(P<0.05)。与模型组相比,BYF组大鼠死亡、喘促、肺泡结构破坏缓解,免疫功能趋于平衡,肺功能及miR-34a表达升高,炎症细胞数量、Notch相关通路蛋白表达降低,且上述指标变化差异均有统计学意义(P<0.05);miR-34a antagomir组大鼠死亡、喘促、肺泡结构破坏进一步加重,肺功能及免疫功能损伤进一步加重,miR-34a/Notch轴及相关指标变化与模型组一致,且差异有统计学意义(P<0.05)。BYF^(+)miR-34a antagomir组大鼠上述指标与BYF组相比结果均相反(P<0.05)。AntagomirNC组与模型组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:BYF可能通过上调miR-34a表达,抑制Notch通路激活,改善COPD大鼠炎症反应及免疫功能失衡。

调补肺肾三法调控慢性阻塞性肺疾病稳定期大鼠炎症反应的R值综合评价

目的采用R值综合评价法多指标综合评价调补肺肾三法(补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾)对慢性阻塞性肺疾病(COPD)稳定期大鼠全身系统性及肺脏局部炎症反应的调控作用。方法 120只大鼠随机分为对照组、模型组、补肺健脾组、补肺益肾组、益气滋肾组、氨茶碱组各20只,除对照组外,其余各组采用香烟熏吸联合细菌感染法制备COPD稳定期模型,于第9周起对照组、模型组给予2 ml生理盐水灌胃,其余各组分别给予补肺健脾方4.84 g/(kg·d)、补肺益肾方4.44 g/(kg·d)、益气滋肾方4.84 g/(kg·d)及氨茶碱2.3 mg/(kg·d),每日2次,灌胃至第20周。第20、32周检测全身系统性炎症指标和肺脏局部(肺泡灌洗液和肺组织)炎症指标,采用多指标R值综合评价法对上述指标进行综合评价。结果第20周和综合20、32周,调补肺肾三法对系统性炎症各指标具有明显的纠正作用(P<0.05或P<0.01);第32周,补肺益肾的纠正强度显著(P<0.01),其强度优于氨茶碱(P<0.05)。综合20、32周,纠正强度依次为补肺健脾、补肺益肾、益气滋肾、氨茶碱。第20周及综合20、32周,调补肺肾三法对肺脏局部炎症各指标的纠正强度显著(P<0.05或P<0.01)。结论调补肺肾三法和氨茶碱均可综合调节COPD炎症指标的表达,其中补肺健脾方在调节系统性及局部炎症反应方面均具有明显的优势,而补肺益肾方在调节系统性炎症反应方面具有较明显的远后效应。